DNA粗提取三次过滤目的

❶ DNA的粗提取和鉴定为什么要四次过滤第四次过滤有什么用

第一次过滤：过滤提取鸡血细胞核中的DNA(在滤液中),滤掉的是破碎的细胞结构（沉淀物）；
第二次过滤：过滤用2mol/L的NaCl充分溶解的DNA(在滤液中),滤去的是溶解度低的蛋白质等杂质（在沉淀物中）；
第三次过滤：过滤用0.14mol/L的NaCl析出的DNA（在沉淀物中）,滤去的是溶液中的杂质(在滤液中)；
第四次过滤：过滤再次用2mol/L的NaCl充分溶解的DNA(在滤液中),滤去的是溶解度低的蛋白质等杂质（在沉淀物中）；
第四次过滤进一步除杂并溶解DNA,为下一步用冷却的95%酒精析出DNA做准备.
有说三次过滤的,就是有的资料不考虑上边说的第一次过滤,不矛盾.

❷ 有关实验“DNA的提取及检测”的问题

实验准备工作：

1 所用离心管、枪头要洗净、烘干（最好灭菌）。

2 试剂配制：

1 M Tris-HCl (pH 8.0): 称取Tris-Base 121g, 加入约 ml 水在磁力搅拌器上搅拌，使其充分溶解后加入浓盐酸调整pH至8.0后加水定溶至1000 ml. 灭菌后于室温保存。

0.5 M EDTA (pH 8.0): 称取EDTA-Na2盐 187 g 加入约 800 ml水，在磁力搅拌器上边搅拌边加入固体NaOH，当EDTA和NaOH均完全溶解，溶液变清时其pH值刚好达到8.0左右，再用pH试纸略加调整即可, 灭菌后于室温保存。

5.0 M NaCl: 称取NaCl 300 g, 加入蒸馏水约800 ml 于磁力搅拌器上充分搅拌，约5分钟后停止搅拌，静止2~3分钟，倒出上清液，再加入100 ml蒸馏水重复前面的步骤，直到NaCl充分溶解后定溶至1000 ml., 灭菌后于室温保存。

酚：氯仿：异戍醇（25：24：1）的配制：可参考《分子克隆》亦可按如下方法配制取重蒸酚100 ml ，蒸馏水50 ml，8-羟基喹咛0.05g 加入500 ml玻璃烧杯于磁力搅拌器上边加热边搅拌，待酚达到水饱和后加入18 g Tris-Base，等Tris-Base 完全溶解后加入100 ml氯仿：异戌醇（24：1），搅拌10~20分钟，静止约10分钟，除去上层水相后，装入棕色瓶，最后加入20 ml 0.1M的Tris-HCl保护液于4℃保存。

DNA Buffer的配制：

1 M Tris-HCl (pH 8.0)
100 ml

0.5 M EDTA (pH 8.0):
100 ml

5.0 M NaCl:
300 ml

H2O
500 ml

灭菌后于室温下保存3个月左右，用时按1.5%往Buffer中加入CTAB，在电炉上烧开；在通风橱里加入1%的巯基乙醇( 现配现用)。

DNA的提取：

1 取2~5 g叶片或愈伤组织，加入适量液氮研碎，转入预冷的50ml离心管，加入20 ml DNA提取缓冲液充分摇匀，于65℃水浴60~90 min，中途轻轻摇匀两次。

2 加入15 ml 氯仿：异戍醇（24：1）轻轻摇匀10分钟，于BECKMAN离心机中4000 rpm离心15分钟。

3 取上清液于另一50 ml离心管加入10 ml 氯仿：异戍醇（24：1）重复步骤2。

4 吸上清液于一干净的50 ml 离心管，加入15 ml 冷冻的异丙醇，轻轻摇匀后于-20℃冷冻半小时，4000 rpm离心10分钟。弃上清液，加入5 ml 76%的乙醇（含10 mM

NH4Ac）浸泡5 h（或过夜），中途换乙醇2-3次。

5 弃乙醇风干沉淀约半小时，加入3.0 ml TE缓冲液（10 mM Tris-HCl pH 8.0；1 mM EDTA , pH 8.0），20 µl RNase A（10 mg/ml），37℃温浴过夜。

6 溶液转入一10 ml离心管，加入3.0 ml苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）充分颠倒混匀，4000 rpm离心15 min，吸上清液于另一10 ml的离心管中，（可重复一次）。

7 加入1 ml 5.0 M的NaCl和3.0 ml水饱和乙醚，充分混匀，4000 rpm离心5 min。

8 弃乙醚，用20 µl枪头挡住离心管管口内侧，用力下压枪头，使枪头与管壁间形成一狭缝，让下清液从缝中流入另一10 ml离心管。

9 加入5 ml冷冻的异丙醇，轻轻摇匀后于-20℃冷冻半小时，4000 rpm离心10分钟。弃上清液，加入3 ml 70%的乙醇浸泡4~6 h（或过夜），中途换乙醇2-3次。风干乙醇，加入500 µl TE溶解，或浸在乙醇中长期保存。

DNA检测

1 取DNA原液15 µl稀释至3.0 ml，用UV-1601型紫外分光光度计测定230 nm、 260 nm及280 nm的吸光值。

高质量的DNA要求：A260/A230>2.0； 1.7<A260/A280<1.9

2 将DNA原液适当稀释后，用1 Χ TAE，0.8%琼脂糖凝胶2V/cm电泳1 h进行质量检测。

3 向一定量的DNA中加入限制性内切酶EcoR I至4-5U/μg DNA，37℃消化过夜，用0.5 Χ TBE，0.8%琼脂糖凝胶2.5V/cm电泳3 h进行检测。

CTAB法微量提取DNA

1. 药品的配制:

CTAB提取液：

(1)100mM Tris-HCl(PH 8.0),1.5M NaCl,50mM EDTA(PH 8.0)

(2)1% PVP,2% CTAB

(3)取少许(1)加到(2)中，搅拌成糊状,后加(1)至足量,65℃水浴充分溶解备用。使用前要在65℃温浴一会儿，然后加入1-4%巯基乙醇,混均匀。

苯酚：氯仿：异戊醇（25∶24∶1）： 重蒸酚65℃水浴溶解，在烧杯中加入80ml温热的蒸馏水，加入少许8-羟基喹啉，溶解后加入100ml重蒸酚，再加入100ml氯仿：异戊醇（24：1），加入20克Tris Base，磁力搅拌器上搅拌1.5 h左右至停止搅拌后很快分层，然后装入棕色瓶中，4℃冰箱中储存备用。

2. 材料的采取与保存：

在超净工作台上，取试管苗叶片，放入无菌的1.5 ml离心管中，置于冰盒中，然后把装有叶片的离心管一起装在纱布袋中，置液氮中冷冻10分钟，取出后置于—70℃冰箱中可长期保存，需要用时，取出置于冰盒中。

3．DNA的粗提

在装有叶片的离心管中加入石英砂少许（约0.07克），用事先灭过菌的—20℃冰箱中预冷的尖头玻棒将材料戳到底部，先压后研磨，研细后加入600 ul CTAB提取液，再继续研磨一会儿使其悬浮均匀，然后在65℃水浴锅中温浴60-90分钟，隔30分钟取出上下轻轻颠倒几次，水浴之后，加入700ul苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），，上下晃动10分钟以上，其间置于37℃水浴锅中温浴一会（冬季），使之充分混匀，然后10000-12000rpm离心5-10分钟，吸取上清液转至另一离心管中，加入60 ul 5M NaCl，再加入-20℃冰冻无水乙醇1ml，轻轻颠倒数次，混合均匀后冰冻30分钟沉淀DNA，然后8000-10000rpm离心5分钟，弃上清液，加入1 ml 70%酒精浸泡2小时或过夜，8000rpm离心5分钟,弃酒精之后在工作台上风干DNA，注意不要过干，否则会使以后溶解困难。

4. DNA的纯化：

向风干后的DNA中加入500 ul 1xTE，37℃水浴15-30分钟至DNA完全溶解，然后加入700ul苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），上下颠倒离心管约10分钟，至充分混匀，其间置于37℃水浴锅中温浴一会（冬季）；10000-12000 rpm离心5分钟，吸取上层液至另一离心管中，加入700ul氯仿：异戊醇（24：1），颠倒10分钟（方法同上），10000 -12000rpm离心5分钟，吸取上层液至另一离心管中，加入60 ul 5M NaCl，再加入1ml冷冻的无水乙醇，轻轻颠倒，然后在-20℃冰箱中置30分钟沉淀DNA，8000-10000 rpm离心2-3分钟，使DNA分散状紧贴在管壁上，弃酒精，加70%酒精1ml浸泡,2小时后换一次,后浸泡过夜，8000rpm离心3分钟后弃酒精，风干，加50-100ul1xTE充分溶解，然后每管加5ul 5mg/ml Rnase,37℃水浴6小时或过夜。

5. DNA检测:

（1）0.8%琼脂糖凝胶电泳30-60分钟：

TAE 100ml，EB 30ul，样品3-5ul，电压90V，

观察A：DNA是否跑出，带型是否整齐划一；B：RNA是否除尽

（2）分光光度计检测D260/D280的比值：在1.8-2.0的范围内认为纯度较高上述方法提取的DNA比值在1.65-1.95之间。浓度=30000xOD260（DNA样品为5ul时）。

不知道你说的是动物的还是植物的，我当年做的是动物的。用的是鸡血，因为在学校，没有生物书，只能粗略的查一下了
1、实验中两次使用蒸馏水。
第一次，取血细胞液时加蒸馏水，目的是让血细胞吸水涨破
第二次是在析出含DNA的粘稠物后，目的是稀释NACL溶液，使DNA逐渐析出
2、加3次NACL，
第一次，在溶解核内DNA时，加入NACL后充分搅拌，加速染色质中DNA与蛋白质的分离，使DNA充分游离并融入NACL中
第二次在DNA粘稠物在溶解时，家NACL是使DNA再溶解
第三次是在DNA的鉴定中，目的是溶解DNA
3、过滤3次
第一次在提取血细胞核物质时进行过滤，取得的滤液中含有染色质，而滤出的是细胞膜、核膜和细胞器等的破碎结构
第二次在滤去含有DNA粘稠物只能够，滤液中含有仍然溶解在NACL中的细胞中的一些成分，如蛋白质等
第三次在过滤含DNA的2mol/L的NACL溶液时，过滤后的滤液中含有DNA

❸ DNA的粗提取中，血细胞胀破后的滤液中，DND应该是染色质的状态，它有没有溶解

1、实验中两次使用蒸馏水.
第一次,取血细胞液时加蒸馏水,目的是让血细胞吸水涨破
第二次是在析出含DNA的粘稠物后,目的是稀释NACL溶液,使DNA逐渐析出
2、加3次NACL,
第一次,在溶解核内DNA时,加入NACL后充分搅拌,加速染色质中DNA与蛋白质的分离,使DNA充分游离并融入NACL中
第二次在DNA粘稠物在溶解时,家NACL是使DNA再溶解
第三次是在DNA的鉴定中,目的是溶解DNA
3、过滤3次

❹ dna的粗提与鉴定实验为什么加入2m的nacl后不过滤就加蒸馏水 博客

1、实验中两次使用蒸馏水。
第一次，取血细胞液时加蒸馏水，目的是让血细胞吸水涨破
第二次是在析出含DNA的粘稠物后，目的是稀释NACL溶液，使DNA逐渐析出
2、加3次NACL,
第一次，在溶解核内DNA时，加入NACL后充分搅拌，加速染色质中DNA与蛋白质的分离，使DNA充分游离并融入NACL中
第二次在DNA粘稠物在溶解时，家NACL是使DNA再溶解
第三次是在DNA的鉴定中，目的是溶解DNA
3、过滤3次
第一次在提取血细胞核物质时进行过滤，取得的滤液中含有染色质，而滤出的是细胞膜、核膜和细胞器等的破碎结构
第二次在滤去含有DNA粘稠物只能够，滤液中含有仍然溶解在NACL中的细胞中的一些成分，如蛋白质等
第三次在过滤含DNA的2mol/L的NACL溶液时，过滤后的滤液中含有DNA

❺ DNA提取中整个实验过程中，一共有几次离心每次离心的作用是什么

最少是5次哦，第一次是细胞破碎后除去固体物质。第二次是用酚/氯仿/异戊醇抽提后，目的是除去变性的蛋白质。第三次是用氯仿/异戊醇再次抽提后，目的是进一步除去蛋白质和残余的酚。第四次是DNA用异丙醇或者乙醇沉淀后，目的是使DNA沉淀下来，弃去其他溶液。第五次是在用70%乙醇洗涤后，目的还是沉淀DNA，弃去洗涤的乙醇。当然这是基本次数，一般这些都会根据具体实验情况来调整的。比如如果溶液中盐离子含量过高，最后乙醇洗涤次数会相应增加，而离心次数自然也会增加。

❻ 关于DNA的粗提取和鉴定的问题

1、实验中两次使用蒸馏水。
第一次，取血细胞液时加蒸馏水，目的是让血细胞吸水涨破
第二次是在析出含DNA的粘稠物后，目的是稀释NACL溶液，使DNA逐渐析出
2、加3次NACL，
第一次，在溶解核内DNA时，加入NACL后充分搅拌，加速染色质中DNA与蛋白质的分离，使DNA充分游离并融入NACL中
第二次在DNA粘稠物在溶解时，家NACL是使DNA再溶解
第三次是在DNA的鉴定中，目的是溶解DNA
3、过滤3次
第一次在提取血细胞核物质时进行过滤，取得的滤液中含有染色质，而滤出的是细胞膜、核膜和细胞器等的破碎结构
第二次在滤去含有DNA粘稠物只能够，滤液中含有仍然溶解在NACL中的细胞中的一些成分，如蛋白质等
第三次在过滤含DNA的2mol/L的NACL溶液时，过滤后的滤液中含有DNA
(这可是纯手打的，绝对正确，有不明白的再问我）QQ7428936

❼ 动物肝脏的DNA提取过程中多次离心的目的分别是什么

一般是三次离心，离心方法和目的如下。

1、第一次离心是在细胞破碎后，目的是除去溶液中的固体杂质。

2、第二次离心是在第一次离心的上清中加入苯酚/氯仿/异戊醇溶液以后，目的是将DNA和蛋白质等杂质分离。

3、第三次离心是在第二次离心的上清中加入氯仿/异戊醇溶液之后，目的是进一步纯化DNA、并除去上一步中引入的苯酚。

(7)DNA粗提取三次过滤目的扩展阅读：

离心技术的应用：

离心处理的目的是为了使密度不同的物质分开，从而提纯需要的物质。例如在人红细胞细胞膜的提纯。还有在验证DNA是遗传物质，DNA的复制方式等等都用到离心法。

离心技术，是蛋白质、酶、核酸及细胞亚组分分离的最常用的方法之一，也是生化实验室中常用的分离、纯化或澄清的方法。尤其是超速冷冻离心已经成为研究生物大分子实验室中的常用技术方法。

❽ dna的粗提取中的几次过滤的目的是什么

1． DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。DNA在0．14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。 2． DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA