薄膜过滤1000ml

① 什么叫薄膜过滤法，具体怎么操作呀

5.7.7 薄膜过滤法：
5.7.7.1 本法适用于有抗菌作用或大容量的供试品。
5.7.7.2 按集菌使内用规程安装好集菌仪。
5.7.7.3 取供试品擦拭消容毒后，除去塑料盖，插好导管，进行抽滤，滤液从排液管排出。
5.7.7.4 同法操作将培养基抽到全封闭式集菌培养器中。
5.7.7.5 取需气菌、厌气菌培养基和真菌培养基各1管，同法操作加入相应的溶剂作阴性对照。
5.7.7.6 阳性对照管应根据供试品特性在接种橱内加入相应对照菌液1ml。（抗细菌药物以金黄色葡萄球菌为对照菌，抗厌氧菌药物以生孢梭菌为对照菌，抗真菌药物以白色念珠菌为对照菌）。
5.7.7.7 需气菌、厌气菌培养基管置30-35℃培养箱中，真菌培养基管置20-25℃培养箱中各培养7日；阳性对照管细菌应在培养24-48小时，真菌应在培养24-72小时有菌生长。

② 药品领域的微生物检测及标准

中国药典微生物限度检查法，为《中国药典》附录收载的关于药品微生物检查的法定方法。药品的不同剂型的微生物检测标准不同，具体如下：

1、制剂通则品种

制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂应符合无菌检查法规定。

2、口服给药制剂

细菌数每1g不得过l000cfu。每lml不得过100cfu。

霉菌和酵母菌数每lg或lml不得过100cfu。

大肠埃希菌每1g或lml不得检出。

3、耳、鼻及呼吸道吸入给药制剂

细菌数每1g、lml或l0cm²，不得过100cfu。

霉菌和酵母菌数每1g、lml或l0cm²，不得过10cfu。

金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌每1g、lml或l0cm²不得检出。

大肠埃希菌鼻及呼吸道给药的制剂，每1g、lml或l0cm²，不得检出。

4、阴道、尿道给药制剂

细菌数每1g、lml或l0cm²，不得过100cfu。

霉菌数和酵母菌数每1g、lml或l0cm²应小于10cfu。

金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌每1g、lml或l0cm²，不得检出。

5、直肠给药制剂

细菌数每1g不得过l000cfu。每lml不得过100cfu。

霉菌和酵母菌数每1g或lml不得过100cfu。

金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌每lg或lml不得检出。

6、其他局部给药制剂

细菌数每1g、lml或l0cm²不得过100cfu。

霉菌和酵母菌数每1g、lml或l0cm²不得过100cfu。

金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌每1g、lml或l0cm²不得检出。

7、含动物组织

含动物组织（包括提取物）的口服给药制剂每10g或10ml还不得检出沙门菌。

8、兼用途径制剂

应符合各给药途径的标准。

(2)薄膜过滤1000ml扩展阅读

微生物限度检查法的注意事项：

1、当建立产品的微生物限度检查法时，应进行控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的控制菌检查。若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检查方法应重新验证。

2、检查项目应当包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

3、微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。

4、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

5、除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30℃～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23℃～28℃。

6、检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10c㎡ 为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。

③ 阿洛西林钠的中国药典2010版阿洛西林钠

阿洛西林钠
Aluoxilinna
Azlocillin Sodium
C20H22N5NaO6S 483.47
该品为（2S，5R，6R)-3，3-二甲基-6-[(R)-2-（2-氧代-1-咪唑烷甲酰氨基）-2-苯乙酰氨基]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3，2，0]庚烷-2-甲酸钠盐。按无水物计算，含C20H23N5O6S不得少于90.0%。
【性状】该品为白色或类白色粉末或疏松块状物；无臭，味微苦，有引湿性。
该品在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙酸乙酯或丙酮中不溶。
比旋度取该品，精密称定，加水溶解并定量稀释成每1ml中含10mg的溶液，依法测定（附录ⅥE），比旋度为+170°至+200°。
【鉴别】⑴在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
⑵该品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集773图）一致。
⑶该品显钠盐的火焰反应（附录Ⅲ）。
【检查】酸碱度取该品，加水制成每1ml中含0.1g的溶液，依法测定（附录ⅥH），pH值应为6.0～8.0。
溶液的澄清度与颜色取该品5份，各0.56g，分别加水5ml溶解后立即观察，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录ⅨB）比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色3号标准比色液（附录ⅨA 第一法）比较，均不得更深。
有关物质取该品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释成每1ml中约含阿洛西林0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，用流动相定量稀释制成每1ml中含阿洛西林10μg的溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%～25%；再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的3/4（1.5%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（3.0%）。
阿洛西林聚合物照分子排阻色谱法（附录VH）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用葡聚糖凝胶G-10（40～120μm）为填充剂，玻璃柱（1.0cm× 30cm），流动相A为pH7.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸氢二钠61ml和0.05mol/L磷酸二氢钠溶液39ml，混合均匀，滤过）。流动相B为水，流速每分钟1.5ml，检测波长为254nm，量取0.2mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液100μl，注入液相色谱仪，分别以流动相A，B进行测定，记录色谱图。按蓝色葡聚糖2000峰计算理论板数均不低于500，拖尾因子均应小于2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间比值应在0.93～1.07之间，对照溶液主峰与供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0.93～1.07之间。称取阿洛西林钠约0.4g置10ml量瓶中，用0.04mg/ml的蓝色葡聚糖2000溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。量取100μl注入液相色谱仪，用流动相A进行测定，记录色谱图。高聚体的峰高与单体与高聚体之间的谷高比应大于2.0。另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液100μl，连续进样5次，峰面积的相对标准偏差应不大于5.0%。
对照溶液的制备 取阿洛西林对照品适量，精密称定，加0.5%碳酸氢钠溶液适量（每6.25mg约加0.5%碳酸氢钠溶液1ml）使溶解，再加水溶解并定量制成每1ml中约含阿洛西林50µg的溶液。
测定法 取该品约0.3g，置10ml量瓶中，加水适量，使溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。立即精密量取100μl注入液相色谱仪。以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图。另精密量取对照溶液100μl注入液相色谱仪，以流动相B为流动相进行测定，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，含阿洛西林聚合物以阿洛西林计不得过0.30%。
残留溶剂 照残留溶剂测定法（附录Ⅷ P）测定。
色谱条件与系统适用性试验以100%聚二甲基硅氧烷为固定液（或固定液极性相近）的毛细管柱为色谱柱，柱温：程序升温，30℃维持7分钟，以每分钟50℃升温至180℃，维持5分钟。氢火焰离子化检测器（FID），检测器温度为250℃，进样口温度为200℃，顶空温度为85℃，顶空时间为30分钟，进样针温度为100℃，传输线温度105℃，载气为氮气。取对照品溶液顶空进样，按乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、丁酮（内标）和乙酸乙酯顺序出峰，各成分峰之间的分离度均应符合要求。
内标溶液的制备取丁酮适量，用无有机溶剂的水稀释成每1ml中约含250µg的溶液，作为内标溶液。
系统适用性溶液的制备取对照品溶液，量取5.0ml置顶空瓶中，密封瓶口，作为系统适用性溶液。
供试品溶液的制备取供试品约0.5g，精密称定，置顶空瓶中，精密加入内标溶液5ml使溶解，密封瓶口，作为供试品溶液.
对照品溶液的制备分别精密称取二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇与异丙醇各适量，用内标溶液定量稀释成规定浓度的溶液，作为混合对照品储备液，混合对照品储备液中各溶剂的浓度分别为每1ml中含二氯甲烷60mg、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇各0.5mg。精密量取混合对照储备液5ml，置顶空瓶中，密封瓶口，作为对照品溶液。
测定法分别取供试品溶液与对照品溶液顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，应符合规定。
水分取该品，照水分测定法（附录ⅧM 第一法A）测定，含水分不得过2.0%。
异常毒性取该品，加灭菌注射用水制成每1ml中含60mg的溶液，依法检查（附录ⅪC），按静脉注射法给药，应符合规定。
细菌内毒素取该品，依法检查（附录ⅪE），每1mg阿洛西林中含内毒素的量应小于0.07EU。
无菌取该品，加0.9%无菌氯化钠溶液使溶解（溶液浓度：0.01g/ml），用薄膜过滤法处理，冲洗液用量不少于1000ml/膜，分次冲洗后，在硫乙醇酸盐流体培养基管中加入1mlβ-内酰胺酶，依法检查（附录ⅪH），应符合规定。
可见异物取该品5份，各0.56g，分别加不溶性微粒检查用水5ml，使溶解，依法测定，应符合规定。
【含量测定】照高效液相色谱法（附录ⅤD）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（取无水磷酸氢二钾4.09g与磷酸二氢钾0.58g，加水溶解并稀释至1000ml)-乙腈（85:15）为流动相；检测波长为210nm。分别称取氨苄西林对照品和阿洛西林对照品适量，加0.5%碳酸氢钠溶液适量（每6.25mg阿洛西林约加0.5%碳酸氢钠溶液1ml）助溶后用流动相溶解并制成每1ml中约含氨苄西林6μg和阿洛西林5μg的混合溶液，量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。氨苄西林峰与阿洛西林峰的分离度应大于10.0。理论板数按阿洛西林峰计算不低于1500，阿洛西林峰与相邻杂质峰的分离度应符合规定。
测定法取该品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释成每1ml中含阿洛西林0.25mg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿洛西林对照品适量，精密称定，加0.5%碳酸氢钠溶液适量（每6.25mg约加0.5%碳酸氢钠溶液1ml）助溶后，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品中C20H23N5O6S的含量。
【类别】β-内酰胺类抗生素，青霉素类。
【贮藏】密封，在干燥处保存。
【制剂】注射用阿洛西林钠。

④ 净水器净化出来的水达到什么标准呢

还是要看滤芯。但是要能直饮，就必须达到国家饮用水标准。

⑤ 纯化水微生物限度中用薄膜过滤法检测是不是必须用稀释液即稀释液-氯化钠蛋白胨缓冲液。

是的。我们实验过程中用PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲溶液做稀释剂的，也可以用生理盐水做版稀释剂。在实验过程中每权张过滤膜不可超过1000ml的稀释剂冲洗量。将纯水倒入薄膜过滤后，在放入培养皿里之前，还需要加缓冲液冲洗薄膜，冲洗量可以每张膜控制在100-200ml。然后用无菌镊子取出过滤膜，贴于培养基上，去除气泡。

⑥ 砂当量试验购买的高浓度冲洗液怎么稀释

是的。我们实验过程中用PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲溶液做稀释剂的，也可以用生理盐水做稀释剂。在实验过程中每张过滤膜不可超过1000ml的稀释剂冲洗量。将纯水倒入薄膜过滤后，在放入培养皿里之前，还需要加缓冲液冲洗薄膜，冲洗量可以每张膜控制在100-200ml。然后用无菌镊子取出过滤膜，贴于培养基上，去除气泡。

⑦ 硫酸黏菌素的中国药典

硫酸多黏菌素E
书页号：中国药典2005年版二部p729
[修订]
无菌 取本品，加 0.9%无菌氯化钠溶液使溶解（溶液浓度以多粘菌素计为1.5万单位/ml），用薄膜过滤法处理，冲洗液用量每膜不少于1000ml，分次冲洗后，以大肠埃希菌为阳性对照菌，依法检查（附录Ⅺ H），应符合规定（供注射用）。
【含量测定】 精密称取本品适量，加 pH6.0磷酸盐缓冲液溶解并定量稀释制成高低剂量分别为每1ml中约含4000单位及2000单位的供试品溶液，照抗生素微生物检定法（附录ⅪA）测定。检定菌为大肠埃希菌CMCC(B)44103；培养基为营养琼脂培养基，调节pH值使灭菌后为6.5～6.6；缓冲液为pH6.0磷酸盐缓冲液；培养温度为35～37℃，培养时间为16～18小时。 1万多黏菌素单位相当于1mg多黏菌素B。
【制剂】 （1）注射用硫酸多黏菌素B （2）复方多黏菌素B软膏
[增订]
【鉴别】 （2）在硫酸多黏菌素B组分测定项下记录的色谱图中，供试品溶液四个主组分峰的保留时间应与标准品溶液(a)四个主组分峰的保留时间一致。
【检查】 硫酸多黏菌素B组分 照高效液相色谱法（附录ⅤD）测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶（5μm）为填充剂（色谱柱的尺寸为250×4.6mm），以硫酸钠溶液（取4.46g无水硫酸钠溶解在900ml水中，用稀磷酸调节pH值为2.3后用水稀释到1000ml）－乙腈（80：20）为流动相；流速为每分钟1ml；柱温30℃；检测波长为215nm。取对照溶液(a) 20μl注入液相色谱仪，记录色谱图,多黏菌素B1的保留时间约为35分钟，多黏菌素B2、多黏菌素B3、多黏菌素B1-I与多黏菌素B1的相对保留时间分别约为0.5、0.55、0.8，多黏菌素B2和多黏菌素B3色谱峰间的分离度应不小于3.0。
测定法 取本品50mg，精密称定，用乙腈-水溶液（20:80）溶解，并定量稀释至100ml，作为供试品溶液。另精密称取硫酸多黏菌素B标准品50mg，用乙腈－水溶液（20:80）溶解并定量稀释至100ml，作为标准品溶液(a)；取1.0ml标准品溶液(a)，置100ml量瓶中，用乙腈－水溶液（20:80）稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液(b)。分别取上述三种溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至最大组分多黏菌素B1峰保留时间的1.4倍。量取多黏菌素B2、多黏菌素B3、多黏菌素B1-I与多黏菌素B1的峰面积，按下式，按干燥品计算，多黏菌素B3的含量不得过6.0%，多黏菌素B1-I的含量不得过15.0%，多黏菌素B1,B2,B3和B1-I的总含量不得少于80%。
式中：
CBi = 多黏菌素 Bi的百分含量；
ABi = 供试品溶液中多黏菌素Bi在色谱图中的峰面积；
m1 = 供试品溶液中被检测物的重量（mg），按干燥品计；
BBi = 标准品溶液(a)中多黏菌素Bi在色谱图中的峰面积；
m2 = 标准品溶液(a)中硫酸多黏菌素B的重量（mg）；
DBi = 多黏菌素Bi在硫酸多黏菌素B标准品中的标示百分含量。
有关物质 多黏菌素组分测定项下供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，按面积归一化法计算，单个杂质不得过3.0%，杂质总量不得过17.0%（供试品溶液中任何小于标准品溶液（b）主峰面积0.7倍的峰可忽略不计）。
硫酸盐 取本品约0.250g，精密称定，加水100ml使溶解，用浓氨溶液调节pH值至11，精密加氯化钡滴定液(0.1 mol/L)10ml及酞紫指示液5滴，用乙二胺四乙酸二钠滴定液(0.05mol/L)滴定，注意保持滴定过程中的pH值为11，滴定至紫色开始消退，加乙醇50ml，继续滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml氯化钡滴定液(0.1mol/L)相当于9.606mg硫酸盐（SO4）。本品含硫酸盐按无水物计算应为15.5%～17.5%。
重金属 取炽灼残渣检查下遗留的残渣，依法检查（附录Ⅷ H 第二法），含重金属不得过百万分之二十。
微生物限度 取供试品10g，加无菌pH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，反复振摇，得到供试品溶液。细菌数、霉菌数和酵母菌数：取供试品溶液10ml，依法检查（附录ⅪJ 薄膜过滤法），以无菌pH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液为冲洗液，每膜冲洗1000ml，并大肠埃希菌[CMCC(B) 4]为阳性对照，应符合规定。控制菌：分别取供试品溶液10ml，按菌落计数项下方法，用薄膜过滤法处理，依法检查（附录ⅪJ 薄膜过滤法），应符合规定（供外用制剂用）。

⑧ 复方氨酚烷胺片的微生物限度检查采用薄膜过滤法如何操作可以顺利滤过

1. 设备、仪器
1.1 无菌室 微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。
1.1.1 操作间 操作间应安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9Pa。操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。
1.1.2 缓冲间 缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。
1.1.3 在每次操作前、后，用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然后启动层流净化装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。
1.1.4 无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～350C预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上。在30～350C培养箱内倒置培养48h，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。
1.2 仪器
1.2.1 恒温培养箱（30～350C）、生化培养箱（23～280C）、电冰箱、蒸汽灭菌器。
1.2.2 玻璃器皿 烧杯、培养皿、量筒、试管及塞、吸管。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。玻璃器皿均应用牛皮纸（或双层报纸）严密包裹置蒸汽灭菌器高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干。或于160℃干热灭菌2h，备用。
2 培养基及其制备方法
2.1 营养琼脂培养基：取营养琼脂培养基34g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。
2.2 玫瑰红钠琼脂培养基：取玫瑰红钠琼脂培养基30.5g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。
2.3 胆盐乳糖培养基：取胆盐乳糖培养基36g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。
3 稀释剂
3.1 0.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃灭菌20分钟。
3.2 PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。
4 供试液的制备
4.1 取供试品10g，加经干热灭菌的5%吐温-80 0.2ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml，边加边振摇使成混悬液，静止5分钟使分层，倾取上清液置离心机中500r/min离心5分钟，取上清液作为供试品溶液。
5 检查方法
采用薄膜过滤法，滤膜孔径为0.45um，直径为50mm。滤膜及滤器在使用前采用121℃高压灭菌30钟。试验过程中，应保持滤膜前后的完整性。将制备好的供试液过滤，然后用100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（注意保持供试品溶液覆盖整个滤膜表面）。冲洗后，用镊子取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养。细菌于30～35℃培养48小时，霉菌于23～28℃培养72小时。

⑨ 薄膜过滤法原理

薄膜过滤法

采用薄膜过滤法，滤膜孔径不大于0.45um，直径约为50mm。选择滤膜材质时候应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用后，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润洗滤膜，供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml。每片滤膜的总过滤量不宜过大，以避免滤膜上的微生物受损伤。

取相当于每张滤膜含1克或1ml供试品的供试液，加至适宜的稀释剂中，混匀过滤。若供试品每1克或1ml所含的菌数比较多时，可取适宜稀释级的供试液1ml，过滤。用PH无菌氯化钠——蛋白胨缓冲液或其它适宜的冲洗液冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法和冲洗量同“计数方法的验证”，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。每种培养基至少制备一张滤膜。

阴性对照实验

取实验用的稀释液1ml，照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。

培养和记数：

培养条件和记数方法同平皿法，每片滤膜上的菌数不应超过100个

菌数报告规则

以相当于1克或1ml供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌生长以<1报告菌数（每张滤膜过滤1g或1ml供试品），或以<1

乘于稀释倍数的值报告菌数。

⑩ 微生物薄膜过滤法，夹膜技巧

（1）验证试验方法：试验原理同前述薄膜过滤法。验证供试品对薄膜过滤法有抑细菌和抑真菌特性时，与实际的无菌检查相同，在同一型号的每个过滤器或过滤筒内过滤规定定量的供试品（容器数及每容器的过滤体积），用淋洗液淋洗滤膜至少3次，每次淋洗液体积为100ml，在最后一次淋洗液中，接入验证用菌种（接种量为10—100CFU）；另取一过滤器或滤筒，不过滤供试品，重复以上淋洗操作，作为阳性对照。根据具体情况，可将整张滤膜或半张滤膜转移至100ml的指定验证用培养基内，或将培养基加入到装有滤膜的滤筒内。分别对表中所列菌种及相应的培养基逐一进行验证，并将容器置于适当的温度下培养，培养时间不超过14d。如果使用新的滤膜或滤过器（包括不同厂家或批号、型号），则要按上述薄膜过滤法的要求做 , 组试验，即样品试验组、蛋白胨对照组和阳性对照组重新进行验证确认。
（2）验证结果评价：如果供试品培养基容器内的培养基内明显可见微生物生长（混浊），并且与阳性对照容器内的培养结果相似，则在无菌检查试验中必须要过滤与验证试验相等量的供试品、淋洗液，淋洗相同次数及使用同量的培养基。如果与阳性对照容器内的培养结果相比，供试品容器内微生物生长现象不明显，则说明该检验量在此检验条件下有抑菌作用。应增加淋洗次数，重复以上实验。也可通过更换过滤膜并使用中和剂来消除产品的抑菌作用。USP规定，如果已淋洗了5次，并且每次淋洗液体积达到500ml，仍无法中和膜上的残余抑菌性物质，那么在无菌检查试验中就采用此淋洗次数与淋洗量作为最终淋洗方法。