㈠ 微生物实验室的安全操作规程
抄的哦
1 实验室安全
1.1 微生物实验室的生物安全性
1.2 科室安全文档
（a）生物危害防护：实际操作规程见（《实验室生物安全通用要求》，中华人民共和国国家标准GB19489-2004。2004-01-05发布，2004-10-01实施。）
（b）实验室安全：原则和措施见（《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》，中华人民共和国卫生行业标准WS 233-2002。2002-12-03发布，2003-08-01实施。）
1.3 应用：
以上的操作规程应用于微生物科室的所有部门。工作人员或访问人员必须遵守各项规定。
1.4 关于新规定或现行规定的修改案：
任何新规定或现行规定的修改案必须通知负责科室安全的人员及相关人员，他们将建议科室主任考虑实施。
1.5 生物性危害
1.5.1 与各种操作有关的生物危害水平取决于：
a.处理的传染性物质的本身：
按照传染性物质对个人和社区和潜在危险性以及经空气传播的可能性，其划分成不同等级。所采用的等级划分详见”《实验室生物安全通用要求》”；原则和措施（见《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》）。
b.使用的设备和设施：
处理不同等级的传染性物质的要求在”实验室安全”中已规定。这些符合要求的设备都要承担重要临床工作，科室负责人必须保证中应污染物水平。
c.培训，特别是员工的安全性培训和安全性经验积累。所有员工应该接受一定训练，能安全处理任何实验室可能碰到的物质，避免将实验不能处理或规定之外的传染性物质暴露在实验室，即使暴露事故在实验室，即使暴露事故发生也要会正确处理。
1.5.2 传染性物质的分类
1.5.2.1分类系统
生物危害防护：〔见1.2 (a)〕，根据生物因子对个体和群体的危害程度将其分为4级，危害等级Ⅳ最具危害性。
1.5.2.2危险群/生物安全水平：1－4
a.危险群/生物安全水平：1——对健康成人无致病性，对社区无危害性。通常一般微生物操作就足够，不需特殊安全设备，工作的附近要有洗手设施。培养基上包含未鉴定物，因此，妥善处理对各级安全水平都至着重要。
b.危险群/生物安全水平：2——人类疾病相关物质，这种物质对实验室工作人员有中度危险，并具有一定程度社区危险性。医院微生物室所涉及的绝大多数物质属此安全水平，生物危害警告应张贴，并且限制接近，应用醒目标语，若是能产生空气传播或飞溅的I，II类物质都就使用相就的操作台。实验室就提供类似防护衣和手套，眼罩尤其是配戴隐形眼镜者，也应提供类似安全水平的洗手设施，并且临近工作区也应有高压灭菌装置。所有废物和反复使用设备的去污染应有特定的程序。
c.危险群/生物安全水平：3——人类疾病相关物质，具有潜在空气传播性，能引起严重，致命疾病，对实验室工作人员高度危险，并具有一定程度社区危险性。所有含有或怀疑含有生物案的标本必须标以”小心污染”标签，并且同时标于盛放标本容器和申清单。然而作为预防保护还不足够。应对所有血液，体液，分离的人体组织等有普通防护意识，它们都应视作传染源。在此生物安全级，实验室应控制对其接近。凡涉及该类物质都应使用I或II类工作台操作，也可以遵循II级操作注意事项，对所有废物进行去污染处理，包括工作服和重复使用设备。
d.危险群/生物安全水平：4——对个人的危险如生物安全3级，但对社区有高度危险性。这些传染性物质包括：
蜱源性脑炎病毒
支里半亚－刚果牛血热病毒
Marburg Virus
艾波拉病毒
Lagsa fever Virus
Junin HF Virus
Machupo HF Virus
Guanaruto HF Virus
Herpesvirus simiae (B Virus)
1.6 以下预防措施，所有实验工作人员必须遵守：
1.6.1 工作服
a.所有实验室成员在工作期间必须始终穿着所提供的工作服。离开实验室时，工作服须挂在指定地方，不得在实验室外冼工作服。
b.在处理含有或怀疑含有生物安全3级物质的标本时，必须在工作服外穿隔离衣。
c.在生物安全操作台内处理标本和培养基时，必须戴手套。
1.6.2 洗手池
洗手池须供应洗洁剂和纸巾。
1.6.3 洗手
所有工作人员在离开工作区必须洗手，并且要先脱去工作服和手套。
1.6.4 食物，饮水，吸烟，化妆品
食物和饮料不允许带入任何处理标本的房间.不允许在处理标本的任何地方吸烟.不允许在处理标本的任何地方使用化妆品。
1.6.5 伤口和擦伤
手上的伤口和擦伤必须覆盖保护物。
1.6.6 个人衣物
个人衣物不允许带入实验室，并且必须保存在带锁的柜子里。
1.6.7 口吸移液管
这是禁用的。要求使用机械移液装置。
1.7 常规预防措施应用于所有血液、体液、组织标本的操作中：
1> 无论何时都应尽可能避免使用注射器，针头或其它锐器。
2> 使用过的针头和一次性切割器必须丢入专门的带有盖子和桶内，以备安全处理、防止容器过满盛装。
3> 使用过的针头不许重新使用或再用手操作。
4> 打烂的玻璃必须放入坚硬的容器（不要用手），然后再放入黑色垃圾袋，如果是污染的，使用黄色垃圾袋。
5> 在接触具有潜在性传染性标本培养基、组织，必戴保护性手套，防止皮肤直接接触。如果手套有可见的污染，必须先除去污染，再更换。手上有皮炎或伤口的工作人员的需要间接接触传染性物质的人员应戴保护性手套。
6> 在处理完标本、结束工作，甚至在上述规定带手套时，应常规洗手。
7> 当血液、血液制品或其它体液污染发生时，应停止工作洗手，戴一次性手套再清除污染区。建议用含有效氯1000ppm的次氯酸钠溶液。如果污染区较大用浸有次氯酸钠溶液的湿布覆盖10min去污染，并标示相应的警告，丢弃废物及手套到生物安全级物理容器。注意飞溅的水滴和流淌会将污染带到主污染区以外。
8> 所有在实验室使用的具有潜在污染性的物质都需去污染，最好先高压，再做处理。
9> 任何可能产生飞溅或气雾的操作都应在生物安全操作台里进行。这些操作包括离心，分离血清，混合，超声，收集组织受精卵，以及处理含有浓集的感染物质标本。
1.8 实验室物质处理
a> 黑色塑料袋用来收集未污染或经高压过需处理的废物。
b> 废纸屡用来收未污染的废纸，用过的纸巾等。
c> 所有可能传染的物质必须高压或焚化。
d> 所有丢弃的标本，培养基和实验室废物必须放在专门容器里
e> 用白色聚丙烯罐盛装2%新鲜配置次氯酸液，以供工作中丢弃标本，污染吸头，棉拭子临时处理待一天工作结束之后，再经高压处理。
f> 黄色塑料袋用来处理污染的实验室废物。它们应封口再由工人拿去焚烧。
g> 带盖，带标签硬质容器用来盛装针头的锐器。
1.9 实验室传染性物的消毒
高压
a.所有培养基的传染性物质都要高压，除非准备焚烧的，高压的最大好处是使传染性物质离开实验室可保证安全。
b.用作此目的的高压设备应在医学技师监督下由实验室工人操作。
c.高压设备应定期由医院设备组测试，检修。这些测试包括商业使有的芽胞试纸实验。多个高压设备应有使用记录，并自使用之日起由医学技师连续记录。任何不符都要向安全人员报告。
1.10 去污染
去污染剂：
1> 次氯酸溶液：用白色聚丙烯罐装新鲜配置的含有效氯1000ppm的2％次氯酸溶液，放在多个工作室。
2> 5%的Printol：其50％水溶液用来处理溅在地板和家具上的污染。
3> 戊二醛：新鲜配制成一定浓度，主要用于不能使用次氯酸钠的仪器去污染，如离心机等。
4> 75％乙醇：主要用于对清洁表面的快速去污染。
1.11 离心机
1.11.1 注意事项：
a> 使离心机用的试管应具是厚管或塑料的，离心前应仔细检查是否缺损。
b> 离心机需放置在合适的位置，操作都应能看见离心缸，以便能正确地将离心架放在转子上。
c> 离心桶和离心架配对使用，负载后需仔细平衡。
d> 为避免脱架和试管内溶液溅出，开始采用低转速，然后逐渐升高。
e> 离心机内缸应由高级人员定期检索，内壁必须用戊二醛定期清洁，去污染。
f> 在对含有或怀疑含有生物安全操作3级标本离心时，必须加盖密封，密封盖只有在一级生物安全操作台内才能打开。
1.11.2 离心时，试管破裂
a> 如果正在离心时，发生或怀疑发生试管破裂，电动机应立即断电，并在30min后才能打开离心机盖。
b> 如离心后发现破裂，应立刻关闭机盖，保持至少30min。
c> 立即通知安全员。
d> 戴厚手套，使用镊子或用镊子夹棉鉴清除破碎玻璃碎片。
e> 所有破裂试管，玻璃碎片，离心桶和转子必须放在专门消毒剂中去污染，要求消毒剂不具腐蚀性，对浸生物安全物质有效。然后，或者浸泡至24小时，或者高压。
f> 未破裂，带盖的试管也应放在另一含有消毒剂的容器中1后，再对其内容物处理。
i> 离心缸必须用戊二醛棉拭子清洁，过夜，再重复擦拭，再用水清洁洗净并干燥。
g> 含有生物安全3级物质的密封离心桶必须在密封状态下取出，在一级生物安全操作台内打开。如果试管破裂，离心桶密封盖应松松地盖上，对离心桶高压。
1.12 破裂和溢出
任何重要的破裂的溢出都应通知安全人员。在处理含有或怀疑含有生物案例的溢出物，应先得到安全人员的建议。
1.12.1 病毒培养基的泄漏
a> 用浸有20％次氯酸钠的纸巾覆盖溅洒出的污染物用容器碎片。
b> 覆盖10－15min。
c> 戴一次性手套，清扫纸巾和碎片于合适的容器（如塑料袋，但不包括含有碎玻璃或其它锐利物体），用一片硬纸板去清扫，不能用刷子或尘掸，除非它们适于高压。手指远离碎玻璃。
d> 将碎片和使用后的废物放在实验室废物箱。
e> 用常规工作消毒剂擦拭污染区及其周围可能飞溅区。
1.13 泄漏的标本
实验室不泄漏的标本，但要以塑料密封后退还到病房。
1.14 紫外线消毒：培养基，试剂分装和病人血清应存放－70°C和－30°C冰箱。操作存放于－30°C或以下温度冰箱物质，应戴手套，例如当标本从低温冰箱取出或放入时。
1.15 生物安全柜（台）
实验室应配备II级生物安全柜。
1.15.1 级别
I ：基本要求：定向流动保护，要求气流从外流入安全柜，并且远离操作者，指向传染物。经HEPA过滤排后，紧好由导管引向室外，以便清除去污染后的各种蒸汽。
II：基本要求：经过滤气体垂直流向，既保护操作者也要保护工作不受污染。
IIA：70％的过滤气体重新循环至工作区，废气导向室外经HEPA过滤。和内流经式工作区的气流速度平均0.4m/s或略高。
IIB：流进气体流速平均0.5m/s或更好。按照不同型别（IIB1，IIB2，IIB3），气体排出比例从70％到100％。根据工作选择不同型。如有毒化学物质和放射线同位素不能再循环至工作区。
III ：基本要求：操作者与传染物安全隔离，并且整个操作过程都要提高。安全柜所在的环境也要一定程度隔离，以防手套破裂。
1.15.2 生物安全柜的安装
安全柜要发挥某安全防护功能必须注意安装位置，废气应通过管道以保护环境不受污染。如果需购置这类设备应联系CUHK安全办公室，在种类，牌子，样式，安装位置和安装以及与其它设施的相邻关系上获得指导。
1.15.3 常规检查和安全操作以及工作区的消毒
有一份操作规程详尽地叙安全柜的常规使用也应包括安全柜发生意外时应采取的行动。每一个使用者必须阅读规程使后签名。
1.15.4 注意：
安全柜应尽可能避免使其处于不安全状态，但有时因为安全柜的意外，使用者被迫这样做。此时，应张贴注意以警告其它人不得再使用。
1.15.5 去污染和再认证
由受过训练的人员,配戴个人防护用具,来做污染工作。要求：安全柜在密闭条件下用干燥多聚甲醛蒸汽醺蒸，使用浓度8500ppm。（安全柜的体积应包括外周供应和废气过滤设备。）在温度20－25°c，相对温度不低于60％环境保持4h，甲醛蒸汽，如果允许，可直接抽出室外，若不允许可在安全柜内用氨基重碳盐吸收。
因为空气有限的穿透力，在处理潜在传染性物质时最好使用HEPA过滤器，以及高压或焚化后再丢弃。
1.17.5.2 再认证
这项工作由专门人员进行，去污染后安全柜性能再认证定，及过滤器的更换，测试是否有漏气，调试空气流速是否合规定，以及检测过滤器的性能。再认证应至少一年做一次，或是装置移动，过滤器维修后。应备有去污染，维修和再认证的记录，并且应方便使用者的查阅。
2. 实验安全操作程序：
2.1 工作人员在采集标本过程中应当防止病原微生物扩散和感染，并对标本的来源、采集过程和方法等作详细记录。
2.3 实验过程中绝对禁止吸烟、饮食等，不要以手抚头面部等。
2.4 处理样本的过程中易产生高危害气溶胶时，要求同时使用适当的个人防护装备、生物安全柜和/或其它物理防护设备。如可产生含生物因子的气溶胶，应在适当的生物安全柜中操作。细菌的分离培养、菌种开封、转种、研磨、稀释等操作，均应在生物安全柜中进行。
2.5 使用接种环进行操作时，接种环应在工作灯的内焰中燃烧，以避免菌液或菌块飞溅。
2.6 稀释菌液时，吸管、针管要缓慢插入试管或烧瓶底部，小心操作避免产生气泡或气溶胶。
2.7 使用注射器加样时，用过的针头切勿再重新入套或拔开注射器与针头，应直接放入锐器收集器，以免划破皮肤造成接种感染。
2.8 菌株库要设专人管理，并按照国家微生物菌毒种管理办法执行。2.9进行毒菌操作过程中，不要穿戴巳经污染的防护性手套触摸门柄、仪器或毒菌区以外区域，避免由于粗心扩大污染范围。
2.10 试验结束后，操作过程中所有可能与生物危险物接触或被污染的试验器械和物品，能够高压消毒的必须高压消毒，不能进行高压消毒的设备、仪器，应使用有效的消毒剂擦洗后再以紫外灯近距离长时间消毒。
2.11 实验中发生意外污染情况，应立即通知主管人员并做好处理污染物和相应区域的准备，不得擅自采用其它禁止的方法进行消毒处理。
2.12 实验室内任何微生物的样本，废弃物都必须经高温高压灭菌后，方可按一般垃圾处理。
2.13 实验室所用任何个人防护装备应符合国家有关标准的要求。实验室应确保具备足够的有适当防护水平的清洁防护服供使用。还应穿戴其它的个人防护装备，如手套、防护镜、面具、头部面部保护罩等。
3. 实验室污物处理及消毒操作程序：
3.1 实验室含有生物危险物的临床标本及被污染的一次性用品，试验完成后，应在操作台或实验区域内以紫外灯近距离照射消毒 2小时以上，再经高压消毒后方可丢弃或焚烧。
3.2 可重复使用的实验用品及器材，完成实验后，应在操作台或实验区域内经紫外灯近距离照射消毒2小时以上后，再交有关人员进行高压消毒和煮沸洗刷。
3.3 实验用的试管、吸管、注射器，须装在加盖不漏的容器内，经高压灭菌后取出。
3.4 培养物或实验室垃圾，在丢弃前必须经高压消毒和紫外灯近距离长时间照射处理。不允许积存垃圾和实验室废弃物。已装满的容器应定期运走。在去污染或最终处置之前，应存放在指定的安全地方，通常在实验室区内。
3.5 实验室废弃物应置于适当的密封且防漏容器中安全运出实验室。有害气体、气溶胶、污水、废液应经适当的无害化处理后排放，应符合国家相关的要求。
3.6 实验过程中，如标本或含标本的前消化处理液被打翻污染了操作台或地面，应以吸满70%酒精的卫生纸覆盖污染区，15分钟以后卫生纸方可移去。
3.7实验室内未经消毒的污水，禁止直接排入公共排水系统，更不允许混入居民生活垃圾。
4. 意外事故处理程序：
4.1 如果发生意外，必须立即通知实验室主管人员和医院生物安全办公室，并在有关人员的指导监督下对出事现场进行处理，绝对禁止未经报告而私自对出事现场给予非规范的处理。
4.2 实验过程中，如污染物溅落到身体表面，或有割伤、刺伤、烧伤、烫伤等情况发生，应立即停止实验工作进行紧急处理，更换被污染的实验服，皮肤表面用消毒液清洗，伤口以碘酒或酒精消毒，眼睛用无菌生理盐水冲洗。
4.3 如果发生菌液溢出，含菌种的培养管破碎等，造成中 、小面积污染，可用比污染面积大25%以上的纱布覆盖污染区域，边缘用脱脂棉围住，向纱布倾倒5%苯酚溶液或70%的酒精，浸泡2小时以上（其间适量加溶液防止干燥），再经紫外灯近距离（1米内）照射2小时以上；被污染的器械、容器等立即浸泡于70%酒精中2小时以上，再次着防护衣进入房间，将污染溢出物和用于清洁的纱布放入可耐受高压的双层塑料袋内并尽快高压。
4.4 如果发生气溶胶污染或大面积污染，应立即停止实验并关闭实验室，对污染区域进行紫外灯照射消毒过夜；第二天对污染区进行24小时封闭空气熏蒸消毒（乙醛消毒法：5ml乙醛＋2g高锰酸钾/m3空间）。
4.5 临床医务人员应对事故受害者和消毒人员进行医学随访。
㈡ 为什么除菌过滤器前的微生物负荷需要监控
除菌过滤器也叫呼吸器，主要用于防止空气中的杂质和有害细菌、微生物等回进入罐体、引起变化答，目前广泛应用于食品、生化、医药、电子等行业。想了解更多可以去石家庄凯德过滤设备有限公司。
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㈢ 如何理解直接入药的中药粉末入药前的微生物限度检查
看你药材要做微生物检测应该是比较好的饮片了，但是又要进行前处理----净洗，又像普通的药材，而一般直接入药的原药材粉基本都会经过灭菌的过程。但是如何控制也不是绝对的，其实质量控制的问题，如果饮片有报告单上有微生物项目，说明供应商在生产上有控制能力，如果是普通药材那就什么也保证不了，但是作为新产品应该采用每味中药粉检测合格后在进行下一步的投料，特别是在没有灭菌的过程下，有了一些数据后，那个药材比如说易滋生菌，就重点控制，或者有些药材很稳定，经过处理不会产生微生物的变化，可以评估的，到时再制订合适的内控方法，这样就很有说服力了。
㈣ 氯化钠溶液和氯化钠注射液检微生物限度的区别
注射液要求无菌，溶液对细菌没有硬性的要求
㈤ 原料药生产所用原料是否也必须每批留样其留样时间如何确定
例如，片剂在压片后进行内包装，压片结束后检测鉴别、含量均匀度等理化项目，而内包装之后仅取样检测微生物限度，最后成品放行的检验报告数据采用压片之后的理化项目数据和内包装之后的微生物限度数据，这样做是否可行？ 答：放行，系指对一批物料或产品进行质量评价，作出批准使用或投放市场或其他决定的操作。一般情况下，如果企业对成品进行质量评价，能够确认中间产品的关键质量属性到成品时未发生变化，中间产品的检验结果能够代表成品放行前的检验结果，则可以引用中间产品的检验数据和结果。 企业如果采用这种方式，则必须对中间产品的关键质量属性到成品状态时的变化情形进行科学研究或评价，确保中间产品的检验数据能够代表最终包装完成的成品。应当注意，并非所有中间体的关键质量属性到最终放行时都不会产生变化。 2.问： 答：《药品生产质量管理规范（2010年修订）》明确要求制剂生产用每批原辅料和与药品直接接触的包装材料均应当有留样，并对留样作出了详细要求，而对于原料药则没有详细规定，但在第十二条（七）中明确规定：物料和最终包装的成品应当有足够的留样，以备必要的检查或检验。 原辅料留样的目的是为了能够有追溯性，一旦上市或未上市产品出现问题，企业能够从物料角度查找分析可能产生的原因。因此，企业还是应当根据其对成品质量影响的情形进行分析，从而决定是否留样、如何留样并形成操作规程。一般而言，原料药生产所用的起始物料、对原料药质量有直接或关键影响的那些关键物料均应当留样。 3.问：我们生产最终灭菌的大容量注射剂，从配制到灭菌的时限，工艺规程描述为不超过12小时，但实际工作中最多也超不过8小时，那么，12小时的时限是否必须要通过验证？8小时的时限也是否必须要通过验证？ 答：《药品生产质量管理规范（2010年修订）》第五十七条规定：应当尽可能缩短药液从开始配制到灭菌（或除菌过滤）的间隔时间。应当根据产品的特性及贮存条件建立相应的间隔时间控制标准。 灭菌工艺的有效性不仅与灭菌参数有关，还与待灭菌物品的微生物负荷量有关。建立间隔时间控制标准的目的是为了控制待灭菌产品的微生物负荷量，使灭菌工艺能够达到相应的效果。 药液的微生物负荷量会随着时间的延长而增加。企业根据灭菌工艺能力确定可接受的最大微生物负荷量之后，应根据产品特性和贮存条件考察、建立并控制药液从配制至灭菌的时间，以控制微生物负荷量在可接受的最大范围之内。 问题中工艺规程规定的时限应当是经过验证的。如果最长的12小时时限已经过验证，根据实际工作情况，在其他条件不变的情形下，将时限缩短至8小时可不再验证。 4.问：检验人员须经过与所从事的检验操作相关的实践培训且通过考核。是不是药企的QC只要经过公司内部的岗位培训并考核合格就能上岗，不再需要经过药检或药品监管部门认可的机构培训后发证上岗？ 答：《药品生产质量管理规范（2010年修订）》对检验人员提出了要求：质量控制实验室的检验人员至少应当具有相关专业中专或高中以上学历，并经过与所从事的检验操作相关的实践培训且通过考核。 该规范没有强制规定企业的检验人员需经过药检或药监部门认可的机构培训后发证上岗，其注重的是培训的有效性，企业应确保培训后检验人员检验的准确性。企业可采取理论培训、实践培训、或者师傅带徒弟等多种方式，也可以采取委托第三方机构进行培训的方式对检验人员进行培训，但必须注意，培训和考核仅仅是确保检验结果准确性的手段。
㈥ 生化需氧量的测定
容量法
方法提要
生化需氧量是指在有氧条件下，微生物分解水中有机有物的生物化学过程所需溶解氧的量。
取原水或经过稀释的水样，使其中含足够的溶解氧，将该样品同时分为两份。一份测定当日溶解氧的质量浓度，另一份放入20℃培养箱内培养5d后再测其溶解氧的质量浓度，两者之差即为5d生化需氧量(BOD5)。
仪器
恒温培养箱(20±1)℃。
细口玻璃瓶2000mL。
量筒1000mL。
玻璃搅拌棒玻璃棒底端套上一块比量筒口径略小于1mm厚的硬橡胶圆块，棒的长度以可伸至量筒底部为宜。
培养瓶250mL。
试剂
硫酸。
氯化钙溶液(27.5g/L)。
氯化铁溶液(0.25g/L)称取0.25gFeCl3·6H2O溶于蒸馏水中，稀释至1000mL。
硫酸镁溶液(22.5g/L)称取22.5gMgSO4·7H2O溶于蒸馏水中，稀释至1000mL。
磷酸盐缓冲溶液(pH7.2)称取8.5gKH2PO4、21.75g磷酸氢二钾和(K2HPO4)、33.4gNa2HPO4和1.7gNH4Cl，溶于蒸馏水中，稀释至1000mL。
稀释水在2000mL玻璃瓶内装入一定量的蒸馏水(含铜量小于0.01mg/L)，在20℃条件下用水泵或无油空气压缩机连续通入经活性炭过滤的空气8h，予以曝气，静置5～7d，使溶解氧稳定，其溶解氧质量浓度应为8～9mg/L。
临用时，每升稀释水中加入无机盐溶液(CaCl2、FeCl3·6H2O、MgSO4·7H2O和磷酸盐缓冲液)各1.0mL，混匀，稀释水的20℃5d生化需氧量应在0.2mg/L以下。
接种稀释水
接种液将生活污水在20℃条件下放置24～36h取上清液，备用。
接种稀释水于每升稀释水中加入接种液10～100mL。
葡萄糖-谷氨酸溶液称取于103℃烘烤1h的葡萄糖和谷氯酸各150mg于纯水中，稀释至1000mL，临用时配制。
氢氧化钠溶液c(NaOH)=1mol/L。
氟化钾溶液(40g/L)。
叠氮化钠溶液(2g/L)。
硫酸锰溶液(480g/L)称取480g硫酸锰(MnSO4·4H2O)或400gMnSO4·2H2O或380gMnCl2·2H2O溶于蒸馏水中，过滤后稀释至1000mL。
碱性碘化钾溶液称取500gNaOH溶于300～400mL蒸馏水中，称取150gKI(或NaI)溶于250mL蒸馏水中，将以上两液合并，加水至1000mL，静置，加0.05mol/LNa2S2O3标准溶液，用新煮沸放冷的蒸馏水准确稀释为0.02500mol/L。
淀粉溶液(5g/L)。
分析步骤
水样采集后应尽快分析，采样后2h以内开始分析则不需冷藏。如不能及时分析，采样后即保存在4℃或低于4℃的冷藏箱内，应在采样后6h内进行分析。
1)样品预处理。水样pH应为6.5～7.5，水受到废水污染时，可用0.5mol/LH2SO4或NaOH溶液予以调整。
含有少量余氯水样，放置1～2h后即可消失。余氯大于0.1mg/L，可加入Na2S2O3除去，其加入量可用碘量法测定。
受工业废水污染的水样，由于其中可能含有其他有害物质，如金属离子等，应根据具体情况予以处理。
当水样中含有0.1mg/L以上的亚硝酸盐时，可于每升稀释水中加入2mg亚甲蓝或3mL叠氮化钠溶液处理。
当水样中含有1mg/L以下的亚铁盐时，可于每升水中加入2mLKF溶液。
2)直接培养法。适用于较清洁的水样。用虹吸法吸出两份水样于溶解氧瓶中，一瓶立即测定溶解氧，另一瓶立即放入(20±1)℃恒温培养箱中，培养5d后取出，再测定溶解氧。两者之差即为水样的生化需氧量。
3)稀释培养法。确定水样稀释倍数:根据酸性KMnO4测得耗氧量(mg/L)，以1～3除之，其商即为水样的需稀释的倍数。
4)稀释方法。
A.连续稀释法，先从稀释倍数小的配起，继用第1个稀释倍数的剩余水，再注入适量稀释用水配制成第2个稀释倍数，以此类推。
B.稀释操作方法。
a.将水样小心混匀(注意勿产生气泡)，根据稀释培养法确定的稀释比例，取出所需体积的水样，沿筒壁移入量筒中，然后细心地用虹吸管将配好的稀释水或接种稀释水加至刻度，用特制的搅拌棒在水面以下缓缓上下搅动4～5次，立即将筒中稀释水样用虹吸法注入两个预先编号的培养瓶中，注入时使水沿瓶口缓缓流下，以防产生气泡。水样满后，塞紧瓶塞，并于瓶口凹处注满稀释水，此为第1个稀释度。
b.在上述分析步骤中，量筒内尚剩有水样，根据第2个稀释度需要用虹吸法向筒中注入稀释水或接种稀释水以下分析步骤重复上述操作，即为第2个稀释度，按同法可做第3个稀释度。
c.另取两个编号的溶解氧瓶，用虹吸法注入稀释水或接种稀释水，塞紧后用稀释水封口作为空白。
d.检查各瓶编号，从空白及每一个稀释水样瓶中各取1瓶放入(20±1)℃培养箱中培养5d，剩余各一瓶测定培养前溶解氧。
5)溶解氧固定。立即将分度吸管插入培养瓶液面以下，加1mLMnSO4溶液，再按同方法加入1mL碱性溶液。盖紧瓶塞(瓶内勿留气泡)，将水样颠倒混匀一次，静置数分钟，使沉淀重新下降至瓶中部。
6)释出碘。用分度吸管沿瓶口加入1mLH2SO4盖紧瓶塞，颠倒混匀，静置5min。
7)滴定。将上述溶液倒入250mL碘量瓶中，并用蒸馏水洗涤解氧瓶2～3次，用Na2S2O3标准溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1mL淀粉溶液，继续至蓝色刚好褪去为止，记录用量(V1)。
8)计算:
岩石矿物分析第四分册资源与环境调查分析技术
式中:ρ(O2)为水中溶解氧的质量浓度(以O2计)，mg/L;c为硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L;V1为硫代硫酸钠标准溶液用量，mL;8为1/2氧的摩尔质量的数值，单位用g/mL;V为水样体积，mL。
每天检查瓶口是否保持水封，经常添加封口水及控制培养箱温度;
培养5d后取出培养瓶，倒尽封口水，立即测定培养后的溶解氧，溶解氧测定方法同上。
9)标准溶液校核。将葡萄糖-谷氨酸标准溶液，以2%稀释比例，其BOD5结果应为(200±37)mg/L。如不在此范围内，说明实验有误，应找原因。
分析结果的计算
1)直接培养法。按下式计算5d生化需氧量(BOD5)的质量浓度:
岩石矿物分析第四分册资源与环境调查分析技术
2)稀释培养法。按下式计算5d生化需氧量(BOD5)的质量浓度:
岩石矿物分析第四分册资源与环境调查分析技术
式中:ρ(BOD5)为水样的5d生化需氧量的质量浓度，mg/L;ρ1为水样培养液在培养前的溶解氧的质量浓度，mg/L;ρ2为水样培养液在培养5d后的溶解氧的质量浓度，mg/L;ρ3为稀释水(或接种稀释水)在培养前的溶解氧的质量浓度，mg/L;ρ4为稀释水(或接种稀释水)在培养5d后溶解氧的质量浓度，mg/L;f1为稀释水(或接种稀释水)在培养液中所占比例;f2为水样在稀释培养液中所占比例。f1、f2的计算为:
岩石矿物分析第四分册资源与环境调查分析技术
3)结果确定。测定2个或2个以上稀释度的溶解氧降低量应为40%～70%，即可取平均值计算。
水样稀释后溶解降低率:
岩石矿物分析第四分册资源与环境调查分析技术
式中:ρ5为水样稀释后溶解氧降低率，%;ρ1、ρ2同上。
㈦ 中药饮片微生物限度如何操作
哇塞，去借本药典一看就明白了嘛
㈧ 如何筛选微生物药物
市面上有很多微生物制剂的菌种，多种多样，造成在选择上产生很大困惑，下边是选择菌种的方法：
1、微生物菌种选择
动物消化道微生物具有多样性和特异性，不同动物种类对菌种的要求不同，同一菌株用于不同动物，产生的效果差异也较大。使用时一定要掌握菌种的特性和功效，选择不当起不到应有效果，反而会破坏原有菌群，甚至引发疾病
2、微生物菌种应用时间
微生物制剂应用要从子畜开始使用，以保证有益菌优先定植。因为制剂进入体内后要有一段时间进行微生物菌群调整才能定植下来。
一般认为，乳酸菌类在各种动物的各阶段添加均较好，芽孢杆菌类在生长期添加较好，在幼龄期可以添加;曲霉菌类在幼龄期，水产动物全期不必添加;酵母菌类在生长期不必添加;在水产动物养殖中，以改善水质为目的时，可将微生物制剂或光合细菌直接洒于水中。
3、微生物菌种添加方式
一般粉状饲料添加微生物制剂效果较好，颗粒饲料和膨化饲料在加工过程中的高温可造成10%~30%的芽孢杆菌，90%以上的肠球菌以及99%以上的酵母失活，而乳酸杆菌几乎全部被杀灭。因此，在颗粒饲料中要使用耐热，耐挤压的芽孢杆菌制剂。乳酸菌不耐高温，应采用冻干后包被或采用喷雾干燥的方式制成的乳酸菌制剂。使用时最好采用饮水方式，以利于乳酸菌优先粘附于肠壁。
4、微生物菌种剂量与浓度
微生物制剂中必须含有相当数量的活菌才能达到效果。当进入动物肠道食糜中外源菌数大于1000万个每克时，都会对肠道内原有菌群产生较大的影响。因此，微生物制剂在产品中活菌数含量为10亿~20亿每克时效果最佳。
我国正式批准生产的微生物制剂中规定每克芽孢杆菌含量要多于5亿个。以酵母菌产品为例，目前市场上销售的产品活菌数从每克几亿到200亿不等，在选择是要认真鉴别。
5、微生物菌种抗生素的影响
细菌类的微生物制剂对抗生素敏感，不宜与抗生素同时使用，使用微生物制剂的前后二天应停止使用抗生素。最好先用抗菌药物清理肠道，为益生菌的定植和繁殖扫除障碍，然后再饲喂微生物制剂，可提高使用效果。酵母菌类属于真核生物，生物学活性与细菌完全不同，对抗生素、磺胺类药物和一些抗菌剂有天然抗性，可与抗生素同时使用。
6、微生物菌种保存条件和期限
微生物制剂均为活菌制剂，由于大多数菌种在饲料加工、运输中容易失活，应用中要注意保存期限。通常微生物制剂应密封保存于阴凉避光处，储存时间不宜过长，有效期一般为一年左右，随着保存时间的延长，活菌数量不断减少。厌氧菌类暴露在空气中容易死亡，有的产品对其进行了包被或真空包装处理，应在打开包装后规定的时间内用完。酵母类属于兼性厌氧菌，可以保存较长时间。芽孢杆菌类有效期比其他类型长，可达2年左右。
㈨ 中国药典中药物微生物检测在哪部
你好，微生物检测方法在中国药典2010年版二部附录XI J，具体方法为附录XI J微生物限度检查法
微生物限度检査法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅
料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、
酵母菌数及控制菌检查。
微生物限度检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁
净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格
遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品
中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期
按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方
法》的现行国家标准进行洁净度验证。
供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活
剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。
除另有规定外，本检査法中细菌及控制菌培养温度为
30〜35°C;霉菌、酵母菌培养温度为23〜28°C
检验结果以lg,lml、10g、10ml或10cm
2为单位报告，特
殊品种可以最小包装单位报告。
检验量
检验量即一次试验所用的供试品量(g、ml或cm
2
)。
除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml;膜剂
为100cm
2
»贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要
求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml(其中
10g或10ml用于阳性对照试验）。
检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂
还不得少于4片。
一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单
位）的3倍量供试品。
供试液的制备
根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法
制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不
应超过451C。供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过
1小时。
除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。
1. 液体供试品
取供试品10ml ，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至
100ml，混匀，作为1 ： 10的供试液。油剂可加人适量的无菌
聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混
合的供试品原液作为供试液。
2. 固体、半固体或黏稠性供试品
取供试品10g ，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至
100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1 ： 10的供试
液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温
使供试品分散均匀。
3. 需用特殊方法制备供试液的供试品
(1) 非水溶性供试品
方法1取供试品5g(或5ml)，加至含溶化的（温度不超
过45'C)5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无
菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加人45"的
pH7. 0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使供
试品充分乳化，作为1 ： 20的供试液。
方法2 取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙
酯（制法见附录H H无菌检査法中供试品的无菌检查项下）
和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯
的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加人45\：的pH7.0
无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,振摇5〜：L0分钟，萃取，静
置使油水明显分层，取其水层作为1 •• 10的供试液。
(2) 膜剂供试品.
取供试品100cm
2
，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓
冲液lOOmK必要时可增加稀释液），浸泡，振摇，作为1 ： 10的
供试液(3) 肠溶及结肠溶制剂供试品
取供试品10g,加pH6. 8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制
剂）或pH7. 6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml，
置45t:水浴中，振摇，使溶解，作为1 :
10的供试液。
(4) 气雾剂、喷II剂供试品
取规定量供试品，置冰冻室冷冻约1小时，取出，迅速消
毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室
温，并轻轻转动容器,使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器
吸出全部药液，加至适量的PH7. 0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
(若含非水溶性成分，加适量的无菌聚山梨酯80)中，混匀，取
相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1 ： 10的供试液。
(5) 贴剂供试品
取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置在无菌玻璃或
塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱
布）覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置
于适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）的
稀释剂中，用力振荡至少30分钟，制成供试液。贴剂也可采
用其他适宜的方法制备成供试液。
(6) 具抑菌活性的供试品
当供试品有抑菌活性时，采用下列方法进行处理，以消除
供试液的抑菌活性，再依法检查。常用的方法如下。
① 培养基稀释法取规定量的供试液，至较大量的培养
基中，使单位体积内的供试品含量减少，至不含抑菌作用。测
定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时，取同稀释级的供试液2ml,每
lml供试液可等量分注多个平皿，倾注琼脂培养基,混匀，凝固，
培养，计数。每lml供试液所注的平皿中生长的菌落数之和即
为lml的菌落数，计算每lml供试液的平均菌落数，按平皿法
计数规则报告菌数;控制菌检查时，可加大增菌培养基的用量。
② 离心沉淀法取一定量的供试液，500转/分钟离心3
分钟，取全部上清液混合。用于细菌检査。
③ 薄膜过滤法见细菌、霉菌及酵母菌计数项下的"薄
膜过滤法"。
④ 中和法凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试
品，可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。中和剂或
灭活剂可加在所用的稀释液或培养基中。