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超滤离心管离心机

发布时间:2022-04-06 09:40:39

超滤离心管怎么使用

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。

⑵ 为什么我的超滤离心管不浓缩

茶叶--抽提--过滤--澄清--浓缩(茶浓缩汁)-调配--加入抗氧化剂等--灭菌灌装成纯茶饮料。但是市场上现在绝大多数都不是纯茶饮料,纯茶饮料是很难喝的,大多数是调味型茶饮料,所以在无菌灌装之前要加甜味剂或者柠檬酸食用香精,果汁,乳制品等。\r\n 茶叶注意不能用变质的绿茶,用粉碎机粉碎,准备浸提。\r\n 浸提:以水作为溶剂浸提,水对茶叶中的多酚类,生物碱,苷,水溶性有机酸等都有很好的溶解性能。影响浸提效果的因素是 1水质的纯度:水中的钙镁铁氯,水质的硬度,影响浸提。2水温越高,时间越长,原料颗粒越小(当然也不能无限制的小),茶水比列越大,萃取率越高,茶汤的苦涩味也越重,成本也高,香味新鲜度都受影响,建议萃取水温在80-90度,这样不至于将苦涩味较重的咖啡碱萃取过多,同时也将茶多酚萃取出来。茶汤在萃取后,立即降温冷却。\r\n 茶叶在萃取冷却后会产生白色乳状沉淀,是由茶叶中的茶多酚及其氧化产物和咖啡碱络和而成,形成茶乳,蛋白质果胶,淀粉等大分子物质也容易出现沉淀,而水中离子又是促进浑浊和沉淀的首要原因。\r\n 目前采用的去除沉淀的方法是:离心法,超滤微滤和RO膜浓缩。或者加入助滤剂,添加钙离子然后将茶汤过滤,或者加入离子螯合剂,加入食品添加剂,如环状糊精,天然胶来抑制茶乳的产生,也可以用单宁酶来破坏茶乳。\r\n 加入添加剂;\r\n 茶饮料的灭菌:用UHT超高温瞬时灭菌,灭菌时间短,有利于保持茶饮料的色香味。

⑶ 超滤离心管用材要求

摘要 (1)选择合适的超滤离心管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的产品。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。

⑷ 离心管和离心超滤管

离心管就来是一个简单的可自以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。
离心超滤管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理。。。。常用于浓缩样品。

⑸ 如何选用超速离心机转子和离心管

超速离心机牵扯到离心机转子离心管什么的,估计你想问的管式离心机方面的多

是选用离心机类型还是固定的离心机根据要求选用配套的转子离心管配套?

离心机总是为离心加工这道工序服务的,既然是工序就会有工艺要求啊,对照工艺需求,选择方向就能大致确定下来了

  1. 根据生产物料加工量(单位样本体积),按照加工量选择分离机规格型号

  2. 根据待分离物料温度特性,是否选择温度控制,选择是常温还是低温

  3. 根据待分离物料特性,选择是否是防腐蚀、防爆等特殊配备

  4. 根据工艺需求(分离因素,灭菌需求等),确定转速,选择转子和配套的离心管

富一阳光与你交流离心机方面的问题,希望对你有帮助,望采纳~

⑹ 【求助】超滤离心是怎么回事

超滤离心机是使用带超滤膜的离心管,这个膜有分子量的区别,可以截留大于回膜孔径的答分子,一般的离心机就可以了,还要选好你的离心管体积,这样才能和你离心机配套使用 情非所属(站内联系TA)一般一百左右一根,特殊的可能更贵,有50ml,10ml,一般的离心机都可以,只要管子能套上,同一种物质在膜完好不堵塞的情况下可以重复下,但是不能太多次数,两三次就好了!

⑺ 超滤离心管放一般的离心机能用么

般的离心机有两种转子,一种是吊篮式的转子,一种是角转子.当然两种都可以用来转超滤管浓缩,不过角转子效率会差很多,就是你离心时间长但浓缩体积还是不大.吊篮转子效率比较高一些.

⑻ 超滤离心管能够通过最小的分子量是多少

离心管就是一来个简单的可以承受高转速自压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀. 离心超滤管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理.常用于浓缩样品.

⑼ 超滤浓缩离心管使用前要怎么处理

可能不来同厂家的产品保存运输条源件不一样。
如果有甘油等保护剂,那就一定要洗干净再加样品。
干的超滤管也要先润湿再用,否则可能不能完全利用膜面积。
最好,用样品buffer润洗下再加样,最大程度保证蛋白活性。尤其是用过后保存在NaOH或乙醇中后。
一般还是离心机甩一下好,使膜充分浸润。

降低吸附的办法有:
1,蛋白浓度不要过低
2,尽量选用纤维素的低吸附超滤管
3,用前可以用Tween 80等去垢剂润洗(不影响蛋白活性的前提下)
4,加入保护蛋白,如BSA(不影响蛋白后续使用的前提下)

用完保存在20% EtOH中,4C保存,防止长菌,依不同样品可以重复使用不同的次数。

⑽ millipore超滤管 可以用普通离心机吗

【上海巴玖】提示您:一般的离心机达不到说明书上4000g的离心力。

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