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凝胶过滤法图谱中只有一个峰

发布时间:2022-03-24 06:57:14

Ⅰ 凝胶过滤分离蛋白质实验图中若只出现一个峰的原因是什么还有出现前面的峰小于后面的峰又是为什么

您好!抄凝胶过滤分离蛋白袭质实验图中若只出现一个峰的原因:
① 蛋白纯度很好:)这个可能性不大。
② 选用的分子筛颗粒尺寸不对,或者太大或者太小,太大的话,所有蛋白都在内水体积出,太小的话,所有蛋白都在外水出了。
③ 分子筛凝胶因为压力太大等原因,颗粒破碎了。。。
出现前面的峰小于后面的峰:
① 如果出现两个以上峰,至少说明它有一定的分离效果啦。
② 说明选用的这个凝胶对于待纯化蛋白溶液来说,进入外水体积的蛋白就是颗粒较大蛋白含量少,进入内水体积的蛋白就是颗粒较小蛋白含量少。具体的根据电泳结果来判断,看你的目的蛋白在哪一段,是否还能优化分子筛孔径。

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Ⅱ 经初步纯化后的蛋白质样品,如果用层析法检测显示只有一个峰,是否可以认为该纯化样品只含有一种蛋白

二者均不能。需要考虑纯化的原理。柱层析法的原理是根据蛋白质的分子量来进行纯化,所以可能存在和目的蛋白相同分子量的杂蛋白。(不考虑蛋白之间的相互作用)证明方法:可以用某种特定的蛋白酶去切蛋白质样品。切完后再过柱子。如果还有原来的峰则证明有杂蛋白存在。
第二种方法也类似。离子交换层析的原理是根据蛋白质的等电点来纯化的。
电泳法也是根据分子量来判断。超速离心是根据沉降系数来分离的。这些都没办法彻底排除杂蛋白的影响。要排除得去考虑蛋白质的氨基酸序列。这样才能彻底排除干扰。

Ⅲ 凝胶过滤法分离蛋白质时,从层析柱上先被洗脱下来的是什么

选 A
凝胶过滤,与带点多少没关系!因为凝胶过滤是根绝分子大小来工作的!
分子量小的,会经过凝胶珠上的孔隙,路程较长,后洗脱下来;
分子量大的,会直接经过凝胶颗粒之间的缝隙,路程较短,会先先脱下来!

Ⅳ 多糖样品做凝胶层析为什么会有多个洗脱峰

多糖样品做凝胶层析为什么会有多个洗脱峰
凝胶层析操作中应注意的一些具体问题.
(1)层析柱的选择
层析柱大小主要是根据样品量的多少以及对分辨率的要求来进行选择.一般来讲,主要是层析柱的长度对分辨率影响较大,长的层析柱分辨率要比短的高;但层析柱长度不能过长,否则会引起柱子不均一、流速过慢等实验上的一些困难.一般柱长度不超过100cm,为得到高分辨率,可以将柱子串联使用.层析柱的直径和长度比一般在1:25-1:100之间.用于分组分离的凝胶柱,如脱盐柱由于对分辨率要求较低,所以一般比较短.
(2)凝胶柱的鉴定
凝胶柱的填装情况将直接影响分离效果,关于填装的方法前面已有介绍,这里主要介绍对填装好的凝胶柱的鉴定.凝胶柱填装后用肉眼观察应均匀、无纹路、无气泡.另外通常可以采用一种有色的物质,如蓝色葡聚糖-2000、血红蛋白等上柱,观察有色区带在柱中的洗脱行为以检测凝胶柱的均匀程度.如果色带狭窄、平整、均匀下降,则表明柱中的凝胶填装情况较好,可以使用;如果色带弥散、歪曲,则需重新装柱.另外值得一提的是,有时为了防止新凝胶柱对样品的吸附,可以用一些物质预先过柱,以消除吸附.
(3)洗脱液的选择
由于凝胶层析的分离原理是分子筛作用,它不象其它层析分离方式主要依赖于溶剂强度和选择性的改变来进行分离,在凝胶层析中流动相只是起运载工具的作用,一般不依赖于流动相性质和组成的改变来提高分辨率,改变洗脱液的主要目的是为了消除组分与固定相的吸附等相互作用,所以和其它层析方法相比,凝胶层析洗脱液的选择不那么严格.由于凝胶层析的分离机理简单以及凝胶稳定工作的pH 范围较广,所以洗脱液的选择主要取决于待分离样品,一般来说只要能溶解被洗脱物质并不使其变性的缓冲液都可以用于凝胶层析.为了防止凝胶可能有吸附作用,一般洗脱液都含有一定浓度的盐.
(4)加样量
关于加样前面已经有所介绍,要尽量快速、均匀.另外加样量对实验结果也可能造成较大的影响,加样过多,会造成洗脱峰的重叠,影响分离效果;加样过少,提纯后各组分量少、浓度较低,实验效率低.加样量的多少要根据具体的实验要求而定:凝胶柱较大,当然加样量就可以较大;样品中各组分分子量差异较大,加样量也可以较大;一般分级分离时加样体积约为凝胶柱床体积的1%-5%左右,而分组分离时加样体积可以较大,一般约为凝胶柱床体积的10%-25%.如果有条件可以首先以较小的加样量先进行一次分析,根据洗脱峰的情况来选择合适的加样量.设要分离的两个组分的洗脱体积分别为Ve1和Ve2,那么加样量不能超过(Ve1-Ve2).实际由于样品扩散,所以加样量应小于这个值.
从洗脱峰上看,如果所要的各个组分的洗脱峰分得很开,为了提高效率,可以适当增加加样量;如果各个组分的洗脱峰只是刚好分开或没有完全分开,则不能再加大加样量,甚至要减小加样量.另外加样前要注意,样品中的不溶物必须在上样前去掉,以免污染凝胶柱.样品的粘度不能过大,否则会影响分离效果.

Ⅳ 在核磁共振氢谱图(1H核磁共振谱图)中,只有一个吸收峰的物质是()A.CH3CH2OHB.CH3CH2CH3C.CH2=

核磁共振氢谱中只给出一种峰,说明该分子中的H原子都是等效的,只有1种H原子.
A.CH3CH2OH中有3种不同的氢原子,核磁共振氢谱中有3个峰,故A错误;
B.CH3CH2CH3有2种H原子,核磁共振氢谱中有2个峰,故B错误;
C.CH2=CH-CH3有3种H原子,核磁共振氢谱中有3个峰,故C错误;
D.CH3CH3有1种H原子,核磁共振氢谱中有1个峰,故D正确.
故选D.

Ⅵ 凝胶过滤法提取蛋白质的洗脱图谱为什么只出现一个峰值阿本来应该是有两个的

我是做了两次实验才成功,第一次只得到一个峰,第二次得到了两个峰。
原因我总结有如下几点:
1)、每支管收集的溶液量不一致,误差较大,导致只有一个吸收峰。

2)、可能是流速过快,小分子物质来不及扩散,与大分子物质一起被洗脱出来;或者是流速过慢,层析时间过长,小分子物质追上了大分子物质一起被洗脱出来。
3)、也可能是未能及时去接被洗脱出来的物质,有些成分已流出,只接到了后面流出来的物质,则为一个峰。
4)、样品未洗脱完全就终止了反应,小分子物质还停留在层析柱内,所以只收集到一种物质,只得到了一个峰。

【希望能帮到广大查询此问题的朋友们,因为我是被做实验报告讨论题给逼出来的。^_^】

Ⅶ DSC图谱显示出现两个峰,怎么解释

样品中含有水分,是正常的,都有水分,只是多少的问题,
如何快速检测样品含有多少水分含量?
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Ⅷ XRD图谱只有一个峰如何分析

楼上的回答有误。如果你做的是粉末衍射的话,只有一个峰,你要先在pdf卡片中找到最可能的物相是哪一个,然后看你的物质和标准卡片对比少了的峰是哪些,还有就是你测试的物质这个唯一的峰对应的是不是标准卡片上的最强峰。就你单独给个这个条件我还不好具体说,不过楼上的回答应该改为某一晶面的衍射峰越强,说明该晶面越多,因此取向越好,而不是取向弱。

Ⅸ 凝胶过滤法提取蛋白质的洗脱图谱为什么只出现一个峰值阿

分子筛层析通常要加入大于150毫摩的Nacl来防止蛋白质聚集沉淀的,你的平衡液中有吗?可能聚集而沉淀在柱子上了。

你跑完一个柱体积了吗?两个蛋白质相对分子质量相差大吗?若是不大,若果你的柱子分辨率不高的话,可能都在一个峰里面了。

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