离子交换层析的平衡缓冲液配方

㈠ 请教Good缓冲液的配方

Good's buffer是12种缓冲溶液的统称，主要应用于生物方面，它们具有一系列共性，比如pH接近中性，低离子强度等，具体资料可以参考英文wiki中Good's buffers一条

㈡ 过离子交换柱时，pH梯度洗脱缓冲液一般用什么缓冲液

如果不限定纯抄化方法，可以考虑亲和层析或离子交换，但根据你问题的意思，是选定离子交换。
此时就要考虑你蛋白的等电点了，如果等电点在你稳定pH之上，就用阳离子交换柱：
设计阳离子交换层析：将你的样品置换到你所指的稳定pH的running
buffer。同时装柱，平衡，然后上样，平衡，洗脱（因为你的pH不稳定，建议盐洗脱），收峰。得你的蛋白；
如果你的等电点在稳定pH之下，就用阴离子交换柱，其步骤如上，只是改变柱子类型。

㈢ 离子交换层析法原理是什么

离子交换层析法 （ion exchange chromatography，简称IEC）是从复杂的混合物中，分离性质相似大分子的方法之一，依据的原理是物质的酸碱性、极性，也就是所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质，对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力，改变冲洗液的离子强度和pH值，物质就能依次从层析柱中分离出来。
离子交换层析法大致分为5个步骤：
1. 离子扩散到树脂表面。
2. 离子通过树脂扩散到交换位置。
3. 在交换位置进行离子交换；被交换的分子所带电荷愈多，它与树脂的结合愈紧密，也就愈不容易被其它离子取代。
4. 被交换的离子扩散到树脂表面。
5. 冲洗液通过，被交换的离子扩散到外部溶液中。
离子交换树脂的交换反应是可逆的，遵循化学平衡的规律，定量的混合物通过管柱时，离子不断被交换，浓度逐渐降低，几乎全部都能被吸附在树脂上；在冲洗的过程中，由于连续添加新的交换溶液，所以会朝正反应方向移动，因而可以把树脂上的离子冲洗下来。
如果被纯化的物质是氨基酸类的分子，则分子上的净电荷取决于氨基酸的等电点和溶液的pH值，所以当溶液的pH 值较低，氨基酸分子带正电荷，它将结合到强酸性的阳离子交换树脂上；随着通过的缓冲液pH逐渐增加，氨基酸将逐渐失去正电荷，结合力减弱，最后被洗下来。由于不同的氨基酸等电点不同，这些氨基酸将依次被洗出，最先被洗出的是酸性氨基酸，如apartic acid和glutamic acid（在约pH3~4时），随后是中性氨基酸，如glycine和alanine。碱性氨基酸如arginine和lysine在pH值很高的缓冲液中仍带有正电荷，因此这些在约pH值高达10~11时才出现。

㈣ PBS缓冲液的配制

配制方法：

称取磷酸二氢钾(KH2PO4)，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，氯化钠(NaCl)，氯化钾(KCl)，吐温－20 ，加水。

PBS:Phosphate Buffered Saline

PBS 1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)：0.27g，

磷酸氢二钠(Na2HPO4)：1.42g，

氯化钠(NaCl)：8g，

氯化钾(KCl)0.2g，

加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L。

(4)离子交换层析的平衡缓冲液配方扩展阅读

PBS缓冲液的作用：

PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称，不仅伪狂犬病毒要用它稀释，一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。

原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性；生理盐水不具有调整pH的作用，对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应，所以使用PBS是首选。

PBS也不是万能的，有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高，就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分，维持最佳的条件保证生物活性物质保持其最完整的特性。

㈤ western blot 转移缓冲液的配方

转移缓冲液中不能含有sds的，sds会严重影响转印效果。

㈥ 怎么用离子交换层析分离等电点分别为4，6，7， 9 的蛋白质

6．洗脱：用含NaCL(0.2-0.6M)的0.02M
Tris-HCL
缓冲液
pH7.4(内含0.
等电聚焦电泳
（IEF）分离蛋白及测定
蛋白质等电点
一、原理
等电点聚焦
（IEF）

㈦ 求western blot 电泳液和转膜缓冲液的配方~~谢谢啦~~ 有的转移缓冲液加SDS有的没加，是为什么呢谢谢啦

我们实验室用的是：

5*SDS-PAGE电泳缓冲液 0.125M tris 15.1g, 1.25M glycine 94g,0.5% SDS 5.0g,加入800ml去离子水，搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。用的时候稀释成1*的就可以了。

转膜缓冲液的配制方法：39mM glycine 2.9g,48mM tris 5.8g, SDS 0.37g 加入600ml去离子水，充分搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至800ml后，加入200ml甲醇。室温保存。

㈧ 索伦森缓冲液配方，急！

我个人从国外网站中检索到所谓的索伦森缓冲液就是国内长用的磷酸钠缓冲液。配方也很常见。
没有回答的，我只能自己回答了。哈哈。

㈨ TAE缓冲液 配方

你好，我看了你的推断过程，有一个地方有误：Tris-乙酸不代表Tris与乙酸的比例是一比一，实际上配TAE时，根据所需的pH值，Tris与乙酸比例是2：1的。所以1X ：0.04mol/l Tris-乙酸=0.04mol/LTris碱以及0.02mol/L乙酸，相应地你就能算出是57.1ml冰乙酸了。

另外，你发现没有，按照你的1X的配方EDTA是0.001mol/L,那么乘以50为0.05mol/L，而50×配方中是0.1mol/L。这两种配方都是正确的：分子克隆附录上面取的是0.05mol/L，takara的技术手册上用的是0.1mol/L，这个影响不大，主要是鳌合Mg，抑制DNase活性。
希望能够帮到你，有问题继续交流！