导航:首页 > 净水问答 > 蛋白浓缩超滤管转速

蛋白浓缩超滤管转速

发布时间:2021-01-27 20:04:05

A. 15ml,10kd超滤管转速要多大

1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截版留分子量不应大于权目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。

2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。

3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。

注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开
离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。

B. 蛋白用超滤管浓缩容易沉淀怎么办

可能是抄这个蛋白的水溶性较差,也就是只能保持在一定浓度不能太高
另外就和这个蛋白的稳定性有关了,超滤时保持低温,体积缩小一点后就把滤液混匀避免局部浓度过高,选择更合适的缓冲液,添加一点甘油等小分子物质等都可以增加蛋白的稳定性。

C. 要50kd的蛋白用什么规格的超滤管

截留分子量5万道尔顿的超滤膜。

D. 如何用蛋白浓缩管

选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。

通常应回截留分子量答不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。

新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。

(4)蛋白浓缩超滤管转速扩展阅读:

超滤浓缩离心管,最新推出专利产品Hydrosart膜2K型,具有极低的蛋白吸附特性,高流速、高通量,是免疫球蛋白浓缩和脱盐的理想用膜。

备有四种材质的超滤膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,可根据不同要求灵活选用;两种回收浓缩液的方法:既可用吸管直接吸取并回收,又可将离心管放入离心机反甩,将浓缩液甩入回收帽中,加盖保存。这两种方法都可使浓缩液达到近乎完全回收;

E. 蛋白在超滤管浓缩过程中出现沉淀怎么办

1、选择合抄适的超滤管,主要考虑袭MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。

2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。

3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。

注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开
离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。

F. 超滤离心管怎么使用

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。

G. 蛋白大小为27.8kd,应该用多大的超滤管截流

3KD指的是截留分子量
截留分子量(MWCO:molecular weight cutoff)是使用分子量大小表示的超滤膜的内截留性能,又称容作切割分子量。
由于直接测定超滤膜的孔径相当困难,所以使用已知分子量的球状物质进行测定。如膜对被截留物质的截留率大于90%时,就用被截留物质的分子量表示膜的截留性能,称为膜的截留分子量。实际上,所使用的物质并非绝对的球形,由于试验条件的限制,所测定的截留率也有一定的误差,所以截留分子量不能绝对表示膜的分离性能。也就是说3KD分子量的产品有可能透过膜也有可能被膜拦截,一般来说希望3KD的产品全部透过,需要选择截留分子量更大的膜,比如5KD

H. 同一个超滤浓缩管可以用来纯化不同的蛋白吗

不可以的
不管是哪个公司生产超滤浓缩管使用后都会有蛋白残留在滤膜上,而不管是使回用氯化钠或答者氢氧化钠清洗都不能确保可以完全清理掉残留在膜上的蛋白。
如果不同的蛋白间混合使用,可能前一个蛋白会污染到后一个蛋白,甚至有些某些高活性的酶残留在上面会造成后一个蛋白被酶切降解,造成不必要的损失。

I. 超滤浓缩离心管使用前要怎么处理

可能不来同厂家的产品保存运输条源件不一样。
如果有甘油等保护剂,那就一定要洗干净再加样品。
干的超滤管也要先润湿再用,否则可能不能完全利用膜面积。
最好,用样品buffer润洗下再加样,最大程度保证蛋白活性。尤其是用过后保存在NaOH或乙醇中后。
一般还是离心机甩一下好,使膜充分浸润。

降低吸附的办法有:
1,蛋白浓度不要过低
2,尽量选用纤维素的低吸附超滤管
3,用前可以用Tween 80等去垢剂润洗(不影响蛋白活性的前提下)
4,加入保护蛋白,如BSA(不影响蛋白后续使用的前提下)

用完保存在20% EtOH中,4C保存,防止长菌,依不同样品可以重复使用不同的次数。

阅读全文

与蛋白浓缩超滤管转速相关的资料

热点内容
恐怖电影什么无限制 浏览:597
朴银狐代表作品我朋友的婶婶 浏览:935
提供一个免费看电视剧不卡的网站 浏览:544
丁度巴拉斯黑天使剧照 浏览:859
制造机甲小说 浏览:546
男主已婚女主第三者po推荐 浏览:905
反渗透纯净水设备是什么意思 浏览:769
一个污水井有三个标高代表什么 浏览:212
梦筱二作品人物关系图 浏览:461
污水厂测试机器要精通什么 浏览:890
韩国高清爱情片大全 浏览:827
主角在民国和现代来回穿越的小说 浏览:939
临夏污水管道清洗哪里有 浏览:977
美国女子在监狱越狱的电影 浏览:324
85电影官网 浏览:192
宿州树脂瓦厂家价格 浏览:134
美国很黄很重口的电影 浏览:677
女老师拍片被儿子同学认出电影名字 浏览:853
活性炭吸附法污水1992 浏览:262
韩国电影在一座岛 浏览:457