『壹』 高效液相为什么不出峰，与流动相有关吗
如果你用紫外检测器的话，需要调节紫外检测器的波长。
这个与你换什么溶剂定容是没有关系的。
还有一种可能是，你选择色谱柱不合适，对生物碱的吸附太强，导致样品滞留在色谱柱中，所以不会出峰了。
先排除仪器和柱子的问题，按柱子出厂说明书上的条件走一针甲苯溶液（100ppm左右），看看峰形和理论塔板数，如果一切正常，那就是说明样品出了问题，可能是分解了。
你做的是什么样品，柱子合适不？不同的柱子会有不同的效果，和波长肯定有关系了。如果不确定合适的波长可以放到紫外下扫描一下最大吸收峰
也就是说，之前的人有作出结果来,而你现在不行了？那就走甲醇，0.1流速走通宵，不敢走通宵的话就走一整天，然后再看看结果，实在不行联系工程师
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『贰』 为什么高效液相色谱要用甲醇和水做洗脱剂
因为水的极性最高，甲醇也是强极性的，如果你是做反相色谱（流动相极性强于固定相）通常就是用甲醇和水做流动相，如果是正相色谱可以使用极性较低的溶剂，如乙酸乙酯、苯之类的，一般来讲液相色谱法大多数是反相色谱，所以使用甲醇水做流动相很常见，流动相可以100%的甲醇，但是没办法100%的水，因为纯水做流动相压力过大，仪器承受不住。
『叁』 高效液相色谱仪是以什么为流动相
甲醇或乙腈和水按比例混合，也有用纯甲醇、纯乙腈、纯水这样的单一成分的流动相，当然有些还会加一些微量的缓冲剂。
对应不同的色谱柱，用不同的流动相。
『肆』 纯水是否能通过高效液相色谱柱
看是什么柱子，有一些做糖的柱子就是要求纯水做流动相的。但一般的C8或C18柱子不行，要求最少5%有机相，以防对色谱柱伤害
『伍』 液相色谱里面能只用水做流动相吗
这个得看你的色谱柱。
一般的反相色谱柱不耐纯水。如果用的话会特别费。专
我当初做过属一个实验，流动相是0.025mol/L的KH2PO4，色谱柱是C18柱，大概半个月换一根吧。
特殊的色谱柱可以耐受纯水，但是可能分离效果不好，峰型也不一定好。
另外，纯水很 容 易 长微生物。一般纯净水开瓶之后在25℃放置1天，过滤的速度就会缓慢，放三天就浑浊了。如果你的流动相是纯水，那么系统、色谱柱很容易堵塞。所以不建议使用。
『陆』 高效液相色谱的流动相要经过哪些处理
流动相要先过滤，超声脱气后方可使用。
另外选用试剂是要选用色谱级的专，过滤时选择合属适的滤膜。流动相最好现配现用，不要保存太长时间。
使用旋转蒸发仪上的真空泵 抽空气20min，可以达到脱气的作用。使用滤膜过滤掉杂质。
流动相必须过滤膜，用前要超声除气泡半个小时左右，否则基线不稳
仪器和色谱柱先要用有机溶剂（如乙腈等）好好清洗一下，待基线平衡后才能进一步工作，乙腈和水混合的流动性最好先超声抽滤脱气，准备工作做好了会节省好多时间。
若用色谱纯的乙腈和超纯水做流动相，流动相可以不用过滤膜，但超纯水需要超声约30分钟脱气。
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