尾静脉回输用什么重悬细胞

1. rnai小鼠体内实验时，尾静脉注射siRNA后，怎样观察肝细胞和脾细胞摄取siRNA的比例

siRNA用荧光标记。注射后在规定时间去肝和脾，用流式细胞仪计数阳性细胞

2. DI-CIK细胞

目的 恶性肿瘤的发生率与致死率依然呈上升趋势,作为一种有可能治愈肿瘤的新型方法,过继免疫治疗得到广泛关注,其中细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inced killer cells, CIK)免疫治疗已被广泛应用。目前,临床上主要应用的是外周血来源的CIK细胞,但外周血CIK细胞免疫治疗存在一定的缺陷性,如增殖速率低、体内存活时间短,抗凋亡能力差。本研究主要比较了脐血与肿瘤患者外周血来源CIK细胞的增殖、免疫表型、免疫原性、激活型和抑制型表面标志物、耐药基因ABCG2的表达及化疗药物处理后的抗凋亡能力;并建立食管癌的移植瘤模型,比较两种CIK细胞在体内杀伤肿瘤细胞的能力。 方法 使用Ficoll-Plaque淋巴分离液分离脐血单个核细胞(cord blood mononuclear cell, CBMC)及肿瘤患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),重悬于RPMI1640培养基(含10%胎牛血清),加入细胞因子IFN-γ (interferon-γ),抗CD3单抗和IL-2(interlukin-2)诱导培养CIK。使用流式细胞术检测脐血与外周血CIK的增殖、免疫表型、免疫原性、激活型表面标志物(CD28、CD27)和抑制型表面标志物(PD-1)的表达;采用Annexin V/PI双染法检测顺铂处理后CIK细胞的凋亡情况;使用qRT-PCR检测耐药基因ABCG2的表达;使用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测IFN-γ、IL-2、TNF-α (tumor necrosis factor-α)的分泌;使用流式细胞术检测CIK细胞CD107a的表达;另外,购买5周龄的Balb/c裸鼠,随机分为3组,每组5只。裸鼠.皮下接种1×107个KYSE70细胞,成瘤后,通过尾静脉分别输注磷酸盐缓冲液(Phosphatate buffered salin, PBS)、脐血CIK细胞、外周血CIK细胞一次,然后观察皮下肿瘤体积变化。 结果 脐血CIK培养第10d时增殖指数(proliferation index, PI)显著高于外周血CIK [(251.52±16.76) vs (158.00±43.19), P<0.05]。脐血CIK经诱导培养13d后HLAⅠ、HLAⅡ的表达显著低于外周血CIK[(18.86±±9.76)%vs(65.63±10.02),(14.53±3.34)%vs(67.20±±4.50)%,P<0.01],其中CD8HLAⅡ、CD4HLAⅡ和CD8HLAⅠ的表达较外周血CIK低[(5.86±0.53)%vs(51.20±4.85)%,(2.32±±0.34)%vs(12.42±±3.65)%,(17.56±±1.85)%vs(52.10±±5.72)%,P<0.05], CD4HLAⅠ的表达无差异(P>0.05)。脐血CIK中CD3+CD56+细胞比例较外周血CIK高[(21.20±±4.82)%vs(10.06±±3.46)%,P<0.05];脐血CIK中激活型CD4+CD28+、CD4+CD27+和CD8+CD27+T细胞比例较外周血CIK中高[(32.40±±16.81)%vs(18.65±±9.23)%,(27.48±±13.53)%vs(0.98±±0.55)%,(41.76±13.98)%vs(2.58±±2.10)%,P<0.05或P<0.01];而抑制型CD8+PD-1+T细胞的含量明显较低[(3.25±2.13)%vs(8.05±±9.23)%,P<0.01],两者中CD8+CD28+、CD4+PD-1+T细胞的含量无显著差异(P>0.05)。此外,脐血CIK高表达耐药基因ABCG2。顺铂处理13d后的脐血CIK细胞凋亡率显著低于外周血CIK细胞[(10.10±4.20)%vs (27.12±12.18)%, P<0.05]。 ELISA检测显示脐血CIK分泌的IFN-γ、IL-2较外周血CIK高(P<0.01),TNF-α的分泌无显著差异[(4.70±0.44)pg/ml vs (4.82±0.51)pg/mL, P>0.05]。脐血CIK上CD107a的表达显著高于外周血CIK细胞[(9.16±±1.58)%vs(2.36±±0.86)%,P<0.01]。裸鼠体内试验表明,脐血CIK杀肿瘤的能力显著高于外周血CIK。 结论 与外周血CIK相比,脐血CIK增殖能力强、活化水平高、抗凋亡能力强、细胞因子分泌水平高,并且对肿瘤的杀伤功能强、治疗效果好,具有较佳的临床应用潜能。

3. 【求助】全血里破脆红细胞后白细胞的重悬能用PBS吗急!

急! 我现在做全血里提取DNA用做基因CA的测序用,用的试剂盒是Promage的产品,我按照说明书操作,在用细胞裂解液破脆红细胞后,说明书上写离心后尽量吸掉上清,但又说残留液体10-15微升,我想我把上清完全吸掉后,怎么让白细胞重悬呢?谢谢各位高手!!你可以直接用细胞裂解液来裂解白细胞的，上面裂解红细胞的细胞裂解液应该称为红细胞裂解液吧（可以看一下分子克隆上关于全血dna的提取 page484），把上清都去掉好了，这对dna的提取没有什么影响，，没有影响的，我都是先用红细胞裂解液来裂解红细胞，再用PBS（7.4）重悬。

4. 细胞传代比例不太明白，例如1：3传细胞，要加多少培养液重悬，然后分成几瓶呢谢了，尽可能详细易懂点！

比如你是1：3传代，原先细胞瓶内的培养基时10ml，要加30ml新鲜培养基重悬，再把这30ml重悬液平均分到3个细胞培养瓶内培养。

5. 可以直接用0.1%bsa重悬细胞因子吗

细胞因子购买到的产品形式一般为冻干粉，请参考说明书了解其原来的制剂形式。并用厂家推荐的方式进行复溶，而后用厂家的制剂形式（例如PBS）进行0.2%（或者更高浓度）和0.1%的制备；最终保证分装前细胞因子溶液中的BSA含量为0.1%。分装操作请务

6. 除了改良苯酚品红染色,还有哪些染色方法可以检测植物细胞程序性死亡,其原理是

用台盼蓝染色，死细胞会被染成蓝色，而活细胞不着色，从而判断细胞死活

死细胞的鉴别一般通过DNA结合染料排除，利用死细胞膜通透性增大、不破膜的情况下DNA染料即可进入的特点区分出死细胞，但所用染料浓度、时间远远低于细胞周期所用的浓度，并且不需要固定。

常用的核酸结合死活鉴别染料包括：

碘化丙啶（propidium iodide，PI）

4'，6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐（4',6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride，DAPI）

7-氨基 - 放线菌素D（7-amino-actinomycin D ，7-AAD）

DRAQ7

SYTOX

不过对于一些胞内抗原（细胞因子、转录因子），由于需要固定、破膜，所以上述染料中，除了一些胺类染料（如Live/Dead、Ghost等）和新型蒽醌类染料CyTRAK Orange外，其它染料不再适合此类标本的细胞死活鉴别。

这里，只向大家讲解一下用PI、7-AAD、DAPI的染色方法，其它商品化死活染料请按照说明书操作：

1. 用0.5ml 1×PBS重悬细胞。

2. 加入PI或DAPI或7-AAD，终浓度分别为PI（5 µg/ml）、DAPI（500-1000 ng/ml）、7-AAD（2.5 µM）

3. 加入上述染料后，尽快上机，一般不要超过5分钟（有些厂家说明书写着10分钟，可能与浓度有关，可按照说明书操作）。

PI检测通道：使用488 nm激发，用610/20 BP收集

DAPI检测通道：最好用355nm激发，用440/40BP收集；也可以用405nm激发，450/50BP收集

7-AAD检测通道：用488nm激发，用670/14BP收集

下图是用PI检测细胞死活的结果图：

1、细胞死亡：细胞死亡作为生物体的一种常见现象，在动物细胞中有三种方式：凋亡（apoptosis），自噬（autophagy）和坏死（necrosis）。前两种类型属于细胞程序性死亡（programmedcelldeath，PCD）。细胞坏死是细胞在遭受极度刺激时引起的细胞死亡，以细胞质膜的破裂为特征，造成内含物的炎性泄露，是一种非正常死亡。细胞的PCD是细胞的一种“主动性”死亡行为，从形态上和功能上都与细胞坏死有很大的不同。

2、植物中细胞程序性死亡（PCD）：目前可依据液泡膜破裂后，是否在细胞质中发生快速降解将PCD分为两个大类。第一类为自溶性（autolytic）PCD，与液泡中的水解酶的释放有关，在液泡破裂后，导致细胞质的快速清除。第二种为非自溶PCD，（non-autolytic），即液泡膜破裂但是没有出现快速的细胞质的清除。目前鉴定细胞的PCD类型，还是以细胞形态学为主。

3、动植物细胞凋亡标准：动物：凋亡：凋亡小体，或者在细胞表面的水泡，感染病原体后在其他细胞中的降解。自噬：自噬小体，自溶酶体，和小的促进细胞溶解的液泡数目的增加坏死：没有上面的定义的标准。植物：自溶：植物膜破裂之后对细胞质的快速清理。非自溶：没有对细胞质的快速清理。其他：染色质浓缩细胞核破裂自我标记信号自食信号细胞膨胀，细胞器膨胀，质膜破裂染色质浓缩。液泡体积增加（细胞质体积减小）需要Ca2+的内流，细胞质皱缩，细胞器膨胀，小泡增多但体积不增加。

7. 细胞超声破碎前，需用PBS裂解液重悬，反复冻融，请问这里的PBS配方是什么(pH=7.4应该)

PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。它是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液，主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。

PBS1L配方pH7.4：
磷酸二氢钾(KH2PO4)：0.27g，
磷酸氢二钠(Na2HPO4)：1.42g，
氯化钠(NaCl)：8g，
氯化钾(KCl)0.2g，
加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L

8. 流式细胞仪 分选上样时可否用培养基重悬细胞

问题不大，不过还要先用一小部分先测试一下。常规的培养基有时候以为蛋白质浓度过高，会影响到分选液滴的稳定性。如果影响很大，建议换到PBS

9. 肝细胞培养为什么要用DMEM培养基重悬，量是多少啊一般用多少ml的培养瓶培养

我养的是HL7702细胞~用的是20*20ml。以细胞传代为例（1:2传代）：先去掉上清(除去死细胞)，pbs2ml洗一下~去除后加1ml胰酶消化细胞（1.5分钟左右）~加1mlDMEM终止消化~离心去除上清~加2mlDMEM吹打重悬~每个培养皿中各加1ml重悬液~再各加入3mlDMEM培养细胞~细胞重悬一般是为了继续试验或传代~查文献的话可以知道什么细胞该用哪种培养液~

10. 细胞培养离心收集细胞时为了让细胞能完全重悬,应如何操作

加入差不多两倍体积的培养液或盐水轻轻吹打混匀即可！