A. PCR扩增目的基因以后,怎么用琼脂糖电泳回收及纯化呢希望高手指教!
可以用回收试剂盒。举例如下:
DNA的回收使用AXYGEN公司AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒,回收步骤如下:
1、 在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶,用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量(提前记录1.5 ml离心管重量),该重量作为一个凝胶体积(如100 mg=100 μl体积);
2、 加入3个凝胶体积的Buffer DE-A,混合均匀后于75 ℃加热,,间断混合(每2-3 min),直至凝胶块完全融化(约6-8 min);
3、 加0.5个Buffer DE-B,混合均匀;
4、 吸取步骤3中混合液,转移到DNA制备管(置于2 ml( 试剂盒内提供)离心管)中,12,000×g离心1 min,弃滤液;
5、 将制备管置回2 ml离心管,加500 μlBuffer W1,12,000×g离心30 s,弃滤液;
6、 将制备管置回2 ml离心管,加500 μlBuffer W2,12,000×g离心30 s,弃滤液,用同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次12,000×g离心1 min;
7、 将制备管置回2 ml离心管,12,000×g离心1 min;
8、 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备膜中央加25-30 μlEluent,室温静置1 min,12,000×g离心1 min洗脱DNA。
如果片段较大,如几千kb以上建议用promega公司的回收试剂盒这样效果较好。
具体的步骤什么的回收试剂盒里均有说明书。