中性树脂封片实验步骤

⑴ he染色的操作步骤

HE染色步骤：

1、脱蜡，脱蜡二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10分钟，事先准备好盖玻片。

2、覆水，100%（Ⅰ、Ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5分钟，自来水冲洗5分钟×3。

3.、苏木精染色5分钟，根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间，流水冲洗。

4、5%乙酸分化1分钟，流水冲洗，用吸管滴加乙酸，布满玻片上的组织即可，分化后颜色变浅了一些，成为蓝色。

5、返蓝：返蓝液，实验室没有，也可不用。

6、伊红染色1分钟，根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间，流水冲洗。

7、脱水：70%、80%、90%、100%酒精各10秒，二甲苯1分钟，可以在通风橱自然晾干再封

片，约5分钟左右。

8、滴上中性树胶，封片，用吸管滴上一滴即可，尽量少滴，但压片后要将组织全部覆盖完，避免中间有气泡。

(1)中性树脂封片实验步骤扩展阅读：

he染色原理：

易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia )；而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性（neutrophilia)。

构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。

而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。

所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

⑵ 谁能告诉我石蜡封片怎样操作

是经典的石蜡切片还是石蜡封片呢？
石蜡切片的最后一步就是封片
我们做的步骤是用中性树胶封片
封片的过程中最应该注意的就是中性树胶不要过多也不要过少，过多会溢出来，过少会出现空隙；详细的量就要自己经验掌握了。
另一个就是在放盖玻片的时候动作要慢，不要有气泡，如果有少量的气泡，可以用解剖针较粗的那头轻轻按压盖玻片赶出气泡，如果气泡过多，那就没办法了。

⑶ 用中性树脂胶粘盖薄片有什么办法能干的快点儿呢

晚上好，已经黏合好的只能通过物理加热的方式使其尽快交联固化。如果你专的树脂胶是单组份属溶剂型，可以考虑往里面加一些低沸点高溶解力的有机溶剂来加快挥发成膜速率比如乙酸乙酯和丙酮，双组份通过加大B组固化剂的添加量也能明显加快交联时间请酌情参考。因为单组份树脂胶水一般都是以溶剂挥发后高聚物自干成膜为基础，升温是唯一也是最有效的方法。

⑷ 中性树脂封片用什么溶解中性树脂

可以试试飞秒实验室的脱胶剂，或则脱漆剂，都可以，或者你自己用醇试试

⑸ 如何做树脂吸附试验包括树脂如何预处理，装柱，吸附，再生等操作步骤和注意事项

吸附树脂装柱：湿法装柱，先于吸附柱中加入一定量的纯水，然后加入树脂，也可水与专树脂同属时加入柱内，这样可以防止气泡产生
吸附树脂柱预处理：可用2倍体积1mol/l的碱液过柱，水洗至中性，后再用2倍体积1mol/l酸液过柱，水洗至中性（根据所要吸附物料的PH值大小，选择酸碱加入的顺序）。也可使用甲醇、乙醇有机溶液洗剂（效果更好）
树脂再生：根据吸附的物料性质，若吸附碱性物质，则选择酸解析，若吸附酸性物质，则选择碱解析（酸碱加热解析效果更好），若酸碱都不易解析，可选择醇溶液解析

树脂运行过程中，要注意保证树脂层上必须有液体存在，防止液体流干，出现干柱，产生偏流现象，影响吸附效果；选择合适的再生剂，否则树脂性能下降很快；吸附过程要注意流速，不可过快

暂时想到这么多，有问题可以随时找我

⑹ 中性树胶封片多久干

中性树胶封片3个小时干。

中性树胶是将载玻片和盖玻片粘合在一起的一种粘合剂，用于长久保留生物组织切片封存。中性树胶透明度高，几乎和光学玻璃一样清晰。

该货品属中性，不会腐蚀玻璃。如果不放心可以在粘合以前用盐酸酒精泡一泡，晒干再粘合会更好。

中性树胶是显微技术上使用的优良封藏剂，与加拿大树胶性质相似，用途相同。中性树胶是一种天然树胶，经提炼与中和后溶解在二甲苯中成60%溶液，折光率与玻璃近似，干燥后凝结成透明无色的固体。

中性树胶，是一种粘合剂，用于将载玻片和盖玻片粘合在一起，把生物组织切片封起来长久保留。

不过中性树胶有些缺点，它是以二甲苯为溶剂的，封合后挥发很慢，制作的玻片起码在通风处晾一两个月才没有二甲苯的味道。可能在烈日下暴晒会快点。

封片方法很简单，在载玻片中央滴2-3滴树胶液（注意要滴在一起否则容易有气泡），然后把盖玻片慢慢放上去，轻轻挤压，树胶液会向外侧扩散至整个镜片。

通风晾几个小时后用棉球粘上二甲苯或者松节油把镜片边缘多余的树胶擦洗干净。然后再放在通风处晾2个月。

⑺ HE染色的方法步骤及注意事项

一、实验步骤：

（1）样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1×105/ml，滴加于盖玻片上(置于6孔板中)，培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS 洗涤3次。

（2）样品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1min。

（3）染核：苏木素染液染色2-3min，自来水洗涤。

（4）分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1%盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。

（5）染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。

（6）吹干或自然晾干细胞 爬片后，中性树胶封片。

若细胞用4%多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5min即可。

二、注意事项：

1、染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2、切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。

3、切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。

4、在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。

5、切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。

6、最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。

(7)中性树脂封片实验步骤扩展阅读

一、细胞核染色原理：

苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外。

使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

二、细胞浆染色原理：

细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。

当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。

伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。

⑻ 有哪位高手能详细指导一下用transwell板做细胞趋化实验的具体方法和步骤吗

1 材料与方法

1. 1
Matrigel：Becton Dickinson Compary, - 20 ℃保存；

Tanswell plate：Costar ,USA , # 3422 ,聚碳酯膜微孔直径为8μm；

苏木素染液，梯度乙醇，二甲苯溶液。

1. 2 趋化因子的制备 取传代第二天长势良好的NIH3T3细胞,无血清培养基轻柔漂洗两次; 加入无血清培养基,37℃,5 %CO2 培养24 h～48h，收集细胞培养上清；4 ℃,12 000rpm 离心,10 min ,取上清；0.22 μm 滤膜过滤除菌；分装,在- 20 ℃保存。

1. 3
transwell 培养板准备 所有操作均需无菌操作。-20℃保存的Matrigel 在冰上保2℃～8℃过夜融化。在冰上用预冷的枪头吸取100μl Matrigel 加入冰预冷的300μl 无血清培养基中,充分混均。取上述稀释的Matrigel 25 μl 加入transwell 板上室,覆盖整个聚碳酯膜,37 ℃,30 min ,使Matrigel 聚合成胶。已铺好Matrigel的transwell 培养板置于37℃可保存2 周。

1. 4
Matrigel 侵袭实验(Matrigel Invasion Assay)刺激后的各组细胞用PBS 漂洗3 次。以常规方法用无血清培养基制备单细胞悬液,5 ×105个细胞/ ml ,每组细胞各分为两部分。胎盘兰拒染实验,细胞活力需大于95 %。Transwell 培养板上室加入100μl 细胞悬液( 5 ×104 个) 并加入无血清培养基200 ul 。Transwell 培养板下室加入500μl 趋化因子,37℃,5 %CO2 培养24 h。用湿棉签轻轻擦去Matrigel 凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞。小心取出上室,用线拴住,并做好标记,用冰预冷的甲醇固定30 min。苏木素染色1 min。梯度乙醇脱水(80 % ,95 % ,100 %) ,二甲苯透明。小心将聚碳酯膜自上室基底切取下来,置载玻片上中性树脂封片。附着于聚碳酯膜下表面的细胞在高倍镜下( ×400) 随机取6 个视野[1 ] 计数,取平均数。重复实验两次。

注意 2. 1
NIH3T3 细胞制备的趋化因子与胎牛血清 趋化因子是能使细胞产生趋化运动的一类细胞因子[2 ] 。目前利用NIH3T3 细胞制备趋化因子做细胞体外侵袭实验的实验室比较多,时间较长且实验步骤繁琐。众所周知,胎牛血清中有趋化因子,我们在不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810 胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱实验中发现用胎牛血清和用NIH3T3 细胞制备的趋化因子做细胞体外侵袭实验效果是一样的,两组迁移的细胞数很接近。在实验时间上，用NIH3 T3细胞制备趋化因子做细胞体外侵袭实验周期为1 周,而用胎牛血清作趋化因子做细胞体外侵袭实验周期为2 d ,实验时间节省了很多。因此认为可以用胎牛血清来代替NIH3T3 细胞制备的趋化因子。

2. 2 细胞的准备 所需细胞应处在对数生长期,细胞活力需大于95 %。如果细胞活力小,就会造成细胞穿透能力下降,影响实验结果。

2. 3 擦去Matrigel 凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞 先用干棉签将上室内液体吸去,再用蒸馏水浸湿的棉签轻轻擦去Mat rigel 凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞,如果没有擦净聚碳酯膜上表面的细胞,在细胞计数时就会将没擦掉的细胞也计进来。尤其是细胞为圆形的时候,就会分辨不出是穿过去的细胞还是没穿过去的细胞,对于长梭形细胞来说,穿过去的细胞为长梭形,没穿过去的细胞多为圆形。

2. 4 苏木素染色 上室浸泡在新苏木素中的时间为1 min ,用过多次的苏木素为2 min。在研究粉防己碱对HUVEC 人类脐静脉内皮细胞迁移能力的抑制作用没有将多余苏木素洗去,直接脱水、透明,造成细胞图片背景模糊,细胞不清楚(见图1) 。在作不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810 胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱实验时我们将其置于盛有自来水的烧杯中,反复漂洗几次,将多余苏木素洗去再行脱水、透明;这样做出的细胞图片背景干净,细胞清楚(见图2) 。

⑼ 中性树胶是固体还是液体，用它作石蜡切片封片剂的配方

中性树胶一般用强化学试剂去除，但这些试剂均有毒怎么能用它来洗手？ 过不了多久自会掉的，我上次用中性树胶封片沾在手上，一天过去就没什么了