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724树脂怎么收集尿激酶

发布时间:2021-03-05 01:55:54

❶ 尿激酶怎么提取

提取方抄法:
1收集:桶袭装满尿液后,存放在阴凉处。调尿液的PH直到6.5以下。夏季尿液易变质,为了防尉面增加0.8的苯酚。每次收集的尿液应
在8小时内处理完。
2沉淀处理:尿液保持在10℃以下,用氢氧化钠调PH值到8.5,揽拌均匀,静置l小时,沉淀后用胶皮管虹吸抽出上层清液,酸化到PH
值5—5.5。
3硅藻土吸附。按酸化后尿液量l的比例,加入预先清洗处理成中性
的硅藻土,在5℃下吸附】小时。
4洗脱。先把硅藻土吸附物用5℃的凉水洗涤1次,然后装入硅藻土柱(柱比1。1)中,用0.02%的氨水洗涤,使洗出液由浑变清,立即再用0.02的氨水和0.1m的氯化钠溶液洗涤。当硅藻土柱上淌出
的水由清交浑时,即开始收集尿激酶。
注:一般从1000公斤人尿中可收集粗制尿激酶液l5升目前粗制尿激酶液主要是由设备较全的生物化学制药厂制成尿激酶精品。

❷ 多少尿液能提取多少尿激酶政府支持收集尿液提取尿激酶吗

一吨尿液可以提取90克左右的粗品,尿激酶粗品价格一个亿单位5000元.

❸ 尿激酶的制造方法

尿激酶系70年代发展的治疗血栓疾病的新药,是此类药物中安全度 大和疗效好的品种,国外仅有少数国家有生产。其生产方法一般采用塑料桶收集新鲜男性尿液后迅速冷却,成桶运回工厂进行分离、提纯,制得高纯度静脉用制剂。此方法操作繁杂,耗费人力,设备要求高,收率低,药价十分昂贵。为了填补国内空白,寻找一个从人尿中简便而低成本的制备高纯度尿激酶的工业生产方法,上海医药工业研究院于 1974年开始进行了本课题的研究。 在研究中创造了尿激酶连续自动吸附装置,并研究选用了国产724树脂作吸附剂和特定的吸附洗脱条件。可在公共厕所就地吸附,避免了收集尿源的繁杂过程。研究成功高纯度尿激酶制取新工艺中发现了一种文献中从未报导过的尿激酶复合物,找出了该复合物的解离方法,从而,使尿激酶总收率提高到50%以上。高分子量尿激酶含量在90% 以上,总收率超过25%,纯度35000~50000单位/毫克蛋白。高盐浓度过滤除菌法突 破了国外严格保密的技术关键,尿激酶回收达100%。解决了尿激酶稳定性制剂的配方, 达到国外同类产品的水平。临床使用于各种血栓症,总有效率达70%,与国外报导的 相似。 尿激酶的研究成功,填补了我国的空白,为我国心脑血管疾病提供了一个疗效确切 的新药。生产工艺简便,效率高,成本低。鉴定意见:上海医工院创制的以国产724树脂为吸附剂的新工艺,既可以成桶收 尿吸附,又可以采用自行设计研制成功的连续式吸附装置在大中型公共厕所中就地提取 尿激酶,每吨小便可提得尿激酶300万单位。该装置具有收尿方便,有益于产品质量,大 大节约了劳动力,设备简单,成本低廉的特点;并能采用国产DEAE纤维素与724树 脂进行精制提纯。该工艺经中试证明是可行的,收率达30%以上,质量达国外同类产品 水平,纯度在临床阶段为1.5万国际单位/毫克蛋白,后经研究达3.5万国际单位/毫克 蛋白。

❹ 在线等!急...请问从尿激酶粗品中提取尿激酶大致生产过程是什么会产生哪些废弃物有污染吗

污染是有的!只要处理得当就没事!

❺ 尿激酶粗品生产中尿激酶粗品克单位效价低是怎么回事呢

主要与吸附吸附后冲洗、硅藻土过滤后收集的数量等因素有关。扬州艾迪生物科技有限公司免费男性尿蛋白粗品技术咨询服务
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❻ 本人想搞尿激酶的生产,请求帮助,谢谢!

尿激酶是从男性尿中提取的一种生化药物,广泛应用于治疗新鲜血栓性闭塞性疾病、肺栓塞、急性脑血栓形成,脑血管栓塞以及视网膜中央静脉血栓形成。我国由于人口众多,资源丰富,劳动力价格低廉,因而尿激酶粗品的生产遍及全国各地。在生产的尿激酶粗品中,仅有一部分经过精制成精品出口,不少粗品直接出口,让外商赚取了大量的利润。研究纯化尿激酶的技术与方法以及提高纯化过程中各道工序尿激酶的收率,提高尿激酶产品的高附加值,利用再生资源,出口创汇,利国利民,具有显著的经济与社会效益和重要意义。
一、主要材料
尿激酶粗品(硅胶法生产),甘氨酸(C·P)、硫酸(A·R)、氢氧化钠(A·R)、盐酸
(A·R)、磷酸二氢钠(C·P)、磷酸氢二钠,叠氮化钠(A·R),714树脂,CM一S。

二、试验过程与技术条件
(一)解析
1.取尿激酶粗品200克(经测定,比活为325iu/mgP),悬浮于8倍量的。.SM甘氨酸缓冲液中,尿激酶浓度在45ooiu/ml,维持低温,搅拌75分钟,静置45分钟,上清液经虹吸与底部沉淀分开。
2.虹吸上清液后的沉淀加入1倍量的甘氨酸缓冲液,处理同上,取上清液.
3.合并两次上清液,在低温下缓慢加入SNH:50.调PHlo.。士。.1(取样测定价).
(二)714树脂脱色
1.按解析液效价每亿单位用1.4kg树脂上柱,树脂用蒸馏水洗几个床体积后备用。
2.将PH10·。的解析液上柱,流速控制在1.8~2.oml/cmZ分,收集流出液,上柱完毕后,,柱用一个床体积的低温蒸馏水洗涤.
3.合并柱流出液用sNHZSO‘调PH为10.0士0.1.
(三)超滤处理
1.将PH为10.。的脱色液用超滤器超滤脱盐,超滤浓缩至原体积的六分之一左右。
2.浓缩液中加入低温蒸馏水,稀释至电导4.smV(10℃)。
3.再次浓缩至六分之一体积。
4.二次浓缩液中加人低温。.18M、PH6.8磷酸缓冲液及蒸馏水稀释至原体积,二者加入的比例应使稀释液电导为4.8士0.lmV(10℃时)。
5.再用SNHZSO.调PH为6.8士0.1。
6.再次校正电导为4.8士。.lmV(10℃)。
(四)CM一S交换凝胶纯化(在低温下进行)
1.CM一S预处理:CM一S用燕馏水浸泡后,分别用Na0H和HCL处理,然后用0.18M、
PH6.8磷酸缓冲液平衡,过滤;平衡过的CM一S悬浮于含0.08%NaN:,0.18M、PH6.8磷酸缓冲液中,低温冷藏。
2.CM一S吸附
(1)经超滤PH6.8电导4.smV的尿激酸溶液,按skg/亿单位加入经平衡的CM一S,搅
拌两小时,防止起泡,静置一小时,虹吸去除上清液。
(2)吸附尿激酶的CM一S上有机玻璃柱,防止柱内起泡,柱面平整.
3.洗涤去除杂蛋白
(1)CM一S上柱后用含0.3%NaN3,PH6.8、0.18M磷酸缓冲液洗涤,流速为1.8~
2.。而/cmZ分左右,流至流出液效价低于10oiu/耐,28onm光吸收峰低于。.04E/已。
(2)改用1.SMPH6.8磷酸缓冲液洗涤一个半床体积,流速不变,流出液280nm吸收峰应降至0.03以下。
4.尿激酸洗脱
(1)洗涤完毕后用0.08MP、H8.8磷酸氢二钠、0.95M氛化钠缓冲液洗脱,流速。.4ml/cmZ分,测定流出液效价及280nm吸收峰,将有活力流出液合并,使混合液浓度在S000in/ml以上。
(2)混合液调PH6.。~7.0.抽取试样化验后,装于二升的塑料瓶内,干冰速冻,一22℃以下低温保存。
(五)尿激酸〔UK)效价和比活的测定
1.测试原理
(1)主要试剂与器材
恒温水浴锅、刻度闹钟、荧光灯、UK效价坐标纸、牛凝血酶(T)、牛纤维蛋白溶酶原(PG)、牛纤维蛋白(FG)、UK标准品、Barbiton一Na,Tri。,NaZEDTA,Nael
(2)试剂配制
T:牛凝血酶40BP(卫生部药品生物制品检验所),每支加6.6mlBarbiton一Na缓冲液。
PG:牛纤维蛋白溶酶原22BP(卫生部药品生物制品检验所),每支加24mlTris缓冲液。
PG一T:取PG6.6nil与配好的6.耐T等体积混匀,放入50血三角烧瓶中,扎口备用。
FG:片纤维蛋白原,12sBP(卫生部药品生物制品检验所),每支加18mlBarbiton一Na
缓冲液。
(3)标准UK稀释
将标准品(loooiu/支)用巴比妥溶液稀释成60in/ml。
(4)绘制标准曲线
①取5时试管4支,作记号并分别加入FGO.3耐;
②分别加入稀释标准UK溶液0.4、0.3、0.2、0.lm卜
③分别加巴比妥溶液0.6、0.7、0.3、0.9回;
④分别加入0.4mlPG一T,摇匀,立即放入37℃恒温水溶锅,记时;
⑤观察气泡上升情况,体积一半时记终止时间;
⑥以单位效价为横坐标,时间为纵坐标,绘制标准曲线,要求至少有三点在一条直线上。
(5)样品检测
①继标准曲线后,在同一条件下,同一试剂情况下,进行样品检测;
②分别加FGO.3ml,巴比妥缓冲液0.gml,PG一TO.4mh
③其余步骤同前。
(6)测O.D值
将加酸后的样品稀释10倍,然后测其O·D值。
(7)计算效价与比活
①根据测试样品的气泡上升时间,在标准曲线上找出相应的点的效价,乘以20得出样品
实际效价。
②总效价~单位效价(iu/mDx总体积(ml)
③比活~平均效价xl.75/0·D
2.对产品收率和比活的测定
①对解析液进行总效价和比活测定,结果如下:
总效价:2489万单位,比活:325iu/mgP
②精制后总效价和比活
总效价:1082万单位;比活:”660iu/mgP
③精制收率:41%
三、讨论
1.尿激酶通常以两种分子形式存在,即分子量36。。。和54000,大分子量的尿激酶活性
较小分子量尿激酶活性强得多,提高比活,一是要去除杂蛋白,二是要除去小分子量尿激酶。
分离出的小分子量尿激酶可以另作回收纯化处理。
2.尿激酶作为一种活性物质,在纯化过程中要注意防止失活。我们在研究过程中,先是
熟练地掌握尿激酶效价和比活的测定步骤,然后不断改变操作条件,通过对每一道工序中影
响尿激酶收率、比活提高因素的研究,逐步摸索出最佳技术条件。
3.对CM一S吸附后的母液及CM一S洗脱液中效价大于200iu/ml的部分要进行超滤盐
析回收,可用作粗品投料。

用于提取尿激酶的男性尿液,其pH值<6.5,电导为20~3OMO一’,细菌总数<1000
个/ml,用3N氢氧化钠调pH~8·5一9.加入硅藻土吸附并沉淀后,滤取硅藻土,用清水搅拌洗涤,甩干装入交换柱,用氨水淋洗,在洗脱液中加入饱和磷酸二钠,调pH=8.0,再加氯化钠调电导至22Mn,通过季钱乙基,交联聚糖凝胶层析柱,再用磷酸缓冲液洗脱,合并流出液与洗脱液,加醋酸调pH一4.2,调电导至16~17Mn一’,通过甲基纤维素层析柱,用氨水洗脱,收集洗脱液,加水透析,经离心分机冷冻干燥得到尿激酶成品。上述得到的仅为尿激酶粗品,还可用右旋糖配、肝素、人血清白蛋白等加以修饰精制,以增强其生化稳定性,延长在人体内的作用时间。除用上述分离法制取尿激酶外,还可以采用中性蛋白酶降解的办法制取尿激酶。国外还有采用DNA重组的办法,在大肠杆菌中培植尿激酶原。在提取尿激酶的同时还可利用剩余尿液提取人尿白蛋白.

尿激酶属碱性蛋白酶无抗原性,无毒性和其它副作用,可临床用于肺栓塞、冠心病、脑血栓、心肌梗塞、玻璃体混浊、眼底出血、颅内血肿、静脉栓塞以及急
(慢)性肾小球肾炎等疾病的治疗,还可用于治疗纤维蛋白沉着引起的疾病,并可用作抗癌辅助药物。此外,尿激酶还可用来开发保健饮料、太空饮料及化妆品等。作为乡镇企业,开发尿激酶产品,不仅投资少,效益高,能耗低,且原料易得,工艺简单,无毒无害无污染,值得大力提倡.

❼ 提取尿激酶必须是男人尿吗

提取尿激酶女人也可以,只是收集不方便。尿激酶,是一种溶血栓药物.男女的尿都有,男的容易收集而已。

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