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大孔树脂层析柱装柱量

发布时间:2021-01-18 17:24:29

『壹』 大孔树脂吸附技术和凝胶过滤色谱的区别

凝胶过来滤色谱法:分辨率较高,但是上源样量仅为柱体积的1%,而且对流速也有严格的限制。离子交换色谱法:根据目的蛋白质表面所含有的氨基酸残基带有的净电荷分离蛋白质,但是分辨率没有凝胶过滤高。亲和层析法:根据生物分子的特异性分离目的蛋白,特异性很高,但是配件容易丢失适合含有特异性的标签的或者抗体。疏水色谱:根据疏水性来分离蛋白质,缺点是有的蛋白质在高盐中溶解度降低,所以应用范围受到限制,适合蛋白质表面含有较多疏水性氨基酸残基的疏水性蛋白质。

『贰』 植物有效成分的提取用层析硅胶、大孔树脂、活性氧化铝那种最合适

硅胶最适合!因为硅胶的极性最强,孔结构和比表面可以调整,而且没有有机物污染;相对而言,大孔树脂因为有有机物材料,早被国家药监局列为限制使用产品;而活性氧化铝的极性不如硅胶,选择性吸附这一特点上不如硅胶。(1) 硅胶:层析用硅胶为一多孔性物质,分子中具有硅氧烷的交链结构,同时在颗
粒表面又有很多硅醇基。硅胶吸附作用的强弱与硅醇基的含量多少有关。硅醇基能够通过氢键的形成而吸附水分,因此硅胶的吸附力随吸着的水分增加而降低。若吸水量超过17%,吸附力极弱不能用作为吸附剂,但可作为分配层析中的支持剂。对硅胶的活化,当硅胶加热至100~110℃时,硅胶表面因氢键所吸附的水分即能被除去。当温度升高至500℃时,硅胶表面的硅醇基也能脱水缩台转变为硅氧烷键,从而丧失了因氢键吸附水分的活往,就不再有吸附剂的性质,虽用水处理亦不能恢复其吸附活性。所以硅胶的活化不宜在较高温度进行(一般在170cC以上即有少量结合水失去)。

硅胶是一种酸性吸附剂,适用于中性或酸性成分的层析。同时硅胶又是一种弱酸性阳离子交换剂,其表面上的硅醇基能释放弱酸性的氢离子,当遇到较强的碱注化台物,则可因离子交换反应而吸附碱性化合物。
(2)氧化铝:氧化铝可能带有碱性(因其中可混有碳酸钠等成分),对于分离一些碱性中草药成分,如生物碱类的分离颇为理想。但是碱性氧化铝不宜用于醛、酮、醋、内酯等类型的化合物分离。因为有时碱性氧化铝可与上述成分发生次级反应,如异构化、氧化、消除反应等。除去氧化铝中绚碱性杂质可用水洗至中性,称为中性氧化铝。中性氧化铝仍属于碱性吸附剂的范畴,本适用于酸性成分的分离。用稀硝酸或稀盐酸处理氧化铝,不仅可中和氧化铝中含有的碱性杂质,并可使氧化铝颗粒表面带有NO3一或CI一的阴离子,从而具有离于交换剂的性质,适合于酸性成分的层析,这种氧化铝称为酸性氧化铝。供层析用的氧化铝,用于拄层析的,其粒度要求在100~160目之间。粒度大子100目,分离效果差:小于160目,溶浓流速大慢,易使谱带扩散。样品与氧化铝的用量比,一般在1:20~50之间层析柱的内径与柱长比例在1:10-20之向。
在用溶剂冲洗柱时,流速不宜过快,洗脱液的流速一般以每半~1小时内流出液体的毫升数与所用吸附剂的重量(克)相等为合适。
(3)活性炭:是使用较多的一种非极性吸附剂。一般需要先用稀盐酸洗涤,其次用乙醇洗,再以水洗净,于80℃干燥后即可供层析用。层析用的活性炭,最好选用颗粒活注炭,若为活性炭细粉,则需加入适量硅藻土作为助滤剂一并装柱,以免流速太慢。活性炭主要且于分离水溶性成分,如氨基酸、糖类及某些甙。活性炭的有为吸附作用,在水溶液中最强,在有机溶剂中则较低弱。故水的洗脱能力最弱,而有机溶剂则较强。例如以醇-水进行洗脱时,则随乙醇浓度的递增而洗脱力增加。活性炭对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物,对大分子化合物的吸附力大于小分子化合物。利用这些吸附性的差别,可将水溶性芳香族物质与脂肪族物质分开,单糖与多糖分开,氨基酸与多肽分开。下边我就硅胶作为分离提纯的介质详细做以描述:硅胶表面结构概述在色谱和工业水处理领域中,无定形硅胶已得到了广泛的应用,它具有多孔的无定形结构,不产生任何x 射线衍射[1,4]。硅胶的表面存在着硅醇基团(si-oh)和暴露的硅氧烷键(si-o-si)。硅醇基团是强吸附的极性基团,而硅氧烷键是疏水基团。硅氧烷键上的δ键被dπ-pπ作用而加强,氧原子上的孤对电子参与π作用,不能参与给体与受体间的相互作用,不能形成氢键。scott和kucera证实硅氧烷基团几乎不吸附极性溶剂分子。然而,由于硅氧烷键的疏水作用性,可以吸附某些非极性溶剂分子。对硅胶改性而言,硅醇基比硅氧烷基重要得多。硅醇基团可以孤立、成对(双生)和缔合(连位)等不同的方式存在于硅胶表面。最近研究表明,不仅两个或两个以上的缔合硅醇基团可以形成键合对,甚至成对硅醇基团也可以形成键合对。硅胶表面的结构可以通过许多方法进行测定。一般情况下,随着比表面积的增加,硅胶表面上硅醇基团的浓度略有降低。通常硅醇含量的测定方法有同位素交换法、滴定法、光谱法和烷基铝法等。nawrock[1]报道了用同位素交换法测定硅胶表面的硅醇基浓度是8.0±1.0μmol/m2,而且这个数值常常被视为硅胶的物理化学常数。硅醇基团具有明显的酸性,测定的pka值是7.1。通过对硅胶表面的结构分析,可知硅胶表面硅醇基的类型、浓度和表面分布都会影响所制备键合相的性能,而硅胶的预处理则可以改变表面硅醇类型的分布,提高表面的缔合硅醇的含量,改善硅胶表面键合相的性能。 柱层析硅胶在生物工程技术中应用的突出优势 (1)具有刚性的骨架结构,机械强度高,可以耐受30MPa以内的压力;
(2)优良的吸附性能,对性质、结构相似乃至同分异构体都有理想的分离功能;
(3)有良好的热稳定性和化学稳定性;
(4)与有机柱填料相比,硅胶为固体以SiO2为基质的胶体,结构致密,在应用中不会发生有机质流失而污染目标产物;
(5)能从多组分溶液中有选择地吸附提纯同分异构体组分;
(6)在制备柱层析硅胶过程中,可以通过控制不同工艺条件生产出平均孔径20

『叁』 活性炭洗脱顺序、大孔吸附树脂洗脱顺序、硝酸银色谱洗脱顺序、聚酰胺洗脱顺序、硅胶柱层析洗脱顺序、纸色谱

建议你去”色谱世界“网站看看,这网站在色谱方面非常专业,高手较多,对你会有帮助的。

『肆』 硅胶、大孔吸附树脂、反相硅胶柱层析、聚酰胺、SephadexL H-20、Sephadex G—100这些分离材料的分离原理

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G—100这些分离材料的分离原理

『伍』 请问各位大虾下面这种蠕动泵能和层析柱连在一起用吗我想做大孔树脂吸附试验。。

完全可以,但是就看层析柱和你使用蠕动泵如何连接。当然可以用接头做个闭合的层析流路,也可使用蠕动泵开放式的从上端滴入或注入层析柱中。

『陆』 有谁做过大孔吸附树脂啊,和硅胶层析的操作一样吗如何上样,如何吸附,如何计算流量,

大空吸附树脂和硅胶参析操作是不一样的,大空吸附树脂使用前要活化,用水或者内醇浸泡12小时,再容用酸碱处理,使用时大多用湿法上样,它只能粗分,而硅胶是不能见水的,上样大多用干法上样的。可以分离出很多种化合物,一般不较慢。

『柒』 大孔树脂柱层析为什么流速很慢很慢旋塞已经开到最大了的。

你是靠重力的吗?上面加压试试,就是按个蠕动泵,加密封的线路,这样就能通过蠕动泵调节流速了,想快就快,想慢就慢

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