⑴ 水中大肠杆菌的检测方法
大肠菌群测定的操作细则
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(mpn)表示。
1
设备和材料
1.1
温箱：36±1℃。
1.2
冰箱:0～4℃。
1.3
恒温水浴
:44.5±0.5℃。
1.4
天平。
1.5
显微镜。
1.6
均质器或乳钵。
1.7
平皿:直径为90mm。
1.8
试管。
1.9
吸管。
1.10
广口瓶或三角烧瓶:容量为500ml。
1.11
玻璃珠:直径约5mm。
1.12
载玻片。
1.13
酒精灯。
1.14
试管架。
2
培养基和试剂
2.1
乳糖胆盐发酵管:按gb
4789.28中4.9规定。
2.2
伊红美蓝琼脂平板:按gb
4789.28中4.25规定。
2.3
乳糖发酵管:按gb
4789.28中4.10规定。
2.4
ec
肉汤:按gb
4789.28中4.11规定。
2.5
磷酸盐缓冲稀释液:按gb
4789.28中3.22规定。
2.6
生理盐水。
2.7
革兰氏染色液:按gb
4789.28中2.2规定。
3
操作步骤
3.1
检样稀释
3.1.1
以无菌操作将检样25ml(或g)放于有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8
000-10
000
r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
3.1.2
用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3
另取1ml灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1ml灭菌吸管。
3.1.4
根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
3.2
乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖
胆盐发酵管内,接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃
温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
3.3
分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃
温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
3.4
证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置
36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
3.5
报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查mpn检索表,报告每100ml(g)大肠菌群的mpn值。
4
粪大肠菌群(faecal
coliform)
4.1
用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于ec肉汤管内,置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于ec肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有ec肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的ec肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置
培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。
4.2
结果报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查mpn检索表,报告每100ml(g)粪大肠菌群的mpn值。
⑵ 污水处理厂出水检测大肠杆菌，如何取样
1、对的，要用专门的杀菌过的，良好密封性的取样瓶，
2、如果是外检的话，你可以去外版检公司直接领一权个取样瓶，并且尽快取好水样后，给他检测。
3、注意：这种取样瓶，打开后就要用，不用的话，重新密封也没用了。
4、其实：按照现况，很少见到操作很规范的人。一般不会那么严谨。
⑶ 自来水中大肠杆菌检测方法（国家标准方法）
大肠杆菌的检验方法（SN方法）
致泻性大肠杆菌的检验（GB方法简介）
大肠杆菌O157:H7的检验
（一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。
（二）原国家商检局制订的行业标准，等效采用美国FDA的标准方法，用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测。本方法采用两步法：h
推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。K
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证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。
⑷ 水中粪大肠菌群的测定
化妆品检测项目中粪大肠菌群的检测流程：
10g/mL样品+90mL灭菌生理盐水 →10mL+10mL双倍乳糖胆（含中和剂）培养基→粪大肠菌群 44.5℃，48h培养
注：在化妆品检测项目中，如果样品含有油脂性的成分，如精油，在样品前处理中需加入液体石蜡、吐温80、生理盐水进行均质，使样品能够均匀分散开来。
粪大肠菌群又是一个什么样的微生物呢？下面我们来详细介绍下：
大肠菌群：大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
定义（GB2010）：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
粪大肠菌群：大肠菌群的一种，又称耐热大肠菌群，培养温度：44.5±0.5℃，粪大肠菌群是化妆品检测项目中必检的微生物项目。
大肠埃希氏菌：（(Escherichia. coli )通常称为大肠杆菌。根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类：
致病性大肠杆菌(EPEC)、
肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、
肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、
肠出血性大肠杆菌(EHEC)、
肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。
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⑸ 为什么大肠菌群可作为粪便污染的指示生物怎样进行检测试述实验原理
大肠杆菌是人体大肠中的一种寄生细菌,在人畜排泄物中含量也多,所以在水净化和污水处理领域,大肠杆菌很早就被选作水污染程度的指示性物种,标志着有多少人类粪便存在于水中,测量标准为大肠菌群指数.但是利用大肠杆菌作为粪便污染的指示物也可能误导结论,因为其它环境如造纸厂中,大肠杆菌也可大量存在
判定污染是否存在、存在的发生原因和过程等情形，在微生物的选择方面需要具有检测方法简单、材料广泛、易于操作等特点。因此，一般将大肠菌群、粪链球菌、产气荚膜杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等作为粪便污染指示菌，其中以大肠菌群最常使用