污水粪大菌检测方法

❶ 酶底物法测定水质粪大肠菌群是国标方法吗

酶底物法测定水质粪大肠菌群是还不是我国现行的国标方法.

但酶底物法科立得回TM(Colilert)试剂检测中粪大肠菌群是ISO9308-2:2012和美答国EPA标准,

我单位是社会检测机构,这两个标准也是可以使用的.

❷ 求污水处理厂的粪大肠菌群数的测定方法，详细的，包括操作细节的注意事项书上写的太宽泛了，初次做不理

如果用多管发酵法，主要是稀释度的问题，就是每五根管子一个浓度，稀释的时候要逐级稀释。

❸ 粪大肠菌群的测定

粪大肠菌群

Fecal Coliforms
1 定义

本规范采用下列定义

粪大肠菌群（Fecal coliforms）系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.5℃±0.5℃培养24h～48h能发酵乳糖产酸并产气。

该菌直接来自粪便，是重要的卫生指示菌。

3 仪器

3.1 恒温水浴箱或隔水式恒温箱：44℃±0.5℃。

3.2 温度计。

3.3 显微镜。

3.4 载玻片。

3.5 接种环。

3.6 电磁炉。

3.7 三角瓶，250mL。

3.8 试管：15×150mm。

3.9 小倒管。

3.10 pH计或pH试纸。

3.11 高压灭菌器。

3.12 灭菌吸管，10mL、1mL。

3.13 灭菌平皿：直径90mm。

4 培养基和试剂

4.1 双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基

成分：蛋白胨 40g

猪胆盐 10g

乳糖 10g

0.4％溴甲酚紫水溶液 5mL

卵磷脂 2g

吐温80 14g

蒸馏水 1000mL

制法：将卵磷脂、吐温80溶解到少量蒸馏水中。将蛋白胨、胆盐及乳糖溶解到其余的蒸馏水中，加到一起混匀，调pH到7.4，加入0.4％溴甲酚紫水溶液，混匀，分装试管（每支试管中加一个小倒管）。68.95kPa（115℃ 10 lb）20min灭菌。

4.2 伊红美兰（EMB）琼脂

成分：蛋白胨 10g

乳糖 10g

磷酸氢二钾 2g

琼脂 20g

2％伊红水溶液 20mL

0.5％美蓝水溶液 13mL

蒸馏水 1000mL

制法：先将琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾蛋白胨，混匀，使之溶解。再以蒸馏水补足至1000mL。校正pH值为7.2～7.4，分装于三角瓶内，103.43kPa（121℃ 15 lb）15min高压灭菌备用。临用时加入乳糖并加热融化琼脂。冷至60℃左右无菌操作加入灭菌的伊红美蓝溶液，摇匀。倾注平皿备用。

4.3 蛋白胨水（作靛基质试验用）

成分：蛋白胨（或胰蛋白胨） 20g

氯化钠 5g

蒸馏水 1000mL

制法：将上述成分加热融化，调pH值为7.0～7.2，分装小试管，103.43kPa（121℃ 15 lb）15min高压灭菌。

4.4 靛基质试剂

柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸25mL。

试验方法：接种细菌于蛋白胨水中，于44℃±0.5℃培养24h±2h。沿管壁加柯凡克试剂0.3mL～0.5mL，轻摇试管。阳性者于试剂层显深玫瑰红色。

注：蛋白胨应含有丰富的色氨酸，每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。

4.5 革兰氏染色液：

4.5.1 染液制备

4.5.1.1 结晶紫染色液：

结晶紫 1g

95％乙醇 20mL

1％草酸铵水溶液 80mL

将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。

4.5.1.2 革兰氏碘液：

碘 1g

碘化钾 2g

蒸馏水加至 300mL

将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。

4.5.1.3 脱色液：95％乙醇。

4.5.1.4 复染液：

a 沙黄复染液：

沙黄 0.25g

95％乙醇 10mL

蒸馏水 90mL

将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。

b 稀石碳酸复红液：称取碱性复红10g，研细，加95％乙醇100mL，放置过夜，滤纸过滤。取该液10mL，加5％石碳酸水溶液90mL混合，即为石碳酸复红液。再取此液10mL加水90mL，即为稀石碳酸复红液。

4.5.2 染色法

4.5.2.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。

4.5.2.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。

4.5.2.3 滴加95％乙醇脱色，约30s，或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s，水洗。

4.5.2.4 滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜检。

4.5.3 染色结果

革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

注：如用1:10稀释石碳酸复红染色液作复染，复染时间仅需10s。

5 操作步骤

5.1 取10mL 1:10稀释的检液，加到10mL双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基中，置44℃±0.5℃培养箱中培养24h～48h，如不产酸也不产气，则报告为粪大肠菌群阴性。

5.2 如产酸产气，划线接种到伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℃培养18h～24h。同时取该培养液1～2滴接种到蛋白胨水中，置44℃±0.5℃培养24h±2h。

经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长。粪大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽。也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落，亦常为粪大肠菌群，应注意挑选。

5.3 挑取上述可疑菌落，涂片作革兰氏染色镜检。

5.4 在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂约0.5mL，观察靛基质反应。阳性者液面呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。

6 检验结果报告

根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。

❹ 水中粪大肠菌群的测定

化妆品检测项目中粪大肠菌群的检测流程：
10g/mL样品+90mL灭菌生理盐水 →10mL+10mL双倍乳糖胆（含中和剂）培养基→粪大肠菌群 44.5℃，48h培养
注：在化妆品检测项目中，如果样品含有油脂性的成分，如精油，在样品前处理中需加入液体石蜡、吐温80、生理盐水进行均质，使样品能够均匀分散开来。
粪大肠菌群又是一个什么样的微生物呢？下面我们来详细介绍下：
大肠菌群：大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
定义（GB2010）：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
粪大肠菌群：大肠菌群的一种，又称耐热大肠菌群，培养温度：44.5±0.5℃，粪大肠菌群是化妆品检测项目中必检的微生物项目。
大肠埃希氏菌：（(Escherichia. coli )通常称为大肠杆菌。根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类：
致病性大肠杆菌(EPEC)、
肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、
肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、
肠出血性大肠杆菌(EHEC)、
肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。
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❺ 污泥里面的粪大肠杆菌怎么测

取一定量的污泥，进行微生物培养，观察菌落数，菌落的数量就是改量的污泥中的大肠杆菌数量，不过需要多个平行性实验，确保准确性

❻ 关于水中粪大肠菌群数的测定

1.管的规划不定，最好是带盖子的10－50ml的玻璃管，一般要最少做5个平行。
2.培养基都可以自己配的，建议用简单的lb培养基即可，药品为蛋白胨和nacl（固体用agar）。
3.塞子或盖子都可以，但一定要加。
4.需要超净台、高压灭菌锅、调温摇床这些必备仪器。
粪大肠菌群是生长于人和温血动物肠道中的一组肠道细菌，随粪便排出体外，约占粪便干重的1／3以上，故称为粪大肠菌群。粪大肠菌群不是细菌学上分类命名，而是根据卫生学方面的需要，而设定的一类与粪便污染有关的一组细菌，是能在44.5℃24h内发酵乳糖产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。粪大肠菌群为一群需氧及兼性厌氧的菌群，呈革兰氏阴性反应，能在普通培养基上生长繁殖；其生化活动能力较强，能发酵多种糖类，产酸产气，其特点是能较快发酵乳糖，粪大肠菌群在乳糖培养基中于．37℃下进行培养，在24h内能使乳糖发酵产酸，还有甲酸解氢酶进行分解甲酸，生成氢气和二氧化碳，产生大量气体，这时，若加入伊红美兰指示剂，分解乳糖所产生的酸(带阳电荷)与伊红相染呈紫色且有金属光泽，故常用此特性来鉴定识别粪大肠菌群。
具体操作如下：
(1)发酵(产酸产气)试验
将试样液以无菌接种于双倍乳糖胆盐发酵管(其内放有倒置的小玻璃管，以收集气体)内，置44'e培养箱中培养24—48h，由于乳糖胆盐培养基是一种具有选择作用的培养基，其中胆盐具有抑制革兰氏阳性菌的作用，若观察到发酵管内不产酸(有酚红指示剂指示)不产气，则报告试样为粪大肠菌群阴性，未检出，检测结束。
若发酵管内产酸产气，则继续进行下列检测。
(2)鉴别培养
将有产酸产气的发酵管内试样培养液接种到伊红美兰琼脂培养基平皿上，置37℃培养18～24h；同时将该培养液接种到蛋白胨水中，置44℃培养24h。
(3)验证实验
菌落观察：在上述平皿培养基上，仔细观察菌落生长情况：大肠菌群在伊红美兰琼脂培养基上其典型菌落是呈深紫色、圆形、边缘整齐、表面光滑、湿润、常具有金属光泽，或呈紫黑色不带或略带金属光泽及粉紫色，中心较深的菌落。
革兰氏染色、镜检：将以上典型的(或近似的)大肠菌群菌落进行革兰氏染色、镜检，若革兰氏染色呈阳性(紫色)反应，则报告粪大肠菌群呈阴性，未检出。若革兰氏染色呈阴性，检测还需进行下一试验，以待进一步证实。
靛基质试验(吲哚试验)：对前已培养好的蛋白胨水中，滴人靛基质试剂(对二甲基氨基苯甲醛试剂)，进行靛基质反应，若液面呈玫瑰红色，呈阳性反应，则报告粪大肠菌群呈阳性，检出；若液面仍是棕黄色，则报告粪大肠菌群呈阴性，未检出。
(4)检测程序
将上述检测粪大肠菌群的操作步骤可归结为以下程序图示。
(5)检验报告
当发酵管内产酸产气，观察试液平皿上为典型粪大肠菌群菌落，并经革兰氏染色、检镜试验为阴性(—)及靛基质试验为阳性，则报告该试液经检测检出粪大肠菌群。其他结果均为未检出粪大肠菌群。

❼ 粪大肠菌群数的测定

看来我们使用的抄方法是一样的，区别是你没有操作过，对吧
按你提问的顺序分列
一、
试管的规格大约为长度--cm,直径2--2.5cm,小玻璃管的长度大约2-3cm直径约0.3-0.5cm。操作的时候是把小的玻璃管（一端封闭)开口的一端朝大试管底部放入，至于需要多少支。要看你一次做几个样品，几个倍数，我们一般准备30--50套。
二、不管是什么培养基，我们都是自己配制，试剂商店里可以买到的（按方法中所列试剂品种购买。
三、肯定要加塞子的，我们用的塞子是软材料（好像是软橡胶？白色的，塞子中间另有一个可以活动的塞子，能保证加塞后的试管透气，其实用什么材料不重要的。
四、需要的仪器设备为：生化培养箱、无菌操作台（空气精华级别100）、高压灭菌锅、冰箱、干燥箱。

❽ 污水厂中进出水大肠杆菌都是用什么检测方法，有没有简单的方法

多管发酵法，希望能帮到您

❾ 粪大肠菌群对于不同水质检测方法一样吗

应该说原理是一样的，但是，不同水质因为粪大肠菌群的含量不一样，需要视回情况增加或减少稀释度答，才能恰当地判断出其含量。如果因为对稀释度判断得不好，所接种的发酵管全部发酵，那么也只能报告大于等于多少，或者重新采样了。