蛋白质蒸馏装置的水蒸气发生器中的水为何要用硫酸调成酸性

❶ 凯氏定氮法，为什么蒸馏时，液体变成蓝绿色透明后，还要继续加热

一、实验原理
蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液 滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量
1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4

凯氏定氮法
凯氏定氮法反应式为：
2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4 （其中CuSO4做催化剂）
2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中反应式为:
(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4

2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O

3. 用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量

反应式为：

(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3

(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3

二、操作
1、 样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸同一方法做试剂空白试验。但是此法比较危险，不易在实验室演示，现在大多数实验室有消煮仪一次可以进行多个（一次可以消煮16个样品）样品处理，并有通风橱进行通风，温度可以自己设定，更加安全和可操作性，因此逐步成为主要的凯氏定氮法的首选处理方法。
一般消解温度都设在240度及240度以上，如果想快速消解可以适当提高温度甚至可以用最大温度进行消解。
2、按图装好定氮装置，于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红 指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。
3、向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示剂1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，不能立即将玻璃盖塞紧，这样易使玻璃塞粘在进样口，应先用蒸馏水冲洗然后再盖，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。
同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作。

三、计算
X =(（V1-V2）*N*0.014)/( m*（10/100）) *F*100%
X：样品中蛋白质的百分含量，g；
V1：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；
V2：试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，ml；
N：硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；
0.014：1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；
m：样品的质量（体积），g（ml）；
F：氮换算为蛋白质的系数 。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为 5.30。

❷ 蛋白质蒸馏装置的水蒸气发生器中的水为何要用硫酸调成酸性

防止氮元素生成氨气挥发。

❸ 求花生粕和豆粕用定氮仪测定粗蛋白含量的方法

凯氏定氮法

用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时，则可用此法测定样品中蛋白质的含量。当蛋白质与浓硫酸共热时，其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程通常称为“消化”。但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。消化完成后，在凯氏定氮仪中加入浓碱，可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借助水蒸汽蒸馏法，将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中氢离子结合，使溶液中的氢离子浓度降低，指示剂颜色改变，然后用标准无机盐酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。蛋白质的含氮量为16%，即1克蛋白质中的氮相当于6.25克蛋白质，用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。

1实验材料1.1器材1.2试剂2实验步骤

实验材料

器材

微量凯氏定氮仪1套；

50ml凯氏烧瓶4个；

移液管；锥形瓶；

试管；

小玻璃珠

试剂

浓硫酸；

30％氢氧化钠溶液；

2％硼酸溶液；

标准盐酸溶液(0.01mol／L)。

粉末硫酸钾—硫酸铜混合物：K2SO4与CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。

混合指示剂(田氏指示剂)：由50ml0.1％甲烯蓝乙醇溶液与200ml0.1％甲基红乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。

样品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作为样品。

实验步骤

安装凯氏定氮仪。

消化：取4个50ml凯氏烧瓶并标号,各加1颗玻璃珠，在1号及2号瓶中各加样品1ml，催化剂(K2SO4-CuSO4·5H2O)200mg，浓硫酸5ml。注意加样品时应直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶颈上。在3号及4号瓶中各加1ml蒸馏水和与1、2号瓶相同量的催化剂和浓硫酸，作为对照。在通风橱内进行消化。在消化开始时应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明淡绿色为止。撤掉火力，冷却至室温。

蒸馏：

蒸馏器的洗涤：用水洗涤干净微量凯氏定氮仪，在蒸汽发生器中加入用几滴硫酸酸化的蒸馏水和几滴甲基红指示剂，用这样的水蒸气洗涤凯氏定氮仪。约15分钟后，在冷凝器下端倾斜放好装有硼酸-指示剂的锥形瓶，继续蒸汽洗涤2分钟，观察锥形瓶内的溶液是否变色，如不变色则证明蒸馏装置内部已洗涤干净。移走锥形瓶，停止加热，打开夹子。

蒸馏：取下棒状玻塞，用吸管吸取消化液，细心地插到反应室小玻璃杯的下方，塞紧棒状玻塞。将一个含有硼酸和指示剂的锥形瓶放在冷凝器下方，使冷凝器下端浸没在液体内。取30％的氢氧化钠溶液10ml放入小玻璃杯中，轻提棒状玻璃塞使之流入反应室(为了防止冷凝管倒吸，液体流入反应室必须缓慢)。尚未完全流入时，将玻璃塞盖紧，向玻璃杯中加入蒸馏水约5ml。再轻提玻璃塞，使一半蒸馏水慢慢流入反应室，一半留在玻璃杯中作水封。加热水蒸汽发生器，沸腾后夹紧夹子，开始蒸馏。氨气进入锥形瓶，瓶中的酸溶液由紫色变成绿色。变色时起记时，再蒸馏5分钟。移动锥形瓶，使硼酸液面离开冷凝管约1厘米，并用少量蒸馏水洗涤冷凝管口外面，继续蒸馏1分钟，移开锥形瓶，用表面皿覆盖锥形瓶。蒸馏完毕后，须将反应室洗涤干净，再继续下一个蒸馏操作。待样品和对照均蒸馏完毕后，同时进行滴定。

滴定：用0.01mol／L的标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，硼酸指示剂溶液由绿色变淡紫色为滴定终点。

结果计算：

其中：

A为滴定样品用去的盐酸溶液平均ml数；

B为滴定对照液用去的盐酸溶液平均ml数；

C为所取样品溶液的ml数。

现在的公司有现成的仪器可以使用，上面是教材中的原理，哈哈

可以参考下面的网址

❹ GB 6432-1986 饲料粗蛋白测定方法是什么呢

不知道，只知道现在用凯氏定氮法

一、原理

蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4作用下，硝化生成（NH4）2SO4

反应式为：

2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04（其中CuSO4做催化剂）

2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3溶液中

反应式为:

(NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4

2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O

3.用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量

反应式为：

(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3

(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3

二、试剂

所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。

2.1硫酸铜。

2.2硫酸钾。

2.3硫酸。

2.42%硼酸溶液。

2.5混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。

2.640%氢氧化钠溶液。

2.70.025mol/L硫酸标准溶液或0.05mol/L盐酸标准溶液。

三、仪器

定氮蒸馏装置：如图所示。

凯氏定氮法仪器1.安全管

2.导管

3.汽水分离管

4.样品入口

5.塞子

6.冷凝管

7.吸收瓶

8.隔热液套

9.反应管

10.蒸汽发生瓶

四、操作方法

1、样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸同一方法做试剂空白试验。

2、按图装好定氮装置，于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。

3、向接收瓶内加入10ml2%硼酸溶液及混合指示剂1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，立即将玻璃盖塞紧，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.01N硫酸或0.01N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。

同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作。

计算：

X=(（V1-V2）*N*0.014)/(m*（10/100）)*F*100%

X：样品中蛋白质的百分含量，g；

V1：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；

V2：试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，ml；

N：硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；

0.014：1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；

m：样品的质量（体积），g（ml）；

F：氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为5.30。

五、注意事项

（1）样品应是均匀的。固体样品应预先研细混匀，液体样品应振摇或搅拌均匀。

（2）样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上。万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。

（3）硝化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，慢慢加入30%过氧化氢（H2O2）2-3ml，促使氧化。

（4）在整个消化过程中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失。

（5）如硫酸缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会形成硫酸氢钾，而不与氨作用。因此，当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时，要增加硫酸的量。

（6）加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点，硫酸铜为催化剂，硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂。

（7）混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。如果没有溴甲酚绿，可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液。

（8）氨是否完全蒸馏出来，可用PH试纸试馏出液是否为碱性。

（9）吸收液也可以用0.01当量的酸代表硼酸，过剩的酸液用0.01N碱液滴定，计算时，A为试剂空白消耗碱液数，B为样品消耗碱液数，N为碱液浓度，其余均相同。

（10）以硼酸为氨的吸收液，可省去标定碱液的操作，且硼酸的体积要求并不严格，亦可免去用移液管，操作比较简便。

（11）向蒸馏瓶中加入浓碱时，往往出现褐色沉淀物，这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜反应，生成氢氧化铜，经加热后又分解生成氧化铜的沉淀。有时铜离子与氨作用，生成深l蓝色的结合物[Cu(NH3)4]2+

（12）这种测算方法本质是测出氮的含量，再作蛋白质含量的估算。只有在被测物的组成是蛋白质时才能用此方法来估算蛋白质含量。

❺ 蒸馏出来的硫酸属于什么级别

溶并且放热。来有时，在工业自制造过程中，硫酸也可能被染成暗褐色以提高人们对它的警惕性。作为二元酸的硫酸在不同浓度下可能会有不同的特性，而其对不同物质，如金属、皮肉及其他生物组织、甚至岩石等的腐蚀性，都归根于它的强酸性，以及它在高浓度下的强烈脱水性与氧化性。硫酸能对肉体造成极大的伤害，因为它除了会透过酸性水解反应分解蛋白质及脂肪造成化学烧伤外，还会与碳水化合物发生脱水反应并造成二级火焰性灼伤；若不慎入眼，更会破坏视网膜造成永久失明。故在使用时，应做足安全措施。另外，硫酸也是潮解性的，会吸取空气中的水蒸气。正因为硫酸有不同的特性，它也有不同的应用，如家用强酸通渠剂,铅酸蓄电池的电解质，肥料，炼油厂材料及化学合成剂等。硫酸被广泛生产，最常用的工业方法为接触法。

❻ 饲料中蛋白氮和非蛋白氮的测定有什么快速法吗

一、硫酸铜沉淀法
根据非蛋白氮的化学性质来看，大部分溶于水，一部分在常温下不溶水，但在沸水中溶解。根据此种性质，可以先将样品煮沸，用硫酸铜将样品中的蛋白质沉淀下来，由于非蛋白氮已经溶于水，故可用过滤方法将其与样品中的蛋白质分离。在过滤时，水的温度一定不能太低，否则象双缩脲一类的物质会因为不溶于常温水而不能被过滤掉。用此种方法测定出的蛋白质含量称为样品的真蛋白质。但实际上，此种方法有很大的局限性。如果非蛋白氮不溶于沸水，或者将一般的非蛋白氮微囊化，此种方法测出的结果会与样品中的实际真蛋白有很大的差异。

二、氨基酸测定法
为了真正能够判定样品中是否掺有非蛋白氮，需测定样品中的氨基酸含量。无论采用经典的氨基酸自动分析仪分析（柱后衍生），还是采用比较快捷的HPLC分析（往前衍生），将所测定的氨基酸总量相加得到一个总氨基酸数值，然后将此数值乘以6.25为M，和用凯氏定氮法测定的粗蛋白质N相比较，M至少为N的85％（M可能略大于N）。如果低于此数值，则可以判定该样品中掺有非蛋白氮。

三、水解蒸馏法
1、原理：非蛋白氮主要包括五类：尿素及其衍生物类、氨态氮类、铵类、肽类及其衍生物、动物粪便及其它废弃物类。如果在原料中掺有氨态氮类、铵类和粪便比较容易判断（可采用硫酸铜沉淀法加镜检），一般很少将肽类及其衍生物掺入其中，剩下比较难鉴别的就是尿素及其衍生物。尿素和尿素衍生物经过强酸或强碱水解为氨盐或氨和其它的物质，在强碱的条件下可以蒸馏出氨气，原料中的蛋白质经过水解成氨基酸盐，氨基酸盐在强碱条件下稳定，从而可将非蛋白氮和真蛋白氮进行分离。

2、仪器和设备：酒精喷灯，试管和其它常用的仪器。

3、试剂与溶液：6mol/l的盐酸溶液和其它常用的试剂。

4、测定方法：本文只列出用酸水解的方法。采集有代表性样品约100g，混匀后用四分法缩分出209左右，将其粉碎，使其全部通过60目样品筛。精确称取0.3000g的样品，置于容积为60ml的试管底部（注意样品勿沾在管壁上），加入30ml 6mol/l的盐酸溶液，将试管在距试管口1～2cm处用喷灯加热并封口。将封好的试管置于干燥箱内，于110℃下水解24h。冷却后打开试管，将水解液过滤至100ml容量瓶中，用蒸馏水反复多次冲洗试管和滤纸，然后定容至刻度。用10ml移液管移取10ml样液移入半微量式定氮仪的反应室中，加入20ml 1∶1的氢氧化钠溶液蒸馏10 min，余下的步骤按照测定粗蛋白的方法进行操作，得出样品所消耗的盐酸的体积为V1（ml）。同时作空白滴定可得消耗的盐酸的体积为V0，设所称样品的质量为M（g）。

5、非蛋白氮的粗蛋白质计算公式

CP(%)＝（V1-V0）×C×O.14×6.25/M 蛋白就用凯氏定氮法1、 样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸铵同一方法做试剂空白试验。
2、 按图装好定氮装置，于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。
3、 想接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示剂1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，立即将玻璃盖塞紧，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.01N硫酸或0.01N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。
同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作。
计算：
X =(（V1-V2）*N*0.014)/( m*（10/100）) +F*100
X：样品中蛋白质的含量，g；
V1：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；
V2：试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，ml；
N：硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；
0.014：1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；
m：样品的质量（体积），g（ml）；
F：氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为 5.30。

❼ 国际的测量法，测蛋白质

蛋白质测定的国标规定方法——凯氏定氮法介绍
食品中蛋白质的测定方法

本标准适用于各类食品中蛋白质的测定。
1原理
蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。
2试剂
所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。
2.1硫酸铜。
2.2硫酸钾。
2.3硫酸。
2.42%硼酸溶液。
2.5混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。
2.640%氢氧化钠溶液。
2.70.05N硫酸标准溶液或0.05N盐酸标准溶液。
3仪器
定氮蒸馏装置：如图所示。
（图略）
4操作方法
4.1样品处理：精密称取0.2～2.0g固体样品或2～5g半固体样品或吸取10～20ml液体样品(约相当氮30～40mg)，移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h。取下放冷，小心加20ml水。放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验。
4.2按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。
4.3向接收瓶内加入10ml2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化稀释液由小玻杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻杯的棒状玻塞。将10ml40%氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。
同时吸取10.0ml试剂空白消化液按4.3操作。
4.4计算

式中：X——样品中蛋白质的含量，%；
V1——样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；
V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；
N——硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；
0.014——1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；
m——样品的质量(体积)，g(ml)；
F——氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为5.30。

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❽ 蛋白质怎么检验(小学四年级上册)

（一）蛋白质的盐析
取1.5mL蛋白质溶液，加入等体积饱和硫酸铵溶液（浓度为50%饱和），微微摇动试管，使溶液混合均匀后，静置数分钟，球蛋白即析出呈絮状沉淀（如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵），用滤纸滤取上清液，滤液中再加入固体硫酸铵粉末至不再溶解，析出的即为清蛋白，再加水稀释，观察沉淀是否溶解。
（二）蛋白质的沉淀
1．用重金属盐沉淀蛋白质
取三支试管，各加1mL蛋白质溶液，分别各加3滴6%醋酸铅溶液、3滴2%硫酸铜溶液和3滴1%硝酸银溶液，观察蛋白质沉淀的析出。
2．用有机酸沉淀蛋白质
取二支试管，各加1mL蛋白质溶液，并加5%醋酸溶液使之呈酸性（该沉淀反应最好在弱酸中进行）。然后分别滴加饱和苦味酸、饱鞣酸溶液，直至沉淀产生为止。
用10%三氯醋酸溶液、3%磺柳酸溶液进行类似实验（用量同前），观察现象。
（三）蛋白质的颜色反应
1．黄蛋白反应
于试管中，加1mL蛋白质溶液和10滴浓硝酸溶液，直火加热煮沸，观察溶液和沉淀颜色。冷却后，再加入20滴10%氢氯化钠溶液，观察颜色变化。
2．与茚三酮的反应
在二支试管中，分别加1%赖氨酸溶液和1mL蛋白质溶液，分别加2滴茚三酮溶液，加热至沸，观察有什么现象？
3．与硝酸汞试剂作用——米伦反应
在二支试管中，分别加1mL 0.5%苯酚溶液和1mL蛋白质溶液，再各加0.5mL米伦试剂（不可太多），苯酚溶液出现玫瑰红色，而蛋白质溶液加热后出现沉淀，加热凝固的蛋白质呈砖红色，有时溶液也呈红色。
4．蛋白质的双缩脲反应
(1) 双缩脲的生成
于干燥试管中，加0.2g～0.3g尿素，微火加热，尿素熔化并形成双缩脲，放出的氨可用红色石蕊试纸试验。试管内有白色固体出现后，停止加热。
(2) 双缩脲反应
上述产物冷却后，加1mL10%氢氧化钠溶液，摇匀，再加2滴2%硫酸酮溶液，混匀，观察有无紫色出现。
于试管中，加1mL清蛋白溶液和1mL10%氢氧化铜溶液，再加1滴～2滴2%硫酸铜溶液共热，由于蛋白质与硫酸铜生成络合物而呈紫色。取1%赖氨酸溶液作对照，观察颜色变化。
(四) 核蛋白组成的鉴定
1．核蛋白的水解
取20mL酵母核蛋白混悬液于离心管中离心分离，弃去清液，将沉淀转入小烧杯中，加15mL 5%硫酸，盖上表面皿在水浴上煮沸约1h（煮沸过程中保持原有体积），水解毕，离心分离，取上层清液作以下检查。
2．核糖的鉴定
于试管中，加1mL 20%间苯二酚盐酸溶液，以小火加热至沸，迅速加入5滴水解液，呈现红色，（如红色不显可再稍加热）。
3．磷酸的鉴定
取10滴水解液，置于试管中，加5滴7%钼酸铵溶液和2滴浓硝酸溶液，小心于火上加热，即有黄色沉淀生成。
4．嘌呤与嘧啶的鉴定
取约4mL水解液，置于小烧杯中，加入氨水至微碱性，过滤，在滤液中加1mL 5%硝酸银铵溶液，静置片刻，即有絮状的嘌呤或嘧啶银盐沉淀生成。

注意事项
米伦试剂是硝酸、亚硝酸、硝酸汞及亚硝酸汞之混合物，能与苯酚及某些酚类起颜色反应。

❾ 蛋白质蒸馏装置的水蒸气发生器中为什么要用硫酸调成酸性

避免挥发性的碱性物质进入蒸馏产物，影响氨的测定。

❿ 豆粕中用粗蛋白计算赖氨酸的公式是什么或者已知豆粕粗蛋白，如何计算出其中的赖氨酸含量

怎样测定花生粕和豆粕用定氮仪测定粗蛋白含量

用上海沛欧定氮仪怎样测定花生粕和豆粕用定氮仪测定粗蛋白含量？

用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时，则可用此法测定样品中蛋白质的含量。当蛋白质与浓硫酸共热时，其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用天生硫酸铵。此过程通常称为“消化”。但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加进硫酸钾或硫酸钠以进步反应液的沸点，并加进硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。消化完成后，在凯氏定氮仪中加进浓碱，可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借助水蒸汽蒸馏法，将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中氢离子结合，使溶液中的氢离子浓度降低，指示剂颜色改变，然后用标准无机盐酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。蛋白质的含氮量为16%，即1克蛋白质中的氮相当于6.25克蛋白质，用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。

1 实验材料 1.1 器材 上海沛欧SKD-100定氮仪 、消化炉SKD-08S2 1.2 试剂2 实验步骤
实验材料
器材
上海沛欧凯氏定氮仪 1套（SKD-08S2消化炉可以任意选择消化孔数，而不影响热量散失）；
300ml凯氏烧瓶 4个；
移液管；锥形瓶；
试管；
小玻璃珠
试剂
98%浓硫酸分析纯；
35％氢氧化钠溶液；
2％硼酸溶液；
标准盐酸溶液（0.01mol／L）。
粉末硫酸钾-硫酸铜混合物 ：K2SO4与CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。
混合指示剂（田氏指示剂）：由50ml 0.1％甲烯蓝乙醇溶液与200ml 0.1％甲基红乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。
样品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作为样品。
实验步骤
安装凯氏定氮仪。
消化：取4个300ml凯氏烧瓶并标号,各加1颗玻璃珠，在1号及2号瓶中各加样品1ml，催化剂（K2SO4- CuSO4·5H2O）200 mg，浓硫酸5 ml。留意加样品时应直接送进瓶底，而不要沾在瓶口和瓶颈上。在3号及4号瓶中各加1 ml蒸馏水和与1、2号瓶相同量的催化剂和浓硫酸，作为对照。在透风橱内进行消化。在消化开始时应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明淡绿色为止。撤掉火力，冷却至室温。 （上海沛欧SKD-08S2消化炉可编程设定消化炉消化样品的升温曲线）
蒸馏：
蒸馏器的洗涤：用水洗涤干净微量凯氏定氮仪，在蒸汽发生器中加进用几滴硫酸酸化的蒸馏水和几滴甲基红指示剂，用这样的水蒸气洗涤凯氏定氮仪。约15分钟后，在冷凝器下端倾斜放好装有硼酸-指示剂的锥形瓶，继续蒸汽洗涤2分钟，观察锥形瓶内的溶液是否变色，如不变色则证实蒸馏装置内部已洗涤干净。移走锥形瓶，停止加热，打开夹子。 （沛欧skd-100可以设定清洗程序）
蒸馏：设定取30％的氢氧化钠溶液10ml，向玻璃杯中加进蒸馏水约5ml稀释液，设定蒸馏时间5分钟，开始蒸馏。氨气进进锥形瓶，瓶中的酸溶液由紫色变成绿色。再继续下一个蒸馏操纵。待样品和对照均蒸馏完毕后，同时进行滴定。
滴定：用0.01mol／L的标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，硼酸指示剂溶液由绿色变淡紫色为滴定终点。
结果计算：

其中：

A为滴定样品用往的盐酸溶液均匀ml数；

B为滴定对照液用往的盐酸溶液均匀ml数；

C为所取样品溶液的ml数。