上液相時純水甲醇和標品跑出來均在同一時間出峰

A. 液相檢驗時甲醇的溶劑峰在幾分鍾

最好不要。
溶劑最好是使用流動相。因為純乙腈，純甲醇和流動相之間會有差異存在。
第一是溶解度的問題，很多樣品在有機溶劑中溶解度很好，在水相中溶解度稍差。這樣的樣品在用甲醇、乙腈配製時溶解非常好，但是到流動相中可能會析出，從而堵住進樣口。
第二就是極性和酸鹼度差異問題。如果流動相中水相比例很高，或者酸鹼度偏差很大，那麼樣品很可能會出現肩峰或者叉峰的情況。
有的樣品可以用純水作為溶劑，但是一般的實驗都盡量避免用純乙腈或者甲醇作為溶劑。

B. 液相色譜儀使用及工作原理。

液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，專對混合物進行先分離，屬而後分析鑒定的儀器。廣泛應用到生物化學、食品分析、醫葯研究、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。

液相色譜儀工作原理：統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中液相色譜儀的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內，由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式列印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統，下面將分別敘述其各自的組成與特點。

深圳埃科瑞儀器設備有限公司是一家集研發、設計、生產、銷售、售後為一體的儀器設備公司，公司GC102AF 型氣相色譜儀是完全計算機反控，可以實現遠程儀器檢測和故障診斷的配備氫火焰離子化檢測器（FID）的新一代普及型氣相色譜儀。

C. 液相色譜工作原理

系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式列印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統，下面將分別敘述其各自的組成與特點。
1．進樣系統
液相色譜儀
一般採用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恆定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。
2．輸液系統
該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l．47～4．4X10Pa，流速可調且穩定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高解析度、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存器和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質（即使僅有一個基團的差別或是同分異構體）都能獲得有效分離。
3.分離系統
該系統包括色譜柱、連接管和恆溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管），內徑為2～5mm，由"優質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料製成，住內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質和固定液構成）．固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達1000?）和比表面積大的特點，加之其表面經過機械塗漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣），或者用化學法偶聯各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物。因此，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯豌豆凝集素（PSA）後，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。 另外，固定相基質粒小，柱床極易達到均勻、緻密狀態，極易降低渦流擴散效應。基質粒度小，微孔淺，樣品在微孔區內傳質短。這些對縮小譜帶寬度、提高解析度是有益的。根據柱效理論分析，基質粒度小，塔板理論數N就越大。這也進一步證明基質粒度小，會提高解析度的道理。 再者，高效液相色譜的恆溫器可使溫度從室溫調到60C，通過改善傳質速度，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率。
液相色譜儀常見故障處理
1、氣泡溢出
流動相內有氣泡,關閉泵,打開泄壓閥,打開purg鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產生的氣泡。原因過濾器長期沉浸於乙酸銨等緩沖液內,過濾器內部由於黴菌的生長繁殖,形成菌團,阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經過濾器進入流動相。處理過濾器浸泡於5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鍾即可;亦可將過濾器浸泡於5%硝酸溶液中12～36小時,輕輕震盪幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續將過濾器浸泡於5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內部的黴菌菌團已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調至1.0～3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。
2、柱壓高原因
(1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積於柱內; (2)樣品污染沉積。處理對於第一種情況先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降後,相應提高流速沖洗,柱壓大幅度下降後,用常溫純水沖洗,之後用純甲醇沖洗柱子30分鍾;對於第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然後換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然後用純水沖洗,最後甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鍾以上。
3、既無壓力指示,又無液體流過
(1)泵密封墊圈磨損; (2)大量氣泡進入泵體。處理對於第一種情況,更換密封墊圈;對於第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
4、壓力波動大,流量不穩定
原因系統中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
5、出峰不佳,峰分叉
(1)色譜柱被污染; (2)柱頭填料塌陷。處理對於第一種情況,先用純水反向沖洗柱子,然後換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然後用純水沖洗,最後甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鍾以上。如沖洗後依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對於第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鍾以上。
6、峰面積重復性不佳
(1)進樣閥漏液; (2)加樣針不到位。 (3)液量不足. 處理對於第一種情況更換進樣閥墊圈;對於第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液後須快速、平穩地從LOAD狀態轉換到INJECT狀態,以保證進樣量的准確。日常工作中,液相色譜儀的保養非常重要,如要注意不要讓空氣進入輸液系統和高壓泵中,儲液器內的溶液如長時間未用應清洗儲液器並更換溶液,每次用完色譜儀後緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質,完全溶解,盡量減少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,以免殘留液在進樣閥內析出固體引起堵塞;色譜柱作好標記,用於不同分析目的的色譜柱不要混用等。

D. 液相色譜所用流動相使用時應注意哪些問題

1、流動相恢復到室溫後使用。流動相溫度與室溫相差時，流動相在恢復到室溫前，基線水平很難穩定，特別是發生漂移，也容易產生氣泡等現象。水與有機溶劑混合時，混合液變化大，往往會與室溫相差很大，務必注意。

2、做HPLC流動相的試劑應用HPLC級的、水應用二次蒸餾水，水相流動相需經常更換，防止長菌變質。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）並不合適、尤其是做梯度洗脫時，水中的不純物會成為鬼峰，從而干擾分析結果。

3、流動相的pH值過高或過低，流動相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學破壞，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的。

4、用緩沖鹽做流動相時，在使用前和使用後都要用水清洗流路，絕對禁止將緩沖溶液留在流路中靜置或更長時間。

5、在更換兩種互不相容的流動相時，中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如：先用甲醇水做流動相，然後再用正己烷做流動相時，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然後用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣。在更換流動相時還要考慮色譜柱是否更換。

E. 液相色譜的保留時間總是不穩定，該怎麼解決

1、首先考慮是否有堵塞，查看各放溶劑瓶的過濾頭是否有臟，臟了後清洗，玻璃的30%稀硝酸泡，不銹鋼的可以超聲處理。
2、purge閥打開，看看單通道5ml/min流速，用水壓力多大，如果超過10bar就要更換purge閥的濾芯了，不過到5bar就比較臟了。
3、清洗下主動閥的濾芯。
4、如果這些都處理了，還是不行，那估計是比例閥的問題了。

壓力不穩，出峰時間前後飄，覺得進氣泡或者崩頭污染的可能性比較大，用脫氣過的異丙醇多沖一會試試。
有兩種可能,一是流動相里有汽泡,二是檢測器里殘留有汽泡.
壓力不穩這個就不正常，看是是不是有泄漏的地方，或者單向閥，比例閥有問題

純水和甲醇確實會使保留時間不太穩定的原因是 脫氣沒有完全，氣泡進入單向閥。所以引起了柱壓不穩。導致的是基線不穩和流速變化。所以造成了Rt前後不一致。
我認為主要是氣泡，用注射器吸滿甲醇，拆開單向閥進，出螺母，從入口出打入甲醇，然後出口出會有氣泡冒出。即可。

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F. 液相色譜儀每針的出峰時間一針比一針晚。今天做實驗時，標品前四針出峰時間相同，後幾針就開始以0.1秒

原因分析：
1.你的流動相中有三乙胺或二乙胺等掃尾劑,應控制掃尾劑的用量,不要過量,嚴格按照標准方法配製.
2.含有掃尾劑的流動相平衡時間本身就很長,不建議每天都清洗色譜系統,可以採用在不工作的時候將廢液管接迴流動相瓶中低流量連續平衡色譜系統,減少每次工作的流動相平衡時間.
3.環境溫度的影響也較大,應當使用柱溫箱.
4.如果使用的是視差折光檢測器,不但要使用柱溫箱,連室溫也要控制,避免人員在實驗室頻繁走動導致的溫度變化.
5.你的檢測器是否有溫度控制,如果有建議與色譜柱採用相同的溫度.

G. 液相色譜出現雜質峰

你的意思是說，進樣品溶液、純水、甲醇、流動相都會出現保留時間1.8min，峰面積40的色譜峰？
如果這樣的話只能推斷是進樣系統的問題。因為一般的色譜柱在1.8min位置應該是死體積。就算是溶劑峰也得在3min以後開始出峰才對。而空針沒有這個色譜峰，代表你的色譜柱沒有問題。
感覺可能是進樣系統被污染了，或者是有氣泡之類的東西，每次進樣都會帶入色譜柱。目前我只能這么猜測。你把色譜柱卸下來，然後裝一個自動進樣小瓶的異丙醇，連續進樣，看看能不能把裡面的臟東西帶出來。

H. 高效液相圖譜的倒峰的問題

應該是溶劑峰吧，甲醇在一些波長處可能出現倒峰。其實只要走一針溶劑就知道了。要保證溶劑比例和你溶樣的時候是一樣的哦！溶劑峰的可以扣除的，對結果影響不會很大，除非出現在主峰或其他重要組分附近。如果不是溶劑峰，還有可能是以下原因：1 信號線極性接反了或是參數設置成倒峰的；
2 走梯度走出來的；
3 氘燈老化，流通管道或池不通暢；
4 樣品和流動相中含有小顆粒,氣泡等；
5 參比波長設置的不合適，如果在出峰位置的另一化合物參比波長附近的某一范圍內有吸收，那麼就可能出現倒峰。LZ可以結合自己的實驗情況加以分析。

I. 液相出峰

這根柱子可能壞了，填料塌陷。已經不能用了。如果你手上有備用柱子就換新柱子好了。可以用任何一個標准方法測定一下理論塔板數。比如下面的方法你可以試一下：
色譜條件：
流動相：乙腈-純水（65：35）
流速：1.0ml/min
波長：254nm
樣品：甲苯（用流動相稀釋）

方法隨便什麼標准方法，這個樣品隨便什麼標樣都可以，我通常用甲苯。不過忘了稀釋倍數了。500倍或1000倍？測定一下理論塔板數。一般這個條件的新柱子能在20000左右。如果你的理論塔板數低於5000，那麼柱效就比較差了。

如果想挽救一下的話可以查閱一下色譜柱再生。簡單的話就是把色譜柱倒過來。然後用0.3-0.4ml/min流速的乙腈或甲醇沖洗4小時以上。或許可以再用一段時間。