Ⅰ 做配葯品,稀釋引物,PCR實驗中,對水的要求要很高么
配製一般化學試劑使用二級水即可。
配製生化試劑,包括引物稀釋、PCR所用水,以及轉膜、核酸抽提等,必須使用二次蒸餾水或一級水。
Ⅱ 如何溶解引物
根據引物的濃度,一般加300-600ul水,稀釋成10pmol/ul的工作濃度
Ⅲ 合成的引物怎麼溶解
◆乾粉引物溶解稀釋方法:
收到引物後,在開啟離心管蓋前在3000-4000轉/分鍾的轉速下離心1分鍾,以防開蓋時引物乾粉散失.引物保存在高濃度的狀況下比較穩定.如果對實驗的重復性要求較高,合成的OD數較大,建議分裝,避免反復凍融.引物一般配製成10-100pmol/uL(umol/L).
引物管上標有1OD 相當於多少umol 的計算結果,進行稀釋時的引物加水量可以按以下公式計算:
稀釋成100pmol/ul 1OD 需加水量(ul)=1OD相當於umol 數×10000
例如,您拿到的引物DNA合成報告單上標有1OD≈0.0035umol ,包裝量是1OD/管,如果您希望將引物濃度定為10umol/L,那麼只需用350ul無核酸酶的雙蒸水將1OD的引物乾粉溶解即可.
◆液體引物再稀釋可用下列公式:
稀釋引物要達到的濃度(pmol/ul)=母液濃度(pmol/ul)×汲取母液的體積(ul)÷(汲取母液的體積(ul)+加水量(ul))
引物一般來的時候是乾粉.這種狀態能保存最長的時間.
如果用的話要先離心,5分鍾(12000轉).然後用它上面寫的nmol*1000/你的終濃度=你要加的水量
溶解液有TE和dd水.TE其實就是tris鹽酸和EDTA的混合液.理論上用TE保存好,不容易降解.
一般配的時候要先配成儲存液(濃度是100umol/L),在配成使用液(濃度是10umol/L).這樣的好處是引物不容易降解.
引物忌諱反復凍溶,大家要注意.如果你都配成了使用液就應該分裝.使用液放在4度(2/3個月沒問題的),儲存液放在-20度.
引物稀釋很簡單,一般裝引物的管子上都標有引物的量如3.6nmol/OD,可直接往管中加360ul的無菌雙蒸水溶解就可以了,在加水之前要先高速離心管子幾分鍾,加水後要高速漩渦混勻幾分鍾就可以用了,此時的儲存濃度是10umol/L,如果體系是20ul一般加1ul引物(引物的使用濃度最大為10pmol/ul,但一般在0.5-5pmol/ul即可 ).
引物的濃度設定,不同的人有不同習慣,有的喜歡稀釋成100uM的,有的習慣於稀釋成20uM,也有的稀釋成10uM的.建議稀釋成20uM的濃度,因為如果你稀釋成100uM,當你所做PCR的體系不是很大的時候,體積太小了引物就不好加,容易產生誤差;如果是稀釋成10uM,引物濃度過低,容易降解.不過不管你稀釋成多大濃度的,最好分裝保存,免得反復凍融容易降解.
Ⅳ 溶解引物時可以用的depc水代替雙蒸水
當然可以,depc水本來就是雙蒸水配的,而且還用depc去除了RNA酶,又高溫高壓過,我覺得比雙蒸水更好些呢,我就喜歡用DEPC水,就是配的時候得小心些~
DEPC本身有毒,但是配成DEPC水後經過高溫高壓就無毒了
Ⅳ 溶解引物需要什麼水
先離心!然後加入適量的水或TE溶解。一般配製成較高濃度的母液(約100μM),保存於-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配製成10μM或20μM的工作液。引物濃度不宜偏高,濃度過高有兩個弊端:一是容易形成引物二聚體(primer-dimer),二是當擴增微量靶序列並且起始材料又比較粗時,容易產生非特異性產物。一般說來,用低濃度引物不僅經濟,而且反應特異性也較好。一般終濃度用0.25-0.5pM/μl較好。
1 引物的分子量如何計算? 比如:AAGCTTTTACCGC的分子量是多少?
2 OD值,1個OD值是不是等於40UG。
3 質量數,質量數的含義是什麼,怎麼計算?
4摩爾數(μmol)和終濃度(pM)和稀釋水量(μl)
是不是計算稀釋引物都要用到以上四點的各個參數?具體的公式是什麼呢?
合成引物的單子上應該有演算法:
1OD=33ug
1個鹼基的分子量=324.5
(以上為近似值,通常都這樣用)
1條引物的分子量=鹼基數*324.5
質量數=OD*33ug
摩爾數=質量數/分子量
先離心的原因是什麼?
因為引物合成後是乾粉狀的,在運輸過程中可能會沾到管壁或管蓋上,直接打開有些粉末可能會飄出去,引物的量就減少了。先離心使粉末都到管底,可以避免這種現象的發生。
然後根據以下公式可計算出所加雙蒸水的量
33nmol/OD×管上所標OD值×100
是為10pmol/ul濃度的引物溶液,還可以由此推算其它濃度所需的雙蒸水量。
可於-20度保存。
訂引物回來的說明書背面一般都有引物稀釋計算的說明的.
注意分裝!
Ⅵ 稀釋引物用去離子水可以嗎
用一般的純化水就可以了,我們一般都用哇哈哈水,呵呵
Ⅶ 合成的引物該怎麼處理,用超純水還是什麼稀釋
如果短期內不用,不開管-20度保存就行,開管了,用超純水稀釋就可以,一般按照說明書稀釋就行,稀釋後-20度保存,我用的-20度保存5年還能用,不過沒評價效果降低到什麼程度
Ⅷ 大家溶解引物是用dd水還是TE緩沖液
TE是弱鹼性,適合於引物的保存,引物若在酸性下比較不穩定。用H2O的話,更適合於後續的PCR操作。
如果你直接使用的就可以用ddw,要保存還是用TE的好哈!
Ⅸ pcr用超純水
最好還是在冰上做啦,一次兩次沒有問題,久了多了可能問題就出來了
一般用的是滅菌的雙蒸水
保證引物的終濃度就可以.都是用水稀釋的,沒啥差別