凝膠過濾色譜特點

㈠ 凝膠過濾層析常用介質有哪些凝膠過濾層析技術有何優點與用途

1.凝膠層析操作簡便，所需設備簡單。有時只要有一根層析柱便可進行工作。分離介質—凝膠完全不需要像離子交換劑那樣復雜的再生過程便可重復使用。
2.分離效果較好，重復性高。最突出的是樣品回收率高，接近100%。
3.分離條件緩和。凝膠骨架親水，分離過程又不涉及化學鍵的變化，所以對分離物的活性沒有不良影響。
4.應用廣泛。適用於各種生化物質，如肽類、激素、蛋白質、多糖、核酸的分離純化、脫鹽、濃縮以及分析測定等。分離的分子量范圍也很寬，如SephadexG類為102～105d；Sepharose類為105～108d。
5.解析度不高，分離操作較慢。由於凝膠層析是以物質分子量的不同作為分離依據的，分子量的差異僅表現在流速的差異上，所以分離時流速必須嚴格把握。因而分離操作一般較慢。而且對於分子量相差不多的物質難以達到很好的分離。此外，凝膠層析要求樣品粘度不宜太高。凝膠顆粒有時還有非特異吸附現象。

㈡ 簡述凝膠過濾，離子交換和親和色譜之間的區別

凝膠過濾色譜法：解析度較高，但是上樣量僅為柱體積的1%，而且對流速也有嚴格的限制。回
離答子交換色譜法：根據目的蛋白質表面所含有的氨基酸殘基帶有的凈電荷分離蛋白質，但是解析度沒有凝膠過濾高。
親和層析法：根據生物分子的特異性分離目的蛋白，特異性很高，但是配件容易丟失 適合含有特異性的標簽的或者抗體。
疏水色譜：根據疏水性來分離蛋白質,缺點是有的蛋白質在高鹽中溶解度降低，所以應用范圍受到限制，適合蛋白質表面含有較多疏水性氨基酸殘基的疏水性蛋白質。

㈢ 生物實驗中凝膠色譜法是怎麼樣的工作原理

凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術，是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術，由於設備簡單、操作方便，不需要有機溶劑，對高分子物質有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。
具體可以參見網路
http://ke..com/view/147147.htm

㈣ HPSEC原理

原理：排阻色譜法也稱空間排阻色譜或凝膠滲透色譜法，是一種根據試樣分子的尺寸進行分離的色譜技術。排阻色譜的色譜柱的填料是凝膠，它是一種表面惰性，含有許多不同尺寸的孔穴或立體網狀物質。凝膠的孔穴僅允許直徑小於孔開度的組分分子進入，這些孔對於流動相分子來說是相當大的，以致流動相分子可以自由地擴散出入。對不同大小的組分分子，可分別滲入到凝膠孔內的不同深度，大個的組分分子可以滲入到凝膠的大孔內，但進不了小孔甚至於完全被排斥。小個的組分分子，大孔小孔都可以滲入，甚至進入很深，一時不易洗脫出來。因此，大的組分分子在色譜柱中停留時間較短，很快被洗脫出來，它的洗脫體積很小，小的組分分子在色譜柱中停留時間較長，洗脫體積較大，直到所有孔內的最小分子到達柱出口，完成按分子大小而分離的洗脫過程。尺寸排阻色譜被廣泛應用於大分子的分級，即用來分析大分子物質相對分子質量的分布。
排阻色譜的固定相一般可分為軟性、半剛性和剛性凝膠三類。所謂凝膠，指含有大量液體（一般是水）的柔軟而富有彈性的物質，它是一種經過交聯而具有立體網狀結構的多聚體。
（1）軟性凝膠如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠都具有較小的交聯結構，其微孔能吸入大量的溶劑，並能溶漲到它干體的許多倍。它們適用於水溶性作流動相，一般用於小分子質量物質的分析，不適宜在高效液相色譜中。
（2）半剛性凝膠如高交聯度的聚苯乙烯。常以有機溶劑作流動相。
（3）剛性凝膠如多孔硅膠、多孔玻璃等，它們既可用水溶性溶劑，又可用有機溶劑作流動相，可在較高壓強和較高流速下操作。
色譜分離方法的選擇：
要正確地選擇色譜分離方法，首先必須盡可能多的了解樣品的有關性質，其次必須熟悉各種色譜方法的主要特點及其應用范圍。選擇色譜分離方法的主要根據是樣品的相對分子質量的大小，在水中和有機溶劑中的溶解度，極性和穩定程度以及化學結構等物理、化學性質。
一、相對分子質量
對於相對分子質量較低（一般在200以下），揮發性比較好，加熱又不易分解的樣品，可以選擇氣相色譜法進行分析。相對分子質量在200～2000的化合物，可用液固吸附、液-液分配和離子交換色譜法。相對分子質量高於2000，則
可用空間排阻色譜法。
二、溶解度
水溶性樣品最好用離子交換色譜法和液液分配色譜法；微溶於水，但在酸或鹼存在下能很好電離的化合物，也可用離子交換色譜法；油溶性樣品或相對非極性的混合物，可用液-固色譜法。
三、化學結構
若樣品中包含離子型或可離子化的化合物，或者能與離子型化合物相互作用的化合物（例如配位體及有機螯合劑），可首先考慮用離子交換色譜，但空間排阻和液液分配色譜也都能順利地應用於離子化合物；異構體的分離可用液固色譜法；具有不同官能團的化合物、同系物可用液液分配色譜法；對於高分子聚合物，可用空間排阻色譜法。

㈤ 凝膠過濾層析的原理是什麼

基本原理：凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析。是利用具有網狀結構的凝膠的分子篩作用，根據被分離物質的分子大小不同來進行分離。

層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質，多是交聯的聚糖（如葡聚糖或瓊脂糖）類物質，小分子物質能進入其內部，流下時路程較長，而大分子物質卻被排除在外部，下來的路程短，當一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時，溶液中的物質就按不同分子量篩分開了。

凝膠層析的特點：

1）凝膠層析操作簡便，所需設備簡單。有時只要有一根層析柱便可進行工作。分離介質——凝膠完全不需要像離子交換劑那樣復雜的再生過程便可重復使用。

2）分離效果較好，重復性高。最突出的是樣品回收率高，接近100%。

3）分離條件緩和。凝膠骨架親水，分離過程又不涉及化學鍵的變化，所以對分離物的活性沒有不良影響。

4）應用廣泛。適用於各種生化物質，如肽類、激素、蛋白質、多糖、核酸的分離純化、脫鹽、濃縮以及分析測定等。分離的分子量范圍也很寬，如Sephadex G類為102-105 D；Sepharose類為105-108 D。

以上內容參考：網路-凝膠過濾層析

㈥ 液相色譜有幾種分離類型各有什麼特點

1、吸附色譜法

吸附色譜法的固定相為吸附劑，色譜的分離過程是在吸附劑表面進行的，不進入固定相的內部。與氣相色譜不同，流動相(即溶劑)分子也與吸附劑表面發生吸附作用。

在吸附劑表面，樣品分子與流動相分子進行吸附競爭，因此流動相的選擇對分離效果有很大的影響，一般可採用梯度淋洗法來提高色譜分離效率。

在聚合物的分析中，吸附色譜一般用來分離添加劑，如偶氮染料、抗氧化劑、表面活性劑等，也可用於石油烴類的組成分析。

2、分配色譜法

這種色譜的流動相和固定相都是液體，樣品分子在兩個液相之間很快達到平衡分配，利用各組分在兩相中分配系數的差異進行分離，類似於萃取過程。

3、離子交換色譜

離子交換色譜通常用離子交換樹脂作為固定相。一般是樣品離子與固定相離子進行可逆交換，由於各組分離子的交換能力不同，從而達到色譜的分離。

離子交換色譜法是新發展起來的一項現代分析技術，已廣泛用於氨基酸、蛋白質的分析，也適合於某些無機離子(NO3-、SO42-、Cl-等無機陰離子和Na+、Ca2+、Mg2+、K+等無機陽離子)的分離和分析，具有十分重要的作用。

4、凝膠色譜法

凝膠色譜法既適用於水溶液的體系，又適用於有機溶劑的體系。

當所用的洗脫劑為水溶液時，稱為凝膠過濾色譜，其在生物界的應用比較多；採用有機溶劑為洗脫劑時，稱為凝膠滲透色譜，在高分子領域應用較多。

(6)凝膠過濾色譜特點擴展閱讀

液相色譜應用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。

(1)分離混合物

高效液相色譜法只要求樣品能製成溶液，不受樣品揮發性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。

通過與試樣預處理技術相配合，高效液相色譜法所達到的高解析度和高靈敏度，可分離並同時測定性質上十分相近的物質，能夠分離復雜混合物中的微量成分。並且隨著固定相的發展，還可在充分保持生化物質活性的條件下完成對其的分離。

(2)生化分析

由於高效液相色譜法具有高解析度、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫葯研究、環境分析、無機分析等各種領域，並已成為解決生化分析問題最有前途的方法。

(3)儀器聯用

高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。高效液相色譜一質譜聯用技術受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農葯和多核芳烴等。

㈦ 凝膠過濾層析的優點

它的突出優點是層析所用的凝膠屬於惰性載體，不帶電荷，吸附力弱，操作條件比較溫和，可在相當廣的溫度范圍下進行，不需要有機溶劑，並且對分離成分理化性質的保持有獨到之處。對於高分子物質有很好的分離效果。

㈧ 什麼是凝膠色譜法為什麼膠凝膠色譜法

凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術，是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術，由於設備簡單、操作方便，不需要有機溶劑，對高分子物質有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。
凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術，是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術，由於設備簡單、操作方便，不需要有機溶劑，對高分子物質有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜法主要用於高聚物的相對分子質量分級分析以及相對分子質量分布測試。根據分離的對象是水溶性的化合物還是有機溶劑可溶物，又可分為凝膠過濾色譜（GFC）和凝膠滲透色譜（GPC）。 GFC一般用於分離水溶性的大分子，如多糖類化合物。凝膠的代表是葡萄糖系列，洗脫溶劑主要是水。凝膠滲透色譜法主 凝膠色譜法圖示

要用於有 機溶劑中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相對分子質量分布分析及分離，常用的凝膠為交聯聚苯乙烯凝膠，洗脫溶劑為四氫呋喃等有機溶劑。凝膠色譜不但可以用於分離測定高聚物的相對分子質量和相對分子質量分布，同時根據所用凝膠填料不同，可分離油溶性和水溶 性物質，分離相對分子質量的范圍從幾百萬到100以下。近年來，凝膠色譜也廣泛用於分離小分子化合物。化學結構不同但相對分子質量相近的物質，不可能通過凝膠色譜法達到完全的分離純化的目的。凝膠色譜主要用於高聚物的相對分子質量分級分析以及相對勿子質量分布測試。目前已經被生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫學等有關領域廣泛採用，不但應用於科學實驗研究，而且已經大規模地用於工業生產。

㈨ 凝膠過濾色譜 與凝膠滲透色譜的區別是什麼

凝膠色譜以水為流動相的稱作凝膠過濾色譜，以有機溶劑為流動相的，稱作凝膠滲透色譜。

㈩ 凝膠滲透色譜的優點

（1）全部組分均在溶劑分子洗脫之前洗脫下來，分離時間短。
（2）可以預測洗脫時間，可以連續進樣。
（3）凝膠色譜的分離過程不依靠分子間作用力，一般情況下，沒有強保留的分子累積在色譜柱，所以分離時試樣組分不會丟失，柱的使用壽命也會延長。
（4）保留時間短，色譜峰窄，容易檢測。