漢密爾頓陰離子交換柱的清洗

㈠ 急求~離子交換柱清洗方法

離子交換層析
Tina 發表於 2006-2-21 12:21:00
材料與儀器

DEAE-32纖維素，pH8.0 0.01 mol/L Tris-HCl，工程菌破碎離心後的上清液；

層析柱

二、 方法與步驟

1） 裝柱：

用水清洗層析柱，柱內留存水距底部約1cm，加入18ml介質（凝膠溶液）。

2） 平衡：

加0.01M,PH8.0,tris-HCl緩沖液，直至流出液PH與緩沖液一致。

3） 上樣：

用量筒量出上清液體積，再加入等體積緩沖液混合，取EP管留1.5ml。待柱中水流出，至剛好覆蓋凝膠表面，靠璧緩慢加樣。

4) 用50ml緩沖液洗滌，用EP管隨機收集樣品穿出液和洗滌穿出液。

5) 洗脫：

將梯度洗滌儀和層析柱連接，洗脫瓶A（混合器）加200µl緩沖液，開口打開至兩瓶液面相平，相通管道出無氣泡，關閉連接，A中加入6gNaCl溶解，把裝置放在梯度混合儀上，開動攪拌器開關，打開A和B的連接通道，層析柱下端連收集器，收集洗脫流出液。

6） 控制流速，約4min/管，2-3ml/管。

分子篩的是凝膠層析
Sephadex G-100凝膠層析
Tina 發表於 2006-2-21 12:27:00
材料與儀器

Sephadex G-100，0.5 mol/L pH8.0 Tris-HCl，濃縮液

層析柱

二、 方法與步驟

1） Sephadex G-100 凝膠預處理

a) 100ml燒杯，稱取5克sephadex G-100,加入50ml去離子水，浸泡溶脹24小時。

b) 傾去sephadex G-100溶脹後凝膠上層的水，加入凝膠等體積的1.0 mol/L NaOH液處理，用攪棒輕輕攪動，並浸泡1小時處理後傾去。用去離子水洗滌。洗滌過程中，用傾去法除去細顆粒。其方法是用攪棒將凝膠攪勻（注意不要過分用力攪拌，以防止顆粒破碎），放置數分鍾，將未沉澱的細顆粒隨上層水倒掉。浮選3-5次，直至上層沒有細顆粒為止，再浸泡水洗至PH中性。

c) 將Sephadex G-100凝膠水溶液盛放於抽濾瓶中，用洗耳球塞住杯口，減壓抽氣30分鍾，除去凝膠溶液內的氣泡，將脫氣後的凝膠溶液輕輕倒入燒杯中，其中盛有1/2去離子水。

2) 裝柱

a) 層析柱(1.0Î50cm)用水清洗干凈，柱的上、下端聯接塑料管接上小乳膠管，裝上螺旋夾。將層析柱垂直裝好。校直過程用下端綁有鑰匙的繩子掛於鐵架的不同位置，從多角度校正使柱垂直。打開柱上埠，從柱底下出口管朝柱內注入水，使柱底全部充滿水而不留氣泡，關閉柱出口。最終柱內留存有2 cm的水。從出口處接上一根直徑2 mm細塑管，塑管另一端固定在柱的上端部位。

b) 攪動凝膠溶液（切勿攪動太快，以免空氣再逸入），使形成均一的薄膠漿，並立即沿玻棒倒入層析管內，讓加入的凝膠在柱內自然沉降，待柱底面上積起約1-2 cm的凝膠床後，打開柱出口水流。隨著柱內水的流出，上面不斷加入凝膠液，使形成的凝膠床面上有凝膠連續下降（如果凝膠床面上不再有凝膠顆粒下降，應該用攪棒均勻地將凝膠床攪起數厘米高，然後再加凝膠，不然就會形成界面，影響層析效果）。

c) 凝膠沉積到柱內凝膠是否均勻，有否「紋路」或氣泡。若層析柱不均一，必須重新裝柱。

3） 平衡

柱裝好後，使層析床穩定15-20分鍾，然後連接洗脫瓶出口和層析柱頂端，用3-5倍體積地緩沖液平衡層析柱。平衡過程中控制上柱緩沖液地進柱操作壓保持恆定。保持流速每滴/10秒。直至流出液的PH與上柱緩沖液完全相同。

4） 樣品洗脫

a) 上樣准備：

i) 上樣前打開層析柱上端，先檢查凝膠床界面是否平整，如果傾斜不平整，可用玻棒將凝膠床界面輕輕攪起後，再使凝膠自然沉降，形成平整狀態的凝膠床界面。用毛細吸管小心吸去大部分清液，然後讓液面自然下降，直至幾乎露出凝膠床界面。

ii) 樣品放入高速離心機，12000r/min、離心5 min。

iii) 上樣前吸取50µl樣品於EP管中，以備走電泳。

b) 樣品上樣：

i) 將樣品由玻棒引流沿管壁加入到凝膠床面上，注意不要將床面凝膠沖起。同時打開層析柱下面流出液開關（控制流速1滴/20秒），保持層析柱下面流出滴速與上樣的滴速一致，控制凝膠床界面不能脫水，並控制樣品區帶盡量狹窄。

ii) 當1.5ml樣品全部加入後，用 1-2 ml的0.5mol/L PH8.0 Tris-HCl洗脫液同上樣時一樣地保持層析柱下面流出滴速與上樣的滴速一致以控制凝膠床界面不能脫水，小心清洗凝膠床界面表面，使黏附著的樣品全部洗入凝膠床。

iii) 然後開始控制上樣的滴速大於層析柱下面流出滴速，使幾乎與凝膠床界面相平的洗脫液液面慢慢提高至凝膠床界面高出2cm左右，封閉層析柱上端。

iv) 保持層析柱上柱洗脫液入口處與層析柱下面流出處有一定勢壓。控制上柱緩沖液的進柱操作壓保持恆定。

c) 洗脫：

用0.1 mol/L PH8.0 Tris-HCl 緩沖液洗脫，用部分收集器收集，4分鍾/管（約2-3ml/管），收集約1-30管。

5） 酶活、酶濃度測定，參見2.6.2，2.6.3

6） 最高酶活收集管洗脫液留50µl，以備走電泳。

7） 將酶活較高的收集液10~14管合並，測定總體積為7.1 ml，精確測定酶活性。並用考馬思亮藍測定蛋白濃度。測酶活時體系稀釋了200倍，定蛋白時無稀釋。

㈡ 漢密爾頓陰離子交換柱新使用需要活化嗎

離子,比如氫氧根離子,氯離子等。上樣液中的陰離子與氫氧根離子或氯離子發生交換內,目... 換去離子水沖柱至中容性。3,用1N 氫氧化鈉緩慢流過樹脂柱,大約每小時走1.5倍柱體積,共...

pl是等電點吧,那麼你就要看了,陽離子交換柱首先交換下來的是陰離子,吸附的是陽離子,這樣的話,在PH6的時候,pl2.77的氨基酸是最先被洗脫的,接下來是最難洗脫的時pl10.76的...

代表水中無機鹽類,水質除鹽的基本反應可以用下列方程式表達: 1、陽離子交換樹脂:R-H+Na+ R-Na+H+ 2、陰離子交換樹脂:R-OH+Cl- R-Cl+OH- 陽、陰離子交換樹脂總的反...

帶電荷的原子是離子,其中帶正電荷的原子是陽離子,帶負電荷的原子是銀離子

Hpo4-

和苯扎溴銨(新潔爾滅)等。 兩性離子表面活性劑 這類表面活性劑的分子結構中同時具有正、負電荷基團,在不同pH值介質中可表現出陽離子或陰離子表面活性劑的性質。

㈢ 液相色譜柱應該怎樣清洗

朋友，什麼柱子規格，新柱舊柱？

正相or反相？

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㈣ 如何處理陰離子交換樹脂

能再生的,你看看說明書,然後找做這個樹脂的工程師問

因為吸水和失水的過程造成顏色專變化.
這些問題在做這個屬的工程師那裡都有好的解答.別再這里浪費時間了

使用去離子水．或者你去找廠家讓他提供更好的樹脂,把你的使用要求提出,他就明白了.

㈤ 哪位大神知道離子交換樹脂的操作步驟哇，具體的，比如預處理，裝柱，過柱，吸附，洗脫等...我說的對么

首先，預處理一般就是看你樹脂的類型。陽樹脂一般用鹽酸處理，陰樹脂內一般用NaOH處理。處理過容後用去離子水洗至中性後可以裝柱。一般都是用反洗的方法，使裝柱過程不在樹脂內部不產生氣泡。至於吸附和洗脫要看你拿樹脂做什麼的，如果是水處理直接再生就行了，只有用做吸附特殊物質的時候才洗脫收集你要吸附的物質

㈥ 急！急！如何裝陰離子交換柱，使用時候出現氣泡怎麼除去謝謝

可以用適量的有機溶劑潤洗一下層析柱，柱子體積較小的話就用玻璃棒攪勻排除一下氣泡。

不管是干柱和濕柱，都要加層析液，不能要求一開始就沒有氣泡的。要用洗脫劑不停的洗脫，就是用配置好的試劑一邊一邊對柱子進行洗脫，這樣不但可以消除氣泡，還可以使硅膠充分沉降，讓層析效果更好。等柱子沒有氣泡後在上樣用洗脫液進行層析。

若柱中留有氣泡或各部分松緊不勻（更不能有斷層）時，會影響滲透速度和顯色的均勻。去除就是用玻璃棒攪拌，趕走氣泡。

(6)漢密爾頓陰離子交換柱的清洗擴展閱讀：

水溶液中一些陽離子進入了反離子層，而原來的反離子層中的陽離子進入了水溶液。這種在正常濃度下，反離子層與水溶液之間的各向同性離子交換稱為離子交換作用。

離子交換主要發生在擴散層與正常水溶液之間。由於粘土顆粒表面通常帶有負電荷，離子交換主要是陽離子交換，所以又稱陽離子交換。離子交換嚴格遵循等價定律，即進入反離子層的陽離子等價於從反離子層排開的陽離子等價。

㈦ 離子交換柱再生進完酸鹼之後怎麼辦直接正洗行不行

下面是離子交換樹脂的再生的一些方法可以參考：<br>
離子交換樹脂的再生 <br>
（1）常規的再生處理 <br>
離子交換樹脂使用一段時間後，吸附的雜質接近飽和狀態，就要進行再生處理，用化學葯劑將樹脂所吸附的離子和其他雜質洗脫除去，使之恢復原來的組成和性能。在實際運用中，為降低再生費用，要適當控制再生劑用量，使樹脂的性能恢復到最經濟合理的再生水平，通常控制性能恢復程度為70～80%。如果要達到更高的再生水平，則再生劑量要大量增加，再生劑的利用率則下降。 <br>
樹脂的再生應當根據樹脂的種類、特性，以及運行的經濟性，選擇適當的再生葯劑和工作條件。 <br>
樹脂的再生特性與它的類型和結構有密切關系。強酸性和強鹼性樹脂的再生比較困難，需用再生劑量比理論值高相當多；而弱酸性或弱鹼性樹脂則較易再生，所用再生劑量只需稍多於理論值。此外，大孔型和交聯度低的樹脂較易再生，而凝膠型和交聯度高的樹脂則要較長的再生反應時間。 <br>
再生劑的種類應根據樹脂的離子類型來選用，並適當地選擇價格較低的酸、鹼或鹽。例如：鈉型強酸性陽樹脂可用10%NaCl溶液再生，用葯量為其交換容量的2倍(用NaCl 量為117g/L樹脂)；氫型強酸性樹脂用強酸再生，用硫酸時要防止被樹脂吸附的鈣與硫酸反應生成硫酸鈣沉澱物。為此，宜先通入1～2%的稀硫酸再生。 <br>
氯型強鹼性樹脂，主要以NaCl溶液來再生，但加入少量鹼有助於將樹脂吸附的色素和有機物溶解洗出，故通常使用含10%NaCl + 0.2%NaOH的鹼鹽液再生，常規用量為每升樹脂用150～200gNaCl，及3～4gNaOH。OH型強鹼陰樹脂則用4%NaOH溶液再生。 <br>
樹脂再生時的化學反應是樹脂原先的交換吸附的逆反應。按化學反應平衡原理，提高化學反應某一方物質的濃度，可促進反應向另一方進行，故提高再生液濃度可加速再生反應，並達到較高的再生水平。 <br>
為加速再生化學反應，通常先將再生液加熱至70～80℃。它通過樹脂的流速一般為1～2BV/h。也可採用先快後慢的方法，以充分發揮再生劑的效能。再生時間約為一小時。隨後用軟水順流沖洗樹脂約一小時(水量約4BV)，待洗水排清之後，再用水反洗，至洗出液無色、無混濁為止。 <br>
一些樹脂在再生和反洗之後，要調校pH值。因為再生液常含有鹼，樹脂再生後即使經水洗，也常帶鹼性。而一些脫色樹脂(特別是弱鹼性樹脂)宜在微酸性下工作。此時可通入稀鹽酸，使樹脂pH值下降至6左右，再用水正洗，反洗各一次。 <br>
樹脂在使用較長時間後，由於它所吸附的一部分雜質(特別是大分子有機膠體物質)不易被常規的再生處理所洗脫，逐漸積累而將樹脂污染，使樹脂效能降低。此時要用特殊的方法處理。例如：陽離子樹脂受含氮的兩性化合物污染，可用4%NaOH溶液處理，將它溶解而排掉；陰離子樹脂受有機物污染，可提高鹼鹽溶液中的NaOH濃度至0.5～1.0%，以溶解有機物。 <br>
近年國內研究用糖化鈣溶液對使用過的樹脂進行再生，再生液返回生產流程再用，不需要排放。免除了再生廢液處理的問題。 <br>
（2）特殊的再生處理 <br>
污染較嚴重的樹脂，可用酸或鹼性食鹽溶液反復處理，如先用10%NaCl +1%NaOH鹼鹽溶液溶解有機物，再用4%HCl 或分別用10%NaOH 及1%HCl溶解無機物，隨後再用10%NaCl+1%NaOH處理，在約70℃下進行。 <br>
如果上述處理的效果未達要求，可用氧化法處理。即用水洗滌樹脂後，通入濃度為0.5%的次氯酸鈉溶液，控制流速2～4BV/h，通過量10～20BV，隨即用水洗滌，再用鹽水處理。應當注意，氧化處理可能將樹脂結構中的大分子的連接鍵氧化，造成樹脂的降解，膨脹度增大，容易碎裂，故不宜常用。通常使用50周期後才進行一次氧化處理。由於氯型樹脂有較強的耐氧化性，故樹脂在氧化處理前應用鹽水處理，變為氯型，這還可避免處理過程中的pH值變化，並使氧化作用比較穩定。 <br>

㈧ 離子交換層析中，為什麼用氯離子洗脫陰離子

離子交換層析中，為什麼用氯離子洗脫陰離子
陰離子交換柱的填料是正電填專料,在低鹽條件下可以屬通過電荷相互作用吸附樣品中的陰離子和負電荷物質（如DNA）.這些帶負電的物質由於其帶電量不同,分子大小不同,因而與正電填料之間的結合力也就不同.用梯度的氯離子（一般用氯化鈉梯度,例如從100mM氯化鈉線性梯度升高到1M氯化鈉）洗脫掛柱樣品時,氯離子會和結合上的物質競爭結合正電填料,伴隨著氯離子濃度的不斷升高,氯離子的競爭作用越來越強,與填料結合的物質會按照親和力從弱到強依次洗脫下來,形成獨立的洗脫峰,從而將這些物質分開.
陽離子交換柱與之正好相反,柱子填料為負電荷,用鈉離子洗脫結合的正電物質.

㈨ 離交柱陰柱難淋洗怎麼辦

陰離子交換柱的清洗方式通用有三種，分別用於清洗酸溶性、鹼溶性或有機污染物，在清洗過程中必須要確保嚴格按照清洗過程進行，否則會引起色譜柱的局部高壓而損壞色譜柱。對於有機溶劑清洗色譜柱，需要逐步減少有機溶劑的量以避免由於混合的流動相黏度的變化。

（一）選擇合適的清洗溶劑

1、對高價親水污染物：用1~3mol/l的鹽酸做淋洗液。

2、對低價親水污染物：用10倍的淋洗液。

3、有機污染物：有機污染物會引起色譜柱效降低，可以採用兼容的有機溶劑清洗，有時也可以採用高濃度的鹽酸與有機溶劑混合清洗則更有效。

4、對金屬污染物：會引起色譜峰不對稱性，可採用絡合劑酸類，如0.2mol/l草酸。

（二）清洗過程

1、配製500mL合適的清洗溶液。

2、斷開抑制器中，分別清洗保護住和分離柱，如果分離柱和保護住串聯清洗，則將保護柱接在分離柱之後。

3、設置流速對2mm色譜柱採用0.5ml/min，而對4mm色譜柱採用2ml/min。

4、用二次去離子水沖洗色譜柱15min。

5、用清洗液清洗色譜柱60min。

6、用二次去離子水沖洗色譜柱15min。

7、連接抑制器，用淋洗液平衡色譜柱。

㈩ 陰離子色譜柱的使用和保存方法

注銷過低的原因最可能的是
一、離子交換柱的配基脫落
二、使用後沒有清版洗干凈，細菌生權長，導致層析柱被污染
三、層析柱堵塞或者柱床變形
這幾個問題可單獨發生或者合並發生。不同廠家生產的層析柱使用和保持方式都有不同，建議詳細閱讀說明書，認真執行清洗，樣品也盡量干凈。