㈠ 酶解分離原生質體有哪些常用的方法
分離常用方法：分離原生質體時，首先要使酶制劑大量吸附到細胞壁上去。
因此，一般先將材料分離成單細胞，然後分解細胞壁。採用將酶液減壓滲入組織，或將組織切成薄片等方法，都可增加酶液與纖維素分子接觸的機會。用酶法分離原生質體可以採用以下兩種不同的方法路線。兩步法或順序法：首先用離析酶或果膠酶處理組織使胞間層降解，把細胞分開再用纖維素酶處理這些游離的細胞，使原生質體釋放出來。
一步法或同時法：即把一定量的纖維素酶、果膠酶和半纖維素酶組成混合酶溶液，將材料置於其中處理，一次即可得到分離的原生質體。因為一步法方便省力，因此很常用。
㈡ 提高酶含量酶酶解液會加快酶解嗎
水酶法來主要利用機械破碎的自基礎上，採用酶（蛋白酶、澱粉酶、果膠酶、維生素酶等）降低植物細胞壁使油料得以釋放
酶解提取工藝分4類：水相酶解法、水相酶解有機溶劑、低水分酶解、低水分酶解溶劑浸出提取工藝。[1]
水相酶解法
在油料破碎後加水，以水作為分解相，酶在此相中進行水解，使油脂從油料固體粒子中滲出。該工藝適用可可、菜籽、花生等含油料高的油料提取。酶的用作防止蛋白膜形成乳狀液貨親脂性固體吸附造成部分油脂難於提取。
水相酶解有機溶劑
在水相酶解提取工藝上，加入於水不相溶的有機溶劑作為油的分散相，以增加提油效果。
低水分酶解
在傳統油料種子提油基礎上改進而得到，酶解作用是在較低水分含量下進行，在提油前，油料需要進一步乾燥降低水分，由於工藝減少了有水分離工序，沒有廢水生產。
低水分酶解溶劑浸出
溶劑在酶解後加入與酶解前加入相比，有的出油率要高一些，但由於水分低也帶來了一些困難，酶的作用效果會降低，但該工藝縮短了提油時間，從而提高設備處理能力。
㈢ 酶解發酵濾液FTLAT是什麼
酶解發酵濾液，英文全稱是ferment filtrate，一般叫它簡稱FTLAT。酶解發酵濾液FTLAT中含有豐富的超級肽SMPPT（small molecule peptide）以及大分子蛋白質、酶類、礦物質、維生素等營養物質，是一種益膚活性物質。而百事花旗充分利用了酶解發酵濾液FTLAT中的豐富活性SMPPT研製了一款專注頭皮護理的洗發水。
㈣ 什麼是蛋白質酶解液
可以分解相應蛋白質的溶液就是該蛋白質的酶解液。
㈤ 發酵液過濾的方法有哪些
發酵工業來中用於改善發源酵液過濾性能的方法通常有：等電點、
蛋白
質變性、吸附、凝聚和絮凝、加入助濾劑、直接在發酵液中形成填充-凝固劑、酶解作用。
（1）過濾助劑
助濾劑是一種不可壓縮的多孔微粒，它能使濾餅疏鬆，濾速增大。
㈥ 用干魚皮作為原料進行酶解時，酶解液呈乳濁狀，如何使之澄清
用有機溶劑抽提一下，應該可以去除脂類物質。比如氯仿之類。
㈦ 酶解法原理
（1）實驗過程中，需要輕搖試管，以使細胞壁與酶充分接觸，提高酶解效果．
（2）蝸牛以植物為食，所以唾液中含有果膠酶和纖維素酶，I、Ⅱ、Ⅲ沒有添加酶溶液為空白對照組．其目的是排除無關變數的干擾．
（3）離心後收集沉澱物，並用等滲溶液清洗，目的是保持細胞正常形態．
（4）要用低滲漲破法來檢驗原生質體是否符合要求，若沒有細胞壁則可以漲破，有則不能漲破．
故答案為：
（1）為了使細胞壁與酶充分接觸，提高酶解效果
（2）果膠酶和纖維素酶 I、Ⅱ、Ⅲ排除無關變數的干擾
（3）等滲溶液
（4）低滲漲破法
㈧ 酶解法去除植物細胞壁的具體步驟
要分離植物原生質體，必須去掉由果膠質、纖維素和半纖維素及木質素等構成的細胞壁。在本世紀前期是採用分離機械法。即將葉肉細胞，愈傷組織和液體懸浮培養細胞置於高滲的糖溶液中，使之質壁分離，原生質體收縮成球形。然後用剪刀剪碎組織，就可切開細胞壁獲得少量完整的原生質體。不過這種方法分離的原生質體太少，而且只能適於部分組織，Cocking發明的酶解法，開創了大量分離原生質體的新技術，所以目前普遍採用酶分離法來獲得原生質體。一、植物材料一般來說，植物各個器官，如：根、莖卅、花、果實、種子及愈傷細胞和懸浮細胞等都可作為分離原生質體的材料。但是，要獲得高質量的原生質體，則須選用生長旺盛、生命力強的組織作材料。材料的生理狀況是原生質體質量的決定性因素之一。1．細胞懸浮培養物在建立細胞懸浮培養物之前，需提前培養愈傷組織。即取用成熟種子胚、未成熟胚、幼穗、花葯、胚芽鞘或幼葉，經無菌消毒後，在26℃黑暗條件下，在含2，4－ D 2～4mg/L的 MS固體培養基上，誘導愈傷組織，每隔2～4d轉接一次。從中選出增殖較快而且呈顆粒狀的愈傷組織，或經繼代培養一次後，轉移到液體培養基的100ml三角瓶中進行懸浮培養。具體方法是用旋轉式振盪器，速度控制在80～? 120r/min，在 25±1℃下暗培養。懸浮培養初期應每隔3d繼代一次，一個半月後，吸取4～5ml懸浮細胞轉到250ml三角瓶的40rnl新鮮培養中，以後每隔7d繼代一次。通常經懸浮培養3～4月後，懸浮培養細胞的大小變得較為一致，且細胞質變得較濃時，可用作分離原生質體。2．葉肉細胞葉肉細胞是分離原生質體的最好的細胞材料，用葉片的薄壁組織作為材料來源，既要考慮植株的生長環境，又要考慮葉片的年齡及其生理狀態對原生質體分離的影響。取生理狀態適宜的葉片，有利於原生質體的細胞再生和細胞分裂。要獲得良好的培養? 材料，下列外界因素是考慮的重要因子：（1）光強為3000～6000lx。（2）溫度為20～25℃培養。（3）相對濕度在60％～80％左右。植物的其他器官也可用於分離原生質體，如用花粉四分體和花粉壁細胞。? 3．植物材料的預處理對原生質體材料進行預處理能提高原生質體的分裂頻率；也可以逐步提高植物材料的滲透壓，以適應培養基中的高滲環境。這些處理包括：暗處理。預培養、低溫處理等。把豌豆的枝條取下後，在分離原生質體前，先讓材料在黑暗中的一定濕度條件下放1～2d，這樣得到的原生質體存活率高，並能繼續分裂；在羽衣甘藍葉肉組織原生質體分離和培養中，先去掉葉片的下表皮，再在誘導愈傷組織的培養基中預培養7d，然後再去壁。經預培養的葉片分離的原生質體高度液泡化，葉綠體也解體；龍膽試管苗的葉片只有用4CC低溫處理後分離得到的原生質體才能分裂。在很多情況下材料不必經過專門的預處理。二、酶1．酶的種類構成植物細胞壁的三個主要成分是：①纖維素，占細胞壁乾重的25 ％至50％不等；②半纖維素，平均約占細胞壁乾重的53％左右；③果膠質，一般占細胞壁的5％。分離原生質體最常用的酶有纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶。纖維素酶是從綠色木霉中提取的一種復合酶制劑，主要含有纖維素酶C；，作用於天然的和結晶的纖維素，具有分解天然纖維素的作用，還含纖維素酶CX，作用於定形的纖維素，可分解短鏈纖維素，另含有纖維素二糖酶、木聚糖酶、萄聚糖酶、果膠酶、脂肪酶、磷脂酶、核酸酶、溶菌酶等，總體作用是降解纖維素，得到裸露的原生質體。果膠酶是從根霉中提取的，使細胞間的果膠質降解，把細胞從組織內分離出來。半纖維素酶制劑可以降解半纖維素為單糖或單糖衍生物。此外，還有蝸牛酶，主要用於花粉母細胞和四分體細胞。ZA3～867纖維酶是上海植物生理研究所從野生型綠色木霉同各菌種中提取製成的，粗製品是多種酶的復合物，含有纖維素酶（包括C1、CX、B一葡萄糖苷酶等），果膠質，半纖維素酶等，分離細胞壁的效果較好。這種復合酶使用時不需加半纖維素酶和果膠酶等，就可以分離出植物原生質體。日本產的Onozuka纖維素酶常和果膠酶結合使用，可先用果膠酶降解果膠，使分開細胞，再用纖維素酶處理降解細胞壁。即二步法降解。2．滲透穩定劑植物細胞壁對細胞有良好的保護作用。去除細胞壁之後如果溶液中的滲透壓和細胞內的滲透壓不同，原生質體有可能漲破或收縮。因此在酶液、洗液和培養液中滲透壓應大致和原生質體內的相同，或者比細胞內滲透壓略大些。滲透壓大些有利於原生質體的穩定，但也有可能阻礙原生質體的分裂。因此，在分離原生質體的酶溶液內，需加入一定量的滲透穩定劑，其作用是保持原生質體膜的穩定，避免破裂。常用的兩種系統為：①糖溶液系統：包括甘露醇、山梨醇、蔗糖和葡萄糖等，濃度約在0．40～0．80mol／L。本系統還可促進分離的原生質體再生細胞壁並繼續分裂；②鹽溶液系統：包括 KCL、MgSO4和 KH2PO4等。其優點是獲得的原生質體不受生理狀態的影響，因而材料不必在嚴格的控制條件下栽培，不受植株年齡的影響，使某些酶有較大的活性使原生質體穩定。另外，添加牛血清蛋白可減少或防止降解壁過程中對細胞器的破壞。近年來多採用在鹽溶液內進行原生質體分離，然後再用糖溶液作滲透穩定劑的培養基中培養。此外，酶溶液里還可加入適量的葡聚糖硫酸鉀，它可提高原生質體的穩定性。這種物質可使RNA酶不活化，並使離子穩定。3．酶溶液的pH值酶溶液的pH值對原生質體的產量和生活力影響很大。用菜豆葉片作培養材料時，發現原始pH值為5．0時，原生質體產生一得很快，但損壞較嚴重，並且培養後大量破裂。當PH值提高到6．0時，最初原生質體卻產生少，但與pH值為5．0時處理同樣時間後相比，原生質體數量顯著增加。原始pH值提高到7．0時生活的原生質體數量進一步增加，損傷的原生質體也少得多。三、原生質體的分離分離原生質體時，首先要讓酶制劑大量地吸附到細胞壁的纖維素上去，因此，一般先將材料分離成單細胞，然後分解細胞壁。採用將酶液減壓滲入組織，或將組織切成薄片等方法，都可增加酶液與纖維素分子接觸的機會。酶處理目前常用的多是「一步法」，即把一定量的纖維素酶，果膠酶和半纖維素酶組成混合酶溶液，材料在其中處理一次即可得到分離的原生質體。植物材料須按比例和酶液混合才能有效地游離原生質體，一般去表皮的葉片需酶量較少，而懸浮細胞則用酶量較大。每克材料用酶液10～30ml不等。由於不同材料的生理特點不同，在研究游離條件時，必須試驗不同滲透壓濃度的細胞，找出適宜的滲透濃度。例如，游離小麥是浮細胞的原生質體的酶液中須加入0．55mol/L甘露醇，游離水稻懸浮細胞的原生質體的酶液中只加 0．4～0．45mol／L的甘露醇，兩者差別較大。酶解處理時把滅菌的葉片或子葉等材料下表皮撕掉，將去表皮的一面朝下放入酶液中。去表皮的方法是：在無菌條件下將葉面晾乾、順葉脈輕輕撕下表皮。如果去表皮很困難，也可直接將材料切成小細條，放入酶液中。對於懸浮細胞等材料，如果細胞團的大小很不均一，在酶解前最好先用尼龍網篩過濾一次，將原細胞團去掉，留下較均勻的小細胞團時再進行酶解。酶解處理一般地在黑暗中靜止進行，在處理過程中偶爾輕輕搖晃幾下。對於懸浮細胞，愈傷組織等難游離原生質體的材料，可置於搖床上，低速振盪以促進酶解。酶解時間幾小時至幾十小時不等、以原生質體游離下來為准。但是，時間過長對原生質體有害，所以一般不應超過24h。酶解溫度要從原生質體和酶的活性兩方面考慮。對於這幾種酶來說，最佳處理溫度在40～50℃，但這個溫度對植物細胞來說太高，所以一般都在25℃ 左右進行酶解。若用葉片作為材料，取已展開的生活葉片，用0.53％次氨酸鈉和70％酒精進行表面滅菌，然後切成2cm見方。把 4g葉組織置於含有 200ml不加蔗糖和瓊脂的培養基 500ml三角瓶中。在 4℃黑暗條件下培養16～24h，以後葉片轉入含有纖維素酶、果膠酶、無機鹽和緩沖液的混合液中，pH值為5．6，通常在酶液中使用的等滲劑為0．55～0．6mol甘露醇。然後，酶液真空滲入葉片組織。在28℃條件下，每分鍾40轉的旋轉式轉床上培養4h後，葉片組織可完全分離。若用懸浮培養細胞，可不經過果膠酶處理，因為懸浮細胞液主要由單細胞和小細胞團組成。取懸浮細胞放入10ml的酶液中（3％纖維素酶，14％蔗糖，pH值5．0～6．0），在25～33℃條件下酶解24h。原生質體一酶混合液用30um的尼龍網過濾，通過低速離心收集原生質體。四、影響原生質體分離的因素1．酶制劑活力和純度粗製的商品酶含有核酸酶和蛋白酶等雜質，它們對原生質體的活力是有害的。因此，在使用之前須將這些酶純化，一般利用凝膠柱使酶制劑脫鹽純化。酶的活性還與pH值有關。Onoznka纖維素酶R－10和離析酶R一10的最適宜pH值分別為5～6和4～5。不過實際上酶溶液的pH值經常調節4．7～6．0之間。2．滲透穩定劑的作用在分離原生質體時，滲透穩定劑有保護原生質體結構及其活力的作用。糖溶液系統可使分離的原生質體能再生細胞壁，並使之能繼續分裂，其缺點是有抑制某些多糖降解酶的作用。鹽溶液系作滲透穩定劑時對材料要求較嚴格，且使原生質體穩定，使某些酶有較大活性。但是易使原生質體形成假壁，同時使分裂後細胞是分散的。五、原生質體的凈化和活力測定在分離的原生質體中，常常混雜有亞細胞碎片，維管束成分，未解離細胞，破碎的原生質體以及微生物等。這些混雜物的存在會對原生質體產生不良影響。此外，還需去掉酶溶液。以凈化原生質體。原生質體純化常用過濾和離心相結合的方法，步驟大致如下：1．將原生質體混合液經篩孔大小為40－100um的濾網過濾，以除去未消化的細胞團塊和篩管、導管等雜質，收集濾液。2．將收集到的濾液離心，轉速以將原生質體沉澱而碎片等仍懸浮在上清液中為准，一般以500r／min離心15min。用吸管謹慎地吸會上清液。3．將離心下來的原生質體重新懸浮在洗液中（除不含酶外，其他成分和酶液相同），再次離心，去上清液，如此重復三次。4．用培養基清洗一次，最後用培養基將原生質調到一定密度進行培養。一般原生質體的培養密度為104～106／ml。在原生質體培養前，常常先對原生質體的活性進行檢測。測定原生質體活性有多種方法，如觀察胞質環流、活性染料染色、熒光素雙醋酸酯（FDA）染色等。這些方法各有特點，但現在一般用的是FDA染色法。FDA本身無熒光，無極性，可透過完整的原生質體膜。一旦進入原生質體後，由於受到脂酶分解而產生有熒光的極性物質熒光素。它不能自由出太原生質體膜，因此有活力的細胞便產生榮光，而無活力的原生質體不能分解FDA，因此無熒光產生。FDA染色測活性的方法如下：取洗滌過的原生質體懸浮液 0．5ml，置於10×100mm的小試管中，加入 FDA溶液使其最終濃度為 0．01％，混勻、置於室溫5min後用熒光顯微鏡觀察。激發光濾光片用QB24，壓制濾光片用JB8。發綠色熒光的原生質體為有活力的，不產生榮光的為無活力的。由於葉綠素的關系，葉肉原生質發黃綠色熒光的為有活力的，發紅色熒光的為無活力的。
參考資料： 網路
㈨ 發酵液過濾如何操作，有哪些方法
發酵工業中用於改善發酵液過濾性能的方法通常有：等電點、蛋白質變性、吸附、凝聚和絮凝、加入助濾劑、直接在發酵液中形成填充-凝固劑、酶解作用。
（1）過濾助劑
助濾劑是一種不可壓縮的多孔微粒，它能使濾餅疏鬆，濾速增大。
過濾助劑可解決兩個問題
①濾餅的可壓縮性問題
②小粒子如菌絲碎片和細菌細胞，會滲入到轉鼓真空過濾預覆蓋層內部。使得預覆蓋層的部分孔被堵塞，影響了滲透性。加入助濾劑可以解決這一問題
常用的過濾助劑有：硅藻土、珍珠岩、磨碎的木漿、澱粉
助濾劑的加入有兩種方法：
①在濾布上預先鋪一層助濾劑(1~2mm)，該方法，會使濾速降低，但濾液透明度
②直接加入發酵液中（助濾劑的用量，有一條經驗規則可供參考，即助濾劑用量若等於懸浮液中固體含量時，濾速最快。）。
（2）填充-凝固劑
改善過濾性能較好的方法是加入一些反應劑，它們能相互作用，或和某些溶解性鹽類發生反應生成不溶解的沉澱(CaSO4，AlPO4等)。生成的沉澱能防止菌絲體粘結，使菌絲具有塊狀結構，沉澱本身即可作為助濾劑，並且還能使膠狀物和懸浮物凝固，如新生黴素發酵液中加入氯化鈣和磷酸鈉，生成的磷酸鈣可作為填充-凝固劑。一方面作為助濾劑，另一方面還可使某些蛋白質凝固。又如環絲氨酸發酵液用氧化鈣和磷酸處理，生成的磷酸鈣沉澱，能使懸浮物凝固。多餘的磷酸根離子，還能除去鈣、鎂離子。並且在發酵液中不會引入其它陽離子而影環環絲氨酸的離子交換吸附。正確選擇反應劑和反應條件，能使過濾速度提高3~10倍。
（3）酶解作用
如發酵液中有不溶解的多糖存在則最好用酶將它轉化為單糖，以提高過濾速度。例如萬古黴素用澱粉作培養基，加入澱粉酶後，能使過濾速度加快。
㈩ 酶解分離原生質體有哪些步驟
分離步驟：程序為：葉片表面消毒→去除表皮→葉碎片漂浮在含有酶和滲透壓穩定劑的溶液中→培育→原生質體沉到培養皿底部→除去酶溶液→將原生質體移入CPW液中清洗→離心→基質清洗兩次→重懸浮於培養基→血球計計數→調整到合適的密度重懸浮於培養基。