薄膜過濾1000ml

① 什麼叫薄膜過濾法，具體怎麼操作呀

5.7.7 薄膜過濾法：
5.7.7.1 本法適用於有抗菌作用或大容量的供試品。
5.7.7.2 按集菌使內用規程安裝好集菌儀。
5.7.7.3 取供試品擦拭消容毒後，除去塑料蓋，插好導管，進行抽濾，濾液從排液管排出。
5.7.7.4 同法操作將培養基抽到全封閉式集菌培養器中。
5.7.7.5 取需氣菌、厭氣菌培養基和真菌培養基各1管，同法操作加入相應的溶劑作陰性對照。
5.7.7.6 陽性對照管應根據供試品特性在接種櫥內加入相應對照菌液1ml。（抗細菌葯物以金黃色葡萄球菌為對照菌，抗厭氧菌葯物以生孢梭菌為對照菌，抗真菌葯物以白色念珠菌為對照菌）。
5.7.7.7 需氣菌、厭氣菌培養基管置30-35℃培養箱中，真菌培養基管置20-25℃培養箱中各培養7日；陽性對照管細菌應在培養24-48小時，真菌應在培養24-72小時有菌生長。

② 葯品領域的微生物檢測及標准

中國葯典微生物限度檢查法，為《中國葯典》附錄收載的關於葯品微生物檢查的法定方法。葯品的不同劑型的微生物檢測標准不同，具體如下：

1、制劑通則品種

制劑通則、品種項下要求無菌的制劑及標示無菌的制劑應符合無菌檢查法規定。

2、口服給葯制劑

細菌數每1g不得過l000cfu。每lml不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每lg或lml不得過100cfu。

大腸埃希菌每1g或lml不得檢出。

3、耳、鼻及呼吸道吸入給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²，不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g、lml或l0cm²，不得過10cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每1g、lml或l0cm²不得檢出。

大腸埃希菌鼻及呼吸道給葯的制劑，每1g、lml或l0cm²，不得檢出。

4、陰道、尿道給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²，不得過100cfu。

黴菌數和酵母菌數每1g、lml或l0cm²應小於10cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌每1g、lml或l0cm²，不得檢出。

5、直腸給葯制劑

細菌數每1g不得過l000cfu。每lml不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g或lml不得過100cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每lg或lml不得檢出。

6、其他局部給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g、lml或l0cm²不得過100cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每1g、lml或l0cm²不得檢出。

7、含動物組織

含動物組織（包括提取物）的口服給葯制劑每10g或10ml還不得檢出沙門菌。

8、兼用途徑制劑

應符合各給葯途徑的標准。

(2)薄膜過濾1000ml擴展閱讀

微生物限度檢查法的注意事項：

1、當建立產品的微生物限度檢查法時，應進行控制菌檢查方法的驗證，以確認所採用的方法適合於該產品的控制菌檢查。若產品的組分或原檢驗條件發生改變可能影響檢驗結果時，檢查方法應重新驗證。

2、檢查項目應當包括細菌數、黴菌數、酵母菌數及控制菌檢查。

3、微生物限度檢查應在環境潔凈度10000 級下的局部潔凈度100 級的單向流空氣區域內進行。

4、檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染。單向流空氣區域、工作檯面及環境應定期按《醫葯工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標准進行潔凈度驗證。

5、除另有規定外，本檢查法中細菌及控制菌培養溫度為30℃～35℃；黴菌、酵母菌培養溫度為23℃～28℃。

6、檢驗結果以1g、1ml、10g、10ml、10c㎡ 為單位報告，特殊品種可以最小包裝單位報告。

③ 阿洛西林鈉的中國葯典2010版阿洛西林鈉

阿洛西林鈉
Aluoxilinna
Azlocillin Sodium
C20H22N5NaO6S 483.47
該品為（2S，5R，6R)-3，3-二甲基-6-[(R)-2-（2-氧代-1-咪唑烷甲醯氨基）-2-苯乙醯氨基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環[3，2，0]庚烷-2-甲酸鈉鹽。按無水物計算，含C20H23N5O6S不得少於90.0%。
【性狀】該品為白色或類白色粉末或疏鬆塊狀物；無臭，味微苦，有引濕性。
該品在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙酸乙酯或丙酮中不溶。
比旋度取該品，精密稱定，加水溶解並定量稀釋成每1ml中含10mg的溶液，依法測定（附錄ⅥE），比旋度為+170°至+200°。
【鑒別】⑴在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。
⑵該品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜（光譜集773圖）一致。
⑶該品顯鈉鹽的火焰反應（附錄Ⅲ）。
【檢查】酸鹼度取該品，加水製成每1ml中含0.1g的溶液，依法測定（附錄ⅥH），pH值應為6.0～8.0。
溶液的澄清度與顏色取該品5份，各0.56g，分別加水5ml溶解後立即觀察，溶液應澄清無色；如顯渾濁，與1號濁度標准液（附錄ⅨB）比較，均不得更濃；如顯色，與黃色或黃綠色3號標准比色液（附錄ⅨA 第一法）比較，均不得更深。
有關物質取該品適量，精密稱定，用流動相溶解並稀釋成每1ml中約含阿洛西林0.5mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，用流動相定量稀釋製成每1ml中含阿洛西林10μg的溶液，作為對照溶液。照含量測定項下的色譜條件，量取對照溶液20μl注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的20%～25%；再精密量取供試品溶液與對照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，單個雜質峰面積不得大於對照溶液主峰面積的3/4（1.5%），各雜質峰面積的和不得大於對照溶液主峰面積的1.5倍（3.0%）。
阿洛西林聚合物照分子排阻色譜法（附錄VH）測定。
色譜條件與系統適用性試驗 用葡聚糖凝膠G-10（40～120μm）為填充劑，玻璃柱（1.0cm× 30cm），流動相A為pH7.0的0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（取0.05mol/L磷酸氫二鈉61ml和0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液39ml，混合均勻，濾過）。流動相B為水，流速每分鍾1.5ml，檢測波長為254nm，量取0.2mg/ml藍色葡聚糖2000溶液100μl，注入液相色譜儀，分別以流動相A，B進行測定，記錄色譜圖。按藍色葡聚糖2000峰計算理論板數均不低於500，拖尾因子均應小於2.0。在兩種流動相系統中藍色葡聚糖2000峰的保留時間比值應在0.93～1.07之間，對照溶液主峰與供試品溶液中聚合物峰與相應色譜系統中藍色葡聚糖2000峰的保留時間的比值均應在0.93～1.07之間。稱取阿洛西林鈉約0.4g置10ml量瓶中，用0.04mg/ml的藍色葡聚糖2000溶液溶解並稀釋至刻度，搖勻。量取100μl注入液相色譜儀，用流動相A進行測定，記錄色譜圖。高聚體的峰高與單體與高聚體之間的谷高比應大於2.0。另以流動相B為流動相，精密量取對照溶液100μl，連續進樣5次，峰面積的相對標准偏差應不大於5.0%。
對照溶液的制備 取阿洛西林對照品適量，精密稱定，加0.5%碳酸氫鈉溶液適量（每6.25mg約加0.5%碳酸氫鈉溶液1ml）使溶解，再加水溶解並定量製成每1ml中約含阿洛西林50µg的溶液。
測定法 取該品約0.3g，置10ml量瓶中，加水適量，使溶解後，用水稀釋至刻度，搖勻。立即精密量取100μl注入液相色譜儀。以流動相A為流動相進行測定，記錄色譜圖。另精密量取對照溶液100μl注入液相色譜儀，以流動相B為流動相進行測定，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，含阿洛西林聚合物以阿洛西林計不得過0.30%。
殘留溶劑 照殘留溶劑測定法（附錄Ⅷ P）測定。
色譜條件與系統適用性試驗以100%聚二甲基硅氧烷為固定液（或固定液極性相近）的毛細管柱為色譜柱，柱溫：程序升溫，30℃維持7分鍾，以每分鍾50℃升溫至180℃，維持5分鍾。氫火焰離子化檢測器（FID），檢測器溫度為250℃，進樣口溫度為200℃，頂空溫度為85℃，頂空時間為30分鍾，進樣針溫度為100℃，傳輸線溫度105℃，載氣為氮氣。取對照品溶液頂空進樣，按乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、丁酮（內標）和乙酸乙酯順序出峰，各成分峰之間的分離度均應符合要求。
內標溶液的制備取丁酮適量，用無有機溶劑的水稀釋成每1ml中約含250µg的溶液，作為內標溶液。
系統適用性溶液的制備取對照品溶液，量取5.0ml置頂空瓶中，密封瓶口，作為系統適用性溶液。
供試品溶液的制備取供試品約0.5g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入內標溶液5ml使溶解，密封瓶口，作為供試品溶液.
對照品溶液的制備分別精密稱取二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇與異丙醇各適量，用內標溶液定量稀釋成規定濃度的溶液，作為混合對照品儲備液，混合對照品儲備液中各溶劑的濃度分別為每1ml中含二氯甲烷60mg、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇各0.5mg。精密量取混合對照儲備液5ml，置頂空瓶中，密封瓶口，作為對照品溶液。
測定法分別取供試品溶液與對照品溶液頂空進樣，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，應符合規定。
水分取該品，照水分測定法（附錄ⅧM 第一法A）測定，含水分不得過2.0%。
異常毒性取該品，加滅菌注射用水製成每1ml中含60mg的溶液，依法檢查（附錄ⅪC），按靜脈注射法給葯，應符合規定。
細菌內毒素取該品，依法檢查（附錄ⅪE），每1mg阿洛西林中含內毒素的量應小於0.07EU。
無菌取該品，加0.9%無菌氯化鈉溶液使溶解（溶液濃度：0.01g/ml），用薄膜過濾法處理，沖洗液用量不少於1000ml/膜，分次沖洗後，在硫乙醇酸鹽流體培養基管中加入1mlβ-內醯胺酶，依法檢查（附錄ⅪH），應符合規定。
可見異物取該品5份，各0.56g，分別加不溶性微粒檢查用水5ml，使溶解，依法測定，應符合規定。
【含量測定】照高效液相色譜法（附錄ⅤD）測定。
色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（取無水磷酸氫二鉀4.09g與磷酸二氫鉀0.58g，加水溶解並稀釋至1000ml)-乙腈（85:15）為流動相；檢測波長為210nm。分別稱取氨苄西林對照品和阿洛西林對照品適量，加0.5%碳酸氫鈉溶液適量（每6.25mg阿洛西林約加0.5%碳酸氫鈉溶液1ml）助溶後用流動相溶解並製成每1ml中約含氨苄西林6μg和阿洛西林5μg的混合溶液，量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。氨苄西林峰與阿洛西林峰的分離度應大於10.0。理論板數按阿洛西林峰計算不低於1500，阿洛西林峰與相鄰雜質峰的分離度應符合規定。
測定法取該品適量，精密稱定，加流動相溶解並定量稀釋成每1ml中含阿洛西林0.25mg的溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿洛西林對照品適量，精密稱定，加0.5%碳酸氫鈉溶液適量（每6.25mg約加0.5%碳酸氫鈉溶液1ml）助溶後，同法測定，按外標法以峰面積計算供試品中C20H23N5O6S的含量。
【類別】β-內醯胺類抗生素，青黴素類。
【貯藏】密封，在乾燥處保存。
【制劑】注射用阿洛西林鈉。

④ 凈水器凈化出來的水達到什麼標准呢

還是要看濾芯。但是要能直飲，就必須達到國家飲用水標准。

⑤ 純化水微生物限度中用薄膜過濾法檢測是不是必須用稀釋液即稀釋液-氯化鈉蛋白腖緩沖液。

是的。我們實驗過程中用PH7.0氯化鈉蛋白腖緩沖溶液做稀釋劑的，也可以用生理鹽水做版稀釋劑。在實驗過程中每權張過濾膜不可超過1000ml的稀釋劑沖洗量。將純水倒入薄膜過濾後，在放入培養皿里之前，還需要加緩沖液沖洗薄膜，沖洗量可以每張膜控制在100-200ml。然後用無菌鑷子取出過濾膜，貼於培養基上，去除氣泡。

⑥ 砂當量試驗購買的高濃度沖洗液怎麼稀釋

是的。我們實驗過程中用PH7.0氯化鈉蛋白腖緩沖溶液做稀釋劑的，也可以用生理鹽水做稀釋劑。在實驗過程中每張過濾膜不可超過1000ml的稀釋劑沖洗量。將純水倒入薄膜過濾後，在放入培養皿里之前，還需要加緩沖液沖洗薄膜，沖洗量可以每張膜控制在100-200ml。然後用無菌鑷子取出過濾膜，貼於培養基上，去除氣泡。

⑦ 硫酸黏菌素的中國葯典

硫酸多黏菌素E
書頁號：中國葯典2005年版二部p729
[修訂]
無菌 取本品，加 0.9%無菌氯化鈉溶液使溶解（溶液濃度以多粘菌素計為1.5萬單位/ml），用薄膜過濾法處理，沖洗液用量每膜不少於1000ml，分次沖洗後，以大腸埃希菌為陽性對照菌，依法檢查（附錄Ⅺ H），應符合規定（供注射用）。
【含量測定】 精密稱取本品適量，加 pH6.0磷酸鹽緩沖液溶解並定量稀釋製成高低劑量分別為每1ml中約含4000單位及2000單位的供試品溶液，照抗生素微生物檢定法（附錄ⅪA）測定。檢定菌為大腸埃希菌CMCC(B)44103；培養基為營養瓊脂培養基，調節pH值使滅菌後為6.5～6.6；緩沖液為pH6.0磷酸鹽緩沖液；培養溫度為35～37℃，培養時間為16～18小時。 1萬多黏菌素單位相當於1mg多黏菌素B。
【制劑】 （1）注射用硫酸多黏菌素B （2）復方多黏菌素B軟膏
[增訂]
【鑒別】 （2）在硫酸多黏菌素B組分測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液四個主組分峰的保留時間應與標准品溶液(a)四個主組分峰的保留時間一致。
【檢查】 硫酸多黏菌素B組分 照高效液相色譜法（附錄ⅤD）測定。
色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠（5μm）為填充劑（色譜柱的尺寸為250×4.6mm），以硫酸鈉溶液（取4.46g無水硫酸鈉溶解在900ml水中，用稀磷酸調節pH值為2.3後用水稀釋到1000ml）－乙腈（80：20）為流動相；流速為每分鍾1ml；柱溫30℃；檢測波長為215nm。取對照溶液(a) 20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖,多黏菌素B1的保留時間約為35分鍾，多黏菌素B2、多黏菌素B3、多黏菌素B1-I與多黏菌素B1的相對保留時間分別約為0.5、0.55、0.8，多黏菌素B2和多黏菌素B3色譜峰間的分離度應不小於3.0。
測定法 取本品50mg，精密稱定，用乙腈-水溶液（20:80）溶解，並定量稀釋至100ml，作為供試品溶液。另精密稱取硫酸多黏菌素B標准品50mg，用乙腈－水溶液（20:80）溶解並定量稀釋至100ml，作為標准品溶液(a)；取1.0ml標准品溶液(a)，置100ml量瓶中，用乙腈－水溶液（20:80）稀釋至刻度，搖勻，作為標准品溶液(b)。分別取上述三種溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至最大組分多黏菌素B1峰保留時間的1.4倍。量取多黏菌素B2、多黏菌素B3、多黏菌素B1-I與多黏菌素B1的峰面積，按下式，按乾燥品計算，多黏菌素B3的含量不得過6.0%，多黏菌素B1-I的含量不得過15.0%，多黏菌素B1,B2,B3和B1-I的總含量不得少於80%。
式中：
CBi = 多黏菌素 Bi的百分含量；
ABi = 供試品溶液中多黏菌素Bi在色譜圖中的峰面積；
m1 = 供試品溶液中被檢測物的重量（mg），按乾燥品計；
BBi = 標准品溶液(a)中多黏菌素Bi在色譜圖中的峰面積；
m2 = 標准品溶液(a)中硫酸多黏菌素B的重量（mg）；
DBi = 多黏菌素Bi在硫酸多黏菌素B標准品中的標示百分含量。
有關物質 多黏菌素組分測定項下供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰，按面積歸一化法計算，單個雜質不得過3.0%，雜質總量不得過17.0%（供試品溶液中任何小於標准品溶液（b）主峰面積0.7倍的峰可忽略不計）。
硫酸鹽 取本品約0.250g，精密稱定，加水100ml使溶解，用濃氨溶液調節pH值至11，精密加氯化鋇滴定液(0.1 mol/L)10ml及酞紫指示液5滴，用乙二胺四乙酸二鈉滴定液(0.05mol/L)滴定，注意保持滴定過程中的pH值為11，滴定至紫色開始消退，加乙醇50ml，繼續滴定至紫藍色消失，並將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml氯化鋇滴定液(0.1mol/L)相當於9.606mg硫酸鹽（SO4）。本品含硫酸鹽按無水物計算應為15.5%～17.5%。
重金屬 取熾灼殘渣檢查下遺留的殘渣，依法檢查（附錄Ⅷ H 第二法），含重金屬不得過百萬分之二十。
微生物限度 取供試品10g，加無菌pH7.0氯化鈉－蛋白腖緩沖液至100ml，反復振搖，得到供試品溶液。細菌數、黴菌數和酵母菌數：取供試品溶液10ml，依法檢查（附錄ⅪJ 薄膜過濾法），以無菌pH7.0氯化鈉－蛋白腖緩沖液為沖洗液，每膜沖洗1000ml，並大腸埃希菌[CMCC(B) 4]為陽性對照，應符合規定。控制菌：分別取供試品溶液10ml，按菌落計數項下方法，用薄膜過濾法處理，依法檢查（附錄ⅪJ 薄膜過濾法），應符合規定（供外用制劑用）。

⑧ 復方氨酚烷胺片的微生物限度檢查採用薄膜過濾法如何操作可以順利濾過

1. 設備、儀器
1.1 無菌室 微生物限度檢查應有單獨的無菌室，每個無菌室應有獨立的凈化空氣系統。
1.1.1 操作間 操作間應安裝空氣除菌過濾層流裝置。環境潔凈度不應低於10000級，局部潔凈度為100級（或放置同等級凈化工作台）。操作間或凈化工作台的潔凈空氣應保持對環境形成正壓，不低於4.9Pa。操作台上備有電子天平，乙醇燈，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳頭等。
1.1.2 緩沖間 緩沖間內應有洗手盆，無菌衣、帽、口罩、拖鞋等。緩沖間內不得放置培養箱和其他雜物。
1.1.3 在每次操作前、後，用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然後啟動層流凈化裝置，同時用紫外殺菌燈照射30min。
1.1.4 無菌室操作台消毒擦拭後，先啟動層流凈化裝置30min，將備妥的營養瓊脂平板3個（經30～350C預培養48h，證明無菌落生長），以無菌方式移入操作間，置凈化台左、中、右各1個，開蓋，暴露30min後將蓋蓋上。在30～350C培養箱內倒置培養48h，取出檢查。3個平板生長的平均菌落數不超過1個。
1.2 儀器
1.2.1 恆溫培養箱（30～350C）、生化培養箱（23～280C）、電冰箱、蒸汽滅菌器。
1.2.2 玻璃器皿 燒杯、培養皿、量筒、試管及塞、吸管。玻璃器皿用前應洗滌干凈，吸管、量筒不掛水滴，無殘留抗菌物質。玻璃器皿均應用牛皮紙（或雙層報紙）嚴密包裹置蒸汽滅菌器高壓蒸汽121℃滅菌30min，烘乾。或於160℃乾熱滅菌2h，備用。
2 培養基及其制備方法
2.1 營養瓊脂培養基：取營養瓊脂培養基34g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，121℃高壓滅菌15分鍾。
2.2 玫瑰紅鈉瓊脂培養基：取玫瑰紅鈉瓊脂培養基30.5g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，121℃高壓滅菌15分鍾。
2.3 膽鹽乳糖培養基：取膽鹽乳糖培養基36g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，121℃高壓滅菌15分鍾。
3 稀釋劑
3.1 0.9%無菌氯化鈉溶液：取氯化鈉9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃滅菌20分鍾。
3.2 PH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液：取磷酸二氫鉀3.56g，磷酸氫二鈉7.23g，氯化鈉4.30g，蛋白腖1.0g，加水1000ml，微溫溶解，分裝，過濾，滅菌。
4 供試液的制備
4.1 取供試品10g，加經乾熱滅菌的5%吐溫-80 0.2ml，加PH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液稀釋至100ml，邊加邊振搖使成混懸液，靜止5分鍾使分層，傾取上清液置離心機中500r/min離心5分鍾，取上清液作為供試品溶液。
5 檢查方法
採用薄膜過濾法，濾膜孔徑為0.45um，直徑為50mm。濾膜及濾器在使用前採用121℃高壓滅菌30鍾。試驗過程中，應保持濾膜前後的完整性。將制備好的供試液過濾，然後用100mlPH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液（注意保持供試品溶液覆蓋整個濾膜表面）。沖洗後，用鑷子取出濾膜，菌面朝上貼於營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板上培養。細菌於30～35℃培養48小時，黴菌於23～28℃培養72小時。

⑨ 薄膜過濾法原理

薄膜過濾法

採用薄膜過濾法，濾膜孔徑不大於0.45um，直徑約為50mm。選擇濾膜材質時候應保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應採用適宜的方法滅菌。使用後，應保證濾膜在過濾前後的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤洗濾膜，供試液經薄膜過濾後，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml。每片濾膜的總過濾量不宜過大，以避免濾膜上的微生物受損傷。

取相當於每張濾膜含1克或1ml供試品的供試液，加至適宜的稀釋劑中，混勻過濾。若供試品每1克或1ml所含的菌數比較多時，可取適宜稀釋級的供試液1ml，過濾。用PH無菌氯化鈉——蛋白腖緩沖液或其它適宜的沖洗液沖洗液沖洗濾膜，沖洗方法和沖洗量同「計數方法的驗證」，沖洗後取出濾膜，菌面朝上貼於營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基或酵母浸出粉腖葡萄糖瓊脂培養基平板上培養。每種培養基至少制備一張濾膜。

陰性對照實驗

取實驗用的稀釋液1ml，照上述薄膜過濾法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。

培養和記數：

培養條件和記數方法同平皿法，每片濾膜上的菌數不應超過100個

菌數報告規則

以相當於1克或1ml供試品的菌落數報告菌數；若濾膜上無菌生長以<1報告菌數（每張濾膜過濾1g或1ml供試品），或以<1

乘於稀釋倍數的值報告菌數。

⑩ 微生物薄膜過濾法，夾膜技巧

（1）驗證試驗方法：試驗原理同前述薄膜過濾法。驗證供試品對薄膜過濾法有抑細菌和抑真菌特性時，與實際的無菌檢查相同，在同一型號的每個過濾器或過濾筒內過濾規定定量的供試品（容器數及每容器的過濾體積），用淋洗液淋洗濾膜至少3次，每次淋洗液體積為100ml，在最後一次淋洗液中，接入驗證用菌種（接種量為10—100CFU）；另取一過濾器或濾筒，不過濾供試品，重復以上淋洗操作，作為陽性對照。根據具體情況，可將整張濾膜或半張濾膜轉移至100ml的指定驗證用培養基內，或將培養基加入到裝有濾膜的濾筒內。分別對表中所列菌種及相應的培養基逐一進行驗證，並將容器置於適當的溫度下培養，培養時間不超過14d。如果使用新的濾膜或濾過器（包括不同廠家或批號、型號），則要按上述薄膜過濾法的要求做 , 組試驗，即樣品試驗組、蛋白腖對照組和陽性對照組重新進行驗證確認。
（2）驗證結果評價：如果供試品培養基容器內的培養基內明顯可見微生物生長（混濁），並且與陽性對照容器內的培養結果相似，則在無菌檢查試驗中必須要過濾與驗證試驗相等量的供試品、淋洗液，淋洗相同次數及使用同量的培養基。如果與陽性對照容器內的培養結果相比，供試品容器內微生物生長現象不明顯，則說明該檢驗量在此檢驗條件下有抑菌作用。應增加淋洗次數，重復以上實驗。也可通過更換過濾膜並使用中和劑來消除產品的抑菌作用。USP規定，如果已淋洗了5次，並且每次淋洗液體積達到500ml，仍無法中和膜上的殘余抑菌性物質，那麼在無菌檢查試驗中就採用此淋洗次數與淋洗量作為最終淋洗方法。