蛋白超濾離心管與fplc的區別

Ⅰ 超濾離心管濃縮蛋白會損失嗎

會有少量損失。取決於緩沖液，濾網的網眼大小和蛋白質的分子量

Ⅱ 有1000分子量的超濾離心管嗎

超濾離心管可以用來分離蛋白和聚乙二醇的
聚乙二醇（PEG）是一種分子量很小的試劑，回而超濾管的截留分子量答一般是在3000道爾頓~10000道爾頓之間。絕大多數蛋白可以被截留在超濾管上層，而聚乙二醇可以穿透濾膜到達超濾管下層
所以超濾離心管可以用來分離蛋白和聚乙二醇的離心管就是一個簡單的可以承受高轉速壓力的管子，比如離一些樣品，分離出上清沉澱。 離心超濾管會有一個類似於內管和外管的兩個部分，內管中是帶有一定分子量的膜，當高速離心時，分子量比它小的就漏到下面的管子（即外管）中了

Ⅲ 超濾離心管用材要求

摘要 （1）選擇合適的超濾離心管。通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的產品。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。

Ⅳ 比較FPLC與HPLC

FPLC全稱為快速蛋白液相色譜（Fast
protein
liquid
chromatography），其原理與高效液相色譜理論類似，是由經典的液體柱層析引入氣相色譜理論，並且對相體進行了改革，配用高壓輸液泵，採用高靈敏檢測器、梯度洗脫裝置、自動收集裝置和微機等發展起來的現代液相色譜。

Ⅳ RNAfree槍頭和離心管與普通的有什麼區別

應該是RNase free，就是無RNA酶的，提RNA，反轉錄等實驗用的，如果沒有用RNase free的管和槍頭可能造成RNA被降解，也可以用DEPC水泡普通的槍頭和管。

生物離心管介紹

同步驟下離心的目的不一樣。開始時DNA溶解在緩沖液里,這時離心後取上清,棄雜質沉澱。後來加鹽和冰乙醇後,DNA還有部分RNA將沉澱,這時離心後要棄上清而收集核酸沉澱.足夠多的離心有助於提高純度,但會損失一些DNA。

攪拌和離心的目的是為了將噬菌體蛋白質外殼同侵入大腸桿菌的噬菌體DNA分開，以便對放射性元素跟蹤測試。離心會使質量較輕的噬菌體顆粒進入上清液，而被感染的細菌則形成沉澱，但這必須保證是在菌體裂解之前進行。

噬菌體侵染細菌的速度很快，在37度的條件下大約40分鍾就可以產生100到300個子代噬菌體。從感染到釋放前的這段時間叫潛伏期，大約經歷20到30分鍾。短時間的保溫可獲得足夠數量的子代噬菌體，但又必須避免超出潛伏期，所以離心要在「短時間」保溫後及時進行。

噬菌體侵染大腸桿菌實驗中，攪拌、離心的目的是把噬菌體和細菌分離開。用同位素示蹤法可驗證光合作用產生的氧來自水。蔗糖為非還原性糖，不能和斐林試劑發生反應。酵母菌有氧呼吸和無氧呼吸均產生二氧化碳，故不能根據是否產生CO2。

Ⅵ 超濾離心管怎麼使用

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。

Ⅶ plc與hplc的窗有什麼區別

hplc是高效液相色譜，plc是超高效液相色譜。
hPLC全稱為快速蛋白液相色譜，其原理與GX液相色譜理論類似，是由經典的液體柱層析引入氣相色譜理論，並且對相體進行了改革，配用高壓輸液泵，採用高靈敏檢測器、梯度洗脫裝置、自動收集裝置和微機等發展起來的現代液相色譜。
近些年以來，在HPLC基礎上發展出了新型色譜技術，包括低壓液相色譜(LPLC)、中壓液相色譜(MPLC)以及快速蛋白液相色譜(FPLC)，在這些新型色譜技術當中，快速蛋白液相色譜(FPLC)可以非常迅速地分離復雜混合物，能夠在短時間內對大量樣品加以純化。其特性表現為較大的容量、較高的回收效率以及不易失活的生物大分子等。能夠越來越廣泛地使用於生命科學研究及葯物生產上。由耐高壓的塑料管組成FPLC的管道系統，由柱塞式泵驅動流動相，中低壓，使用內徑較大的色譜柱，分析精度較高，0～100mL/min(Z大流速可達1000mL/min)為流速范圍，分析精度低於HPLC，僅使用常規無機鹽溶液，對於大規模純化樣品非常適用。

Ⅷ 超濾離心管能分離蛋白和聚乙二醇嗎

超濾離心管可以用來分離蛋白和聚乙二醇的
聚乙二醇（PEG）是一種分子量內很小的試劑，而超濾管的容截留分子量一般是在3000道爾頓~10000道爾頓之間。絕大多數蛋白可以被截留在超濾管上層，而聚乙二醇可以穿透濾膜到達超濾管下層
所以超濾離心管可以用來分離蛋白和聚乙二醇的

Ⅸ 如何判斷蛋白質是單體還是二聚體

可以通過非變性電泳來判斷蛋白質是單體還是二聚體，非變性電泳就是Native-PAGE，區別於正常的SDS-PAGE就是不加入SDS 和疏基乙醇等變性劑的條件下，對保持活性的蛋白質進行聚丙烯醯胺凝膠電泳。根據Native-PAGE跑出的蛋白分子量與理論分子量對比可以判斷是否為單體還是二聚體。
一般是分別測定天然蛋白的分子量和亞基分子量，除一下就知道了。測定亞基分子量就用SDS-PAGE。這時蛋白質是變性的，亞基分開。測定寡聚蛋白分子量可以用分子篩層析，有專門的層析用的marker，根據洗脫體積計算分子量。如果收集各個組分去跑SDS電泳的話，得到的是亞基分子量。
要用非變性電泳測分子量也可以，但比較麻煩。因為非變性條件下，電泳速度與分子形狀、電荷和分子量都有關系，分子形狀好辦，電荷難辦。所以需要在不同凝膠濃度下，確定出蛋白的Rf值，繪制曲線來計算分子量，所以不推薦。

Ⅹ 求助：第一次使用超濾離心管應該怎麼處理

可能不同廠家的產品保存運輸條件不一樣。
如果有甘油等保護劑，那就一定要洗干凈再加樣品。版權
乾的超濾管也要先潤濕再用，否則可能不能完全利用膜面積。
最好，用樣品buffer潤洗下再加樣，最大程度保證蛋白活性。尤其是用過後保存在NaOH或乙醇中後。
一般還是離心機甩一下好，使膜充分浸潤。

降低吸附的辦法有：
1，蛋白濃度不要過低
2，盡量選用纖維素的低吸附超濾管
3，用前可以用Tween 80等去垢劑潤洗（不影響蛋白活性的前提下）
4，加入保護蛋白，如BSA(不影響蛋白後續使用的前提下)

用完保存在20% EtOH中，4C保存，防止長菌，依不同樣品可以重復使用不同的次數。