『壹』 用來測酶活性,大腸桿菌細胞用什麼緩沖液溶解
有機體的生命活動表現了它內部化學反應歷程的有序性,這種有序性是受多方面因素調節的,一旦破壞了這種有序性,就會導致代謝紊亂,產生疾病,甚至死亡。酶活力受到調節和控制是區別於一般催化劑的重要特徵。
『貳』 溶菌酶過濾器真的能起到作用嗎能殺死細菌嗎在常溫下
樓上的所說的應該是那種0.22um的無菌濾器,一般是制備一些不能高溫滅菌的葯品時用來回除菌的,比如制備答胰酶的時候。不過樓主說的是溶菌酶過濾器,不是你想的那種,還請樓上明察。
樓主你應該是說的用在對空氣質量要求較高的環境,如空氣清新機、中央空調、無菌室等環境的那種溶菌酶過濾器吧?如果是的話,這個產品是能起到作用的,在常溫下溶解酶均勻地固化在過濾介質的橫截面上,其主要功能就是殺滅被過濾器表面所捕獲的懸浮細菌,以保護過濾器系統不受二次污染。因此細菌是不會在上面繁殖的。不過考慮到酶的活性,還是建議定期更換。
希望對你有所幫助,望採納。
『
』
另外再對樓上的補充一句,0.22um的濾器沒有比細菌小很多了,應該說略小吧,有些很小的細菌如支原體的直徑比這個孔徑還小,是可以通過去的。
『叄』 酶的提取為什麼要加緩沖溶液溶解
酶要在一定的活性中才有活性,強酸強鹼都可以使其失去活性,故需要加入緩沖液,使在一定的Ph值中,保持酶的活性!
『肆』 纖維素酶產生菌的分離和篩選 纖維素酶產生菌的分離和篩選的實驗設計方案,以及應該注意的事項。
從土壤中分離22株菌株,採用透明圈法篩選和搖床液體發酵試驗,對篩選菌株進行了濾紙酶活性、脫脂棉酶活性、cmc酶活性、β-葡萄糖苷酶活性測定,篩選出1株產纖維素酶活性較高的菌株(522a),並通過正交試驗,確定該菌株的最優產酶條件.
每種土樣每個濃度各做三個重復,以做對照
『伍』 緩沖液在細菌培養中起什麼作用
維持培養液酸鹼平衡
『陸』 去除酶制劑中細菌最好方法是
當然是紫外線照射法。酒精殺菌的原理在於使細菌的蛋白質變性,所以酶制劑也不能倖免;濾過法更是不對,酶是生物大分子,不利於過濾;巴氏消毒法原理在於低溫長時使蛋白質變性,酶制劑不能保全;紫外線殺菌是使細菌的DNA鏈間嘧啶成為交聯二聚體,從而復制、轉錄、表達都異常使細菌死亡。
『柒』 為什麼制備大腸桿菌感受態的inoue緩沖液需要過濾除菌
氯化鈣法(Calcium Chloride) 本方法適用於批量制備大腸桿菌感受態細胞,所得感受態細胞可以獲得5 x 106 到 2x 107 轉化克隆/微克超螺旋質粒DNA 材料(MATERIALS) 緩沖液和溶液(Buffers and Solutions) (冰冷的)CaCl2•2H2O (1 M)
『捌』 在溶菌酶的粗提取實驗中,為什麼將蛋清緩沖液PH調到4.7後又調到8.0急急急急!
因為卵清蛋白的等電點是4.7,為了提純溶菌酶,要將卵清蛋白沉澱,所以要把PH調到4.7,至於8.0,這是溶菌酶的最適PH值。
提取溶菌酶的方法:
樹脂預處理:干樹脂清水浸泡,使其充分膨脹並除去細小顆粒和較大雜質; 1 mol/L 的HCl浸泡2 h,去離子水洗3次至至近中性;抽濾收集樹脂,1 mol/L 的NaOH溶液浸泡2 h,去離子水洗3次至近中性;抽濾收集樹脂,加0.15 mol/L、pH 值為6.5的磷酸緩沖液平衡過夜待用。
蛋清制備:將3個新鮮雞蛋洗凈乾燥,小端敲一個小洞,大端打一個小孔進氣,分離得雞蛋清,用1 mol/L HCl調節PH到7。過濾前稱量燒杯重48.7g,緩慢攪拌用滅菌的兩層紗布過濾除去臍帶塊和碎蛋殼等,蛋清與燒杯總重207.5g,蛋清凈重158.8g。用1 mol/L 的HCl 溶液調pH 值至7.0,量蛋清體積為100 ml。在調節PH時蛋清中出現少量白色沉澱,可能為部分蛋白由於局部過酸而變性。
吸附:蛋清在不斷攪拌下加入抽濾好的724樹脂25g(相當蛋清四分之一體積的樹脂),冰水浴中磁力攪拌器緩慢攪拌(使樹脂全部懸浮在雞蛋清中,攪拌不能起泡)吸附2.5 h,4℃靜置1.5h。然後3000r/min離心15min分層,收集樹脂,回收蛋清(留樣A)。
去除雜蛋白:收集樹脂用去離子水振盪水洗直至洗液澄清(至無白沫為止),吸管輕吸去洗液,以去除雜蛋白。(每洗1次,離心1次,總共3次)冰浴中用等體積的0.15mol/L、pH =6.5的磷酸緩沖液攪拌洗滌15min,抽濾,重復洗三次,注意防止樹脂流失。最後一次抽濾濾除樹脂水分至乾燥。
洗脫溶菌酶:樹脂中加入35ml(等體積)的10%(NH4)2SO4溶液攪拌洗脫30 min,抽濾,使溶菌酶從樹脂上洗脫下來,重復兩次,合並收集洗脫液(留樣),洗脫液過濾後,准確量取體積100ml。(留樣B)
鹽析:每83mL洗脫液加32g磨細的固體(NH4)2SO4,本實驗中總量為38.55g。緩慢加入(NH4)2SO4攪拌待完全溶解後保鮮膜封口,置於4℃冰箱鹽析過夜。
透析:待白色沉澱析出,3000r/min離心15 min,收集沉澱,用去離子水將沉澱洗下並全部溶解(4.5ml去離子水),裝於透析袋中,於去離子水中透析(冰浴),期間2次更換去離子水,直至用BaCl2檢測透析完全。透析裝置中加入磁子,於磁力攪拌器中攪拌加快透析速度。
去雜質蛋白:取出透析袋中的透析液,用0.1mol/L HCl調整pH4.6,產生少量白色沉澱(留樣D),可能為雜蛋白。3000r/min離心10min,收集上清液(留樣C 20ul)。
濃縮:用PEG-20000濃縮上清液至1.5ml(留樣E,20ul,加loading buffer,出現黃色(可能為濃縮時透析袋中滲入了PEG-20000)。[5][6]
『玖』 測酶活所需要的酪素所用的PBS緩沖液能否滅菌
如果需要滅菌,可以滅,但是一般測酶活性都沒必要滅菌,只是不要用太長時間之前配製的試劑,最好是新配製的試劑做實驗比較有把握