人血清過濾

1. 通常說人的血清具體指的是什麼有什麼作用

血清是指血液凝固後，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子後分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。

血清的主要作用有：

1、提供基本營養物質

比如氨基酸、維生素、核酸衍生物等，細胞生長所需的物質。

2、提供激素和各種生長因子

胰島素、腎上腺皮質激素等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。

3、提供結合蛋白

結合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質，如白蛋白攜帶維生素、脂肪等，轉鐵蛋白攜帶鐵。

(1)人血清過濾擴展閱讀：

血清保存方法：

血清應保存在-5℃至-20℃。然而，若存放於4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議將無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。

血清主要成分：

血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。

血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸鹼度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學成分組成,這些化學成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉氨酶等。

血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。

2. 抽血過濾是什麼意思

抽血過濾是醫學上的術語，抽血過濾在你血管裝一濾管，讓血液循環在一個濾網上，把一些雜質分解在濾網中溶解，使血液循環更快，有這種手.術患者，一般是腎病病人轉化的，有高血壓，貧血，血管硬化的患者、

3. 細胞培養時，為什麼勿直接過濾血清

買來的就已經過濾過除菌了，如果污染了直接扔掉吧，血清過濾起來很費勁的

4. 獻血後,工作人員將血清過濾後，將血漿再重新注入體內,有危險嗎

獻血的時候那個血袋是一個四聯袋，一次能制備三種血液製品。比如採集到400毫升全血，分離出一袋紅細胞懸液，一袋病毒滅活冰凍血漿，一袋冷沉澱凝血因子。所需要的步驟很簡單，不需要也不可能暴露於空氣中。

5. 請問細胞培養中胎牛血清過濾的詳細步驟,

胎牛血清買回來先化開，然後56度半小時滅活，在正常過濾就行。如果你用一次性濾器，內那就先准備容20或50ml的注射器，用注射器抽取，拔掉針頭，再把一次性濾器插入注射器出口，把濾出的血清放滅過菌的容器就行，我一般放50ml離心管中，用時也方便，否則血清反復凍融不好，也容易染菌。

6. 請教血液過濾的技術！

吃得好了，運動少了，血脂就高了。目前，高血脂症的患者極為普遍，它包括高膽固醇血症、高甘油三脂血症及復合性高脂血症，這是導致動脈粥樣硬化和冠心病的主要因素之一。它對腎臟、末梢循環、胰臟、瘙癢症、免疫系統、血液系統疾病也產生不容忽視的影響。

高血脂症分原發性和繼發性兩種，前者與環境、家庭遺傳有關。後者由糖尿病、甲狀腺功能低下、肥胖症、胰腺症等引起。合理的飲食與生活方式對預防高血脂有著重要的意義。對於有遺傳性傾向的高血脂患者，葯物治療無明顯改善，主要通過調節飲食結構來改善，盡量不吃或少吃含膽固醇高的食物，如動物的內臟、腦子、骨髓、魚子、貝類、烏賊、鱔等。要常吃多纖維的蔬菜、瓜果，它們含有大量的植物固醇可以抑制膽固醇吸收，起到抗動脈硬化作用。適量或少量飲酒也能降低膽固醇，每日45毫升白酒或90毫升的干紅或188毫升的啤酒。對於已有高血脂症的患者，一方面要控制飲食，一方面要進行慢跑等適度運動，通過運動，脂肪中的脂酶活性增加，血脂相應降低，有的患者血脂正常，但有高血壓、糖尿病、冠心病，這也要控制飲食、積極運動並在醫生指導下配合葯物治療。

盡管通常能通過合理調節飲食、運動、葯物方法來達到降低膽固醇的目的，但這些方法對一些具有頑固性、家族性高血脂的病人有時往往起不到治療作用。

近來，醫學上已出現全血直接吸附血脂系統，採用全封閉式一次性血路管及自體血凈化回輸，從血液中直接將過多有害血脂去掉。

還可以用於預防高血脂帶來的各種並發症，並能改善冠心病、腦梗塞病變部位的微循環。但是這也不能看做一勞永逸，如不注意運動、不注意飲食調節及結合其它輔助性治療，血脂又會漲到原來的水平。

血脂健康手冊

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血脂健康手冊 1.什麼是血脂？血液中的脂肪類物質，統稱為血脂。血漿中的脂類包括膽固醇、甘油三酯、磷脂和非游離脂肪酸等，它們在血液中是與不同的蛋白質結合在一起，以「脂蛋白」的形式存在。大部分膽固醇是人體自身合成的，少部分是從飲食中獲得的。甘油三酯恰恰相反，大部分是從飲食中獲得的，少部分是人體自身合成的。 2.什麼是高血脂？高血脂是指血中膽固醇(TC)和／或甘油三酯(TG)過高或高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)過低，現代醫學稱之為血脂異常。 3.高血脂的危害？血脂是人體中一種重要的物質，有許多非常重要的功能，但是不能超過一定的范圍。如果血脂過多，容易造成「血稠」，在血管壁上沉積，逐漸形成小斑塊(就是我們常說的「動脈粥樣硬化」)這些「斑塊」增多、增大，逐漸堵塞血管，使血流變慢，嚴重時血流被中斷。這種情況如果發生在心臟，就引起冠心病；發生在腦，就會出現腦中風；如果堵塞眼底血管，將導致視力下降、失明；如果發生在腎臟，就會引起腎動脈硬化，腎功能衰竭；發生在下肢，會出現肢體壞死、潰爛等。此外，高血脂可引發高血壓、誘發膽結石、胰腺炎，加重肝炎、導致男性性功能障礙、老年痴獃等疾病。最新研究提示高血脂可能與癌症的發病有關。 4.哪些人易得高血脂？有高血脂家族史者；體型肥胖者；中老年人；長期高糖飲食者；絕經後婦女；長期吸煙、酗酒者；習慣於靜坐的人；生活無規律、情緒易激動、精神處於緊張狀態者；肝腎疾病、糖尿病、高血壓等疾病者。 5.沒有症狀不等於血脂不高.由於高血脂的發病是一個慢性過程，輕度高血脂通常沒有任何不舒服的感覺，較覺，較重的會出現頭暈目眩、頭痛、胸悶、氣短、心慌、胸痛、乏力、口角歪斜、不能說話、肢體麻木等症狀，最終會導致冠心病、腦中風等嚴重疾病，並出現相應症狀。 6.您的血脂高嗎？總膽固醇(TC)低於5.20mmol/L(200mg/dl)正常，高於5.72mmol /L (200mg/dl)異常；低密度脂蛋白膽固醇(LDL--C)低於3.12mmol/L (120mg/dl)正常，高於3.64mmol/L(140mg/dl異常；高密度脂蛋白膽固醇(HDL--C)高於1.04mmol/L(40mg/dl)正常，低於0.91mmol/L(35mg/dl)異常；甘油三酯(TG)低於1.70mmol/L(150mg/dl)正常，高於1.70mmol/L(150mg/dl)異常。 7.調節血脂三大法寶調節飲食結構、改善生活方式、葯物治療。 (1)調節飲食結構的原則：限制攝入富含脂肪、膽固醇的食物；選用低脂食物(植物油、酸牛奶)；增加維生素、纖維(水果、疏菜、麵包和谷類食物) (2)正常老年人每日膳食結構：一個雞蛋、一個香蕉；一碗牛奶(不一定加糖，也可以是酸牛乳和奶粉)；500克水果及青菜(可選多種品種)；100克凈肉，包括魚、禽、畜等肉類(以可食部分計算)；50克豆製品(包括豆腐、腐竹、千張、豆糕以及各種豆類加工製品，例如豆泥，豆沙和煮爛的整豆)；500克左右的糧食(包括米、面、雜糧、根莖類和砂糖在內)；每天飲用湯，每餐一碗。 (3)具有降血脂的食物：大蒜(早晨空腹吃糖醋蒜1~2個)、生薑、茄子、山楂、柿子、黑木耳、牛奶等。 (4)高血脂患者治療膳食舉例：早餐，豆漿200毫升，蒸餅50克，煮熟黃豆10克；中餐，標准粉、玉米粉兩面饅頭100克，米稀飯50克，瘦豬肉25克，炒青椒100克，炒豆角100克；晚餐，米飯150克，小白菜100克，熬豆腐50克，粉條10克，鯉魚20克，土豆絲100克。全日烹調用油12克。 (5)改善生活方式a.減肥：肥胖就是脂肪過剩，也是動脈樣硬化的外在標志。b.戒煙：煙草中的尼古丁、一氧化碳引發和加重動脈樣硬化的發生和發展。c.控制酒精：酒對人體少飲有利，多飲有害。酒的熱量高，多喝加重肥胖。d.有氧運動。 8.老年人適當運動量通過心率計算運動量是否適宜，心率保持在(220-年齡)×（60%-85%)。適合老年人健身體育項目有太極、氣功、慢跑、快走、騎車慢行、游泳、登山、老年健身操、門球、羽毛球、倒走等。一天中進行健身鍛煉最佳時間：早晨5時，運動量不宜過大，應保持輕到中等強度；上午10時是一天中最佳的運動時機，下午16~17時是減肥的最合適鍛煉時間；晚飯前0.5~1小時，此時進行散步(或快走)和做保健體操，是有利於治療糖尿病的體育療法。同時應注重心理健康，保持樂觀豁達的生活態度。 9.葯物治療，保心護腦九十所代初，國際醫學界進行了大規模的調脂治療研究，結果令人振奮：長期服用調脂葯物不僅降低血脂，同時也明顯減少冠心病、心肌梗塞、腦中風的發生率、致殘率和死亡率。簡言之，調脂治療最根本目的是預防、延緩冠心病、腦中風等疾病的發生。目前，全球醫生和患者對調脂治療極其重視，觀念發生根本性變化。因此有人稱調脂的年代已經到來！ 10.如何選擇理想的調脂葯？當通過合理調整飲食結構，改變不良生活習慣，加強體育鍛煉後，仍不能使血脂降至理想水平時，就必須開始葯物治療。目前調整血脂的葯物很多，主要分為以下三類：(1)他汀類，以降低膽固醇為主，如舒降之、普拉固等；(2)貝特類：以降低甘油三酯為主，如諾衡、力平脂等；(3)天然葯物類，對降低膽固醇和甘油三酯均有效，且可以升高高密度脂蛋白，具有綜合調節血脂的功效，且副作用小，如龍泰牌降脂寧等。因為血脂增高是一個緩慢的過程，血脂的調節特別是消除血脂的不良影響也同樣需要一個持續作用的過程，因此患者應根據自身的不同情況，選擇降脂作用明顯，毒副作用小的降脂葯物。 11.檢查血脂至關重要：由於目前仍有很多人對高血脂的危險認識不足，再加高血脂本身並沒有什麼症狀，因此，很多人是在無意中發現血脂高的。為防範於未然，當您有下述情況時，如高血脂家族史，肥胖、高血壓、皮膚黃色瘤或已有冠心病、腦中風，糖尿病、腎臟疾病、中老年、絕經後婦女、長期高糖飲食，請您及早檢查血脂。普通人：每2年檢查一次血脂；40歲以上的人：每一年檢查1次血脂；高危人群和高血脂患者：聽從醫生指導定期復查血脂。 12.血脂與冠心病：拒統計，心腦血管病的死亡率已超過人口全部死亡率的1/2。冠心病也叫冠狀動脈粥樣硬化性心臟病。冠狀動脈是專門給心臟供血的動脈，由於過多脂肪沉積，造成動脈硬化，使血流受阻，引起心臟缺血，發生一系列症狀，即冠心病。引起冠心病的危險因素：高血脂、吸煙、糖尿病、肥胖、高血壓、缺乏體力活動、精神過度緊張、冠心病家族史、口服避孕葯等，其中、高血脂是引起冠心病的重要危險因素之一。調節血脂是防治冠心病最基本療法：血清總膽固醇水平下降1%，則冠心病的發生率下降2%。只要有冠心病，不論你血脂高或不高，均應長期服用調脂葯。因為長期調脂治療可以減少冠心病心絞痛、心肌梗死的發生率和死亡率。 13.血脂與腦梗塞的關系：當血液中膽固醇增高時，容易形成動脈硬化斑塊，這些斑塊在動脈壁內堆積，使動脈官腔狹窄，阻塞血液流入相應部位，引起動能缺損。它發生在腦血管時引起腦梗塞，醫學證明：長期調脂治療不僅能治療腦梗塞，還能預防腦梗塞。調脂治療與腦中風：腦中風的原因很多，有高血壓、高血脂、吸煙、飲酒、肥胖、高齡、糖尿病、血液病等，其中高血脂、腦動脈粥樣硬化是腦梗塞的重要危險因素之一。許多研究證明，長期調脂治療能明顯減低腦中風的發生率和致殘率，因此，臨床醫師對高血脂的治療越來越重視。 14.血脂與糖尿病：高血脂、高血壓與高血糖被稱為「三高」，是威脅糖尿病患者健康與生命的主要危險因素。三者密切相關，高血脂可加重糖尿病，所以糖尿病患者除治療高血糖外，還需要調節血脂，是減少糖尿病患者死亡率和致殘率的關鍵。糖尿病患者應注意調血脂：糖尿病合並高血脂更容易導致腦中風、冠心病、肢體壞死、眼底病變、腎臟病變、神經病變等，這些糖尿病的遠期並發症是造成糖尿病患者殘疾或過早死亡的主要原因。半數以上糖尿病患者合並高血脂，積極治療高血脂對控制血糖、預防並發症大有好處。調整血糖能一定程度改善血脂，但要達到理想水平，還需調脂葯干預治療。糖尿病與脂代謝的治療狀況已成為糖尿病患者病情控制優劣的標准。 15.血脂與脂肪肝：脂肪肝是脂肪在肝內大量蓄積所致，常合並有血脂增高。B超檢查是目前檢查脂肪肝的主要手段。脂肪肝發病率高達5~10%，成人體檢中轉氨酶增高者約35%為脂肪肝，部分患者可發展成肝硬化。因此，脂肪肝的防治對防止慢性肝病的進展和改善預後十分重要。哪些人易患脂肪肝：高血脂患者、糖尿病患者、腹部脂肪堆積者、長期大量飲酒者、肥胖者和患有病毒性肝炎者。脂肪肝有那些症狀：輕度脂肪肝多數無自覺症狀，中度、重度表現為肝腫大、食慾減退、肝區脹痛、轉氨酶升高，少數出現輕度黃疸、脾大等。脂肪肝患者應該怎麼辦：早期治療，可以阻止脂肪肝的發展，大多數脂肪肝是可以治癒的。包括祛除病因、改善生活方式、調節飲食結構；應用調脂葯進行治療。 16.龍泰牌降脂寧顆粒屬純天然葯物制劑，多年臨床證明，它能明顯降低血清膽固醇，甘油三脂及血清低密度脂蛋白固醇的水平，能明顯改善患者因高血脂引起的頭暈、胸悶、胸痛、心悸、肢麻及心律不齊等症狀，有治療和預防的雙重作用，無任何副作用，臨床使用安全可靠。

血脂是血液中的脂肪物質，主要有兩種：膽固醇和甘油三酯（TG），其中膽固醇又分為低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）。高血脂是指血清中的膽固醇和甘油三酯升高，其中以LDL-C升高的危害最大。
高血脂患者健身時注意幾個原則：

1． 選擇合適的運動項目：根據自身情況，選擇長距離步行或遠足、慢跑、騎自行車、體操、太極拳、氣功、游泳、爬山、乒乓球、羽毛球、網球、迪斯科健身操及健身器等。

2． 掌握運動強度：運動時心率為本人最高心率的60－70%，約相當於50－60%的最大攝氧量。一般40歲心率控制在140次／分；50歲130次/分;60歲以上120次/分以內為宜。

3． 適當的運動頻率：中老年人，特別是老年人由於機體代謝水平降低，疲勞後恢復的時間延長，因此運動頻率可視情況增減，一般每周3－4次為宜。

4． 合適的運動時間：每次運動時間控制在30－40分鍾，下午運動最好，並應堅持長年運動鍛煉。 高血脂患者健身特別注意：

1) 重視在運動過程中和運動後的自身感覺，如出現嚴重呼吸費力、前胸壓迫感、頭昏眼花，面色蒼白等現象，應立即停止運動，有可能的話，應平卧休息。

2) 高血脂患者而無其它合並症應保持中等強度運動量，即每天達到慢跑3-5公里的運動量。對合並有輕度高血壓、肥胖、糖尿病和無症狀性冠心病等疾病者應自行掌握，以鍛煉時不發生明顯的身體不適為原則，必要時應在醫療監護下進行。對伴有重度高血壓、嚴重心臟病（如急性心肌梗死、心力衰竭、嚴重心律失常等）、嚴重糖尿病以及嚴重肝腎功能不全者應禁止運動，待上述疾病明顯改善後再考慮適量運動。

3) 運動要持之以恆，貴在堅持。

高血脂患者的保健康食品
一、蘋果：蘋果素有「果中之王」的美稱，可以大大降低冠心病患者死亡的危險性，是冠心病防治的理想食品。
二、山楂：山楂為一種薔薇科落葉灌木的成熟果實，性微溫，味甘酸，有消食化積、散淤行滯的作用。早在明代我國醫葯學家李時珍就用山楂來「化飲食、消肉積」，治療因食用肉類過多而引起的疾病。
三、海帶：海帶是一種有益於健康的食品，也是治病良葯。海帶中含有一種叫做海帶多糖的有效成分，可以降低血清總膽固醇和甘油三酯的含量。
四、蕈類食物：蕈類食物是蘑菇、草菇、香菇、平菇等菌類食物的總稱，是一種高蛋白、低脂肪，富含天然維生素的健康食品，具有許多獨特的保健作用。
五：洋蔥：洋蔥又稱圓蔥、玉蔥，屬百合科植物。原產印度西北部，所以我國人稱其為洋蔥。洋蔥中含有豐富的蛋白質、糖類、維生素B2、B6、C、胡蘿卜素、硫胺素、尼克酸和鈣、磷、鐵、硒等多種元素，以及多種化學物質，幾乎不含脂肪。
六、大蒜被譽為「綠色的大夫」，我國古代華論、李時珍等名醫就曾用大蒜來治療多種疾病。在古代的埃及、希臘、印度等國也有關於用大蒜治病的種種傳說。
七、豆類：豆類包括大豆（如黃豆、黑豆、青豆、紅豆等）、蠶豆、豌豆、赤豆、綠豆等，它們是人體蛋白質的良好來源，也是防治高脂血症和冠心病的健康食品。豆類中蛋白質含量較高，質量也較好，特別是大豆，每100克大豆含蛋白質約40克。其它豆類如蠶豆、赤豆、綠豆等，每100克中也含有20～25克的蛋白質。
專家指出，100克豆漿中有1.8～4．4克大豆蛋白，100克豆腐中有72～11.4克大豆蛋白，100克大豆粉中有35.3～45.9克大豆蛋白，每天如能以20克大豆蛋白替代動物性蛋白質，對預防心腦血管疾病非常有益

高血脂症患者的飲食應注意些什麼？

民以食為天，當人們"大飽口福"時，卻常常忽視了營養結構。飲食不節可以導致高脂血症及其有關的很多疾病。對於高脂血症患者就更得注意吃得明白，吃得健康。簡單說來，高血脂病人的飲食應注意「一個平衡」 和「五個原則"。
平衡飲食：患有高血脂，很多人就完全素食、偏食，這是個誤區，對身體是很不利的。我們從飲食中獲得的各種營養素，應該種類齊全，比例適當，如果在兩星期內您所吃的食物沒有超過20個品種，說明您的飲食結構有問題。
五個原則：低熱量、低膽固醇、低脂肪、低糖、高纖維飲食
低熱量：控制飲食的量，旨在達到和維持理想體重。所謂理想體重通常是以「體重指數」表示。其計算公式為：體重指數=體重（公斤）/身高（米）2，其理想值為22。體重超過理想體重之10%表示過重，超過理想體重之20%表示肥胖。對於體型肥胖的高血脂患者，通常是每周降低體重0.5-1公斤合適。
低膽固醇：每日總攝取量應低於300亳克，膽固醇只在動物性食品中才有，植物性食品中不含膽固醇。各種肉類（包括：雞、鴨、魚、豬、牛、羊等）膽固醇含量：平均每兩約含20-30亳克膽固醇。

低脂肪：盡量少吃飽和脂肪酸的食物，包括動物性食品（肥肉、全脂奶、奶油、豬油、牛油、豬腸、牛腩及肉類外皮）和部分植物性食品（烤酥油、椰子油、椰子、棕櫚油）。烹調用油宜選擇較多不飽和脂肪酸的油，例如：大豆、米油、玉米油、紅花籽油、葵花仔油、蔬菜油、橄欖油、花生油、芥花油、苦茶油，另外，魚類及豆類之飽和脂肪酸含量較少，亦可多考慮用以取代其它肉類，作為蛋白質之來源。不吃或盡量少吃高油點心（腰果、花生、瓜子、蛋糕、西點、中式糕餅、巧克力、冰淇淋）。
高纖維的食物：如各類水果、豆類、燕麥片、洋菜、木耳、海帶、紫菜、菇類、瓜類、莢豆類及蔬菜莖部。

高血脂症的患者極為普遍，它包括高膽固醇血症、高甘油三脂血症及復合性高脂血症，這是導致動脈粥樣硬化和冠心病的主要因素之一。它對腎臟、末梢循環、胰臟、瘙癢症、免疫系統、血液系統疾病也產生不容忽視的影響。

高血脂症分原發性和繼發性兩種，前者與環境、家庭遺傳有關。後者由糖尿病、甲狀腺功能低下、肥胖症、胰腺症等引起。合理的飲食與生活方式對預防高血脂有著重要的意義。對於有遺傳性傾向的高血脂患者，葯物治療無明顯改善，主要通過調節飲食結構來改善，盡量不吃或少吃含膽固醇高的食物，如動物的內臟、腦子、骨髓、魚子、貝類、烏賊、鱔等。要常吃多纖維的蔬菜、瓜果，它們含有大量的植物固醇可以抑制膽固醇吸收，起到抗動脈硬化作用。適量或少量飲酒也能降低膽固醇，每日45毫升白酒或90毫升的干紅或188毫升的啤酒。對於已有高血脂症的患者，一方面要控制飲食，一方面要進行慢跑等適度運動，通過運動，脂肪中的脂酶活性增加，血脂相應降低，有的患者血脂正常，但有高血壓、糖尿病、冠心病，這也要控制飲食、積極運動並在醫生指導下配合葯物治療。

盡管通常能通過合理調節飲食、運動、葯物方法來達到降低膽固醇的目的，但這些方法對一些具有頑固性、家族性高血脂的病人有時往往起不到治療作用。

近來，醫學上已出現全血直接吸附血脂系統，採用全封閉式一次性血路管及自體血凈化回輸，從血液中直接將過多有害血脂去掉。

還可以用於預防高血脂帶來的各種並發症，並能改善冠心病、腦梗塞病變部位的微循環。但是這也不能看做一勞永逸，如不注意運動、不注意飲食調節及結合其它輔助性治療，血脂又會漲到原來的水平。

7. 細胞培養基加了血清後還可以過濾么

1、血清要做滅活處理；
2、滅活後的血清要經過.45和.22慮膜過濾；
3、培養基是不可以紫回外照射的。
還要答注意一點的是血清一般不推薦直接過濾除菌的，如果懷疑血清染菌，過濾時要把血清按比例加入到培養液中，然後才可以過濾除菌！！

8. 1640培養基加血清後還要過濾嗎

1、血清要做滅來活處理；
2、滅源活後的血清要經過.45和.22慮膜過濾；
3、培養基是不可以紫外照射的。
還要注意一點的是血清一般不推薦直接過濾除菌的，如果懷疑血清染菌，過濾時要把血清按比例加入到培養液中，然後才可以過濾除菌！！

9. 血清污染後可以用濾器過濾後再用嗎

胎牛血清買回來先化開,然後56度半小時滅活,在正常過濾就行.如果你用一次性濾器,那就先准備內20或50ml的注射器,用注容射器抽取,拔掉針頭,再把一次性濾器插入注射器出口,把濾出的血清放滅過菌的容器就行,我一般放50ml離心管中,用時也方便,否則血清反復凍融不好,也容易染菌.天貓美國普衛欣提示：霧霾天氣出行記得做好防護。

10. 全血分離獲得血清的方法及步驟 謝謝

材料與方法

1.1 血清採集 MG患者全血來自～2005年就診於遼寧中醫學院附屬醫院的門診患者。根據典型臨床表現、新斯的明試驗、低頻重復電刺激及單纖維肌電圖等確診，無其他自身免疫性疾病，未經其他免疫抑制治療，並參照1994年版《中醫病證診斷療效標准》辨證為脾腎虛型。正常人血清取自同時期健康志願者。-70 ℃冰箱冷凍保存備用。

1.2 主要試劑 固相pH梯度干膠條IPG strip（Amersham公司產品， 非線性pH 3～10， 7 cm）。3-〔3-（膽醯胺基丙基）二甲氨基〕丙磺酸鹽｛3-〔（3-cholamidopropyl） dimethylamino〕-1-propanesul-fonate， CHAPS｝，二硫蘇糖醇（DL-dithiothreitol， DTT），三丁基膦（tributyl phosphine， TBP），尿素，硫脲，碘乙醯胺（iodoacetamide， IAA），丙烯醯胺（acrylamide）、甲雙丙烯醯胺（N， N'-methylenebi-sacrylamide），四甲基乙二胺（N， N， N， N-tetram-ethyl-ethylenediamine， TEMED），過硫醯胺（am-monium persulfate， APS），三羥甲基氨基甲烷〔tris （hydroxymethyl） aminomethane〕、甘氨酸（glycine， Gly）和十二烷基磺酸鈉（sodium dodecyl sulfate， SDS）均為Bio-Rad公司產品。瓊脂糖為華美生物公司產品。其他試劑均使用國產分析純試劑。所有溶液均用MilliQ水配製。

1.3 主要儀器 高速冷凍離心機，德國Eppendorf公司產品;EttanTMIPGphorⅡ，Amersham Biosci-ences公司產品;P-2000分光光度儀，Hitachi公司產品;SE-600電泳儀，Amersham公司產品;純水裝置，Millipore公司產品;GS-710光密度掃描儀，Bio-Rad公司產品;冷卻水循環系統，Cole-Parmer公司產品;Bruker-Daltonics AutoFlex TOF-TOF LIFTMass Spectrometer，美國Bruker-Daltonics公司產品;LCQ Deca XP Plus，美國Thermo Finnigan公司產品。

1.4 雙向電泳

1.4.1 血清總蛋白質的提取及定量 血清-70 ℃反復凍融4次後，用Agilent Multiple Affinity Re-moval Column處理去除高豐度蛋白。使用Agilent 5K超濾管進行濃縮除鹽，凍干回收的樣品，-70 ℃保存。用裂解液（9 mol/L 尿素、4% CHAPS、 65 mmol/L DTT和cocktail酶抑制劑）進行復溶，並採用考馬斯亮藍法進行蛋白質定量。

1.4.2 等電聚焦 自-20 ℃取出的膠條，室溫下平衡10 min，以500 μg上樣量在每份樣本中加入上樣緩沖液（8 mol/L尿素、2% CHAPS、1% Bio-lyte和1% TBP）以及標准蛋白質分子，上樣於泡脹槽中，加入礦物油覆蓋。程序設置如下:30 V 12 h，500 V 1 h，1 000 V 1 h，8 000 V 6 h。恆溫20 ℃。等電聚焦電泳後IPG膠條在平衡液1（Tris-base 50 mol/L 、尿素 6 mol/L、甘油 30%、SDS 2%、溴酚藍0.002%和DTT 100 mg）中於振盪器上振盪 15 min; 然後置入平衡液2（成分同平衡液1，用 400 mg 碘乙醯胺代替100 mg DTT）同樣於振盪器上振盪15 min。

1.4.3 SDS-PAGE垂直電泳 採用12.5%的均勻SDS2聚丙烯醯胺凝膠（水23.2 ml，30%丙烯醯胺溶液32.46 ml，1.5 mol/L Tris-HCl緩沖液pH 8.8 20 ml，10% SDS 0.8 ml，10% APS 0.4 ml，TEMED 3.76 μl，膠總體積80 ml）。將平衡後的IPG膠條移至凝膠的上方，膠條一端放入低分子量蛋白質標准，0.5%的瓊脂糖封膠。上下槽加入電極緩沖液（Tris 5 mmol/L，Gly 192 mmol/L和SDS 0.1%）。初始電流為每塊膠40 mA，電泳20 min，然後以每塊膠60 mA電流，直至溴酚藍前沿。

1.4.4 銀染色 電泳結束後，採用硝酸銀染色法，通過固定，硝酸銀染色，顯影，停顯及脫色，至背景清晰。

1.5 圖像分析 每個樣品常規進行3次二維電泳，用GS-710光密度掃描儀對電泳後的膠圖分別進行掃描，所得掃描圖像輸入計算機，採用Image-master軟體對圖像進行背景消減、蛋白質點檢測和校正，獲取蛋白質點的位置坐標和表達量等分析。選取 Ratio ≥1.5的蛋白質點認為有差異。所有數據的統計分析均採用SPSS 12.0軟體，統計學分析採用 t 檢驗。

1.6 基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜分析 用手術刀片切下膠上目標條帶，進行切膠、膠上胰蛋白酶酶解 20 h ，抽提酶解肽段，Zip Tip脫鹽後點樣，行基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜（matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry， MALDI-TOF-MS）分析（飛行管長2.7 m，加速電壓 20 kV ，反射電壓23 kV）。將第1級質譜得到的肽片段質量指紋圖譜、肽質量指紋圖譜與第2級質譜得到的肽序列信息一起用來檢索蛋白質資料庫，找出匹配的蛋白質。

1.7 資料庫檢索 將質譜鑒定所得的肽質量指紋譜（peptide mass fingerprinting， PMF）數據於Bio-Works（Thermo Finnigan， San Jose， CA）軟體搜索相應的庫。搜索使用的資料庫為IPI human蛋白庫（SEQUEST結果過濾參數為:當Charge+1，Xcorr≥1.9;當Charge+2，Xcorr≥2.2;當Charge+3，Xcorr≥3.75;其中DelCN≥0.1）以及NCBI上 Homo sapiens的非冗餘蛋白庫（rendant data-base）。檢索參數為胰蛋白酶解;氨基酸固定修飾方式為脲甲基半胱氨酸;模式為單同位素峰;肽片斷最大誤差控制在100 ppm;肽片斷最大分子量誤差為±0.5 Da;每個肽允許有1個不完全裂解位點。

2 結果

2.1 脾腎虛型重症肌無力患者血清雙向電泳圖譜 的建立及分析 經2-DE技術及銀染色後，得到了兩組血清的雙向凝膠電泳圖，並於相同的條件下重復實驗3次。在正常對照組細胞蛋白質組雙向電泳圖譜上可觀察到1 463±179個蛋白點，而脾腎虛型重症肌無力組可見到1 508±89個蛋白點