❶ 為什麼DNA在純水中易變性
DNA在純水中易變性原因：每一個核苷酸的磷酸基上都帶有一個負電荷回。如果這些負電荷沒有被中答和，雙鏈之間的這種強有力的靜電排斥作用將驅使兩條鏈分開(在同一條鏈內雖然也存在著這種靜電斥力，但由於鏈內的共價鍵，這種靜電斥力並不重要)。但是當有鹽類加入時，這些帶負電荷的磷酸基團可以被正離子(如Na+)所中和，也就是正離子圍繞在磷酸基周圍形成了"離子雲"，有效地屏蔽了磷酸基之間的靜電斥力。這就是Debye-Hvckel 離子屏蔽理論。
❷ DNA製品為什麼應保存在濃度較高的溶液或緩沖溶液中
為了
不使dna降解，溶液中必須含有edta螯合劑
以便螯合dna水解酶的輔酶，此外，dna在酸性條件下易降解，因此
需要給予鹼性環境。隨意buffer
都是含有edta的鹼性溶液。
至於為什麼用溶液而不用乾粉，是為了方便使用而已（免去了溶解過程，也避免了非專業溶解造成的dna水解）
❸ 艾弗里轉化實驗為什麼使用DNA酶
DNA酶可以水解DNA，這一組可以從反面證明DNA是促使R型細胞轉化的物質。
❹ 核酸的保存,小為什麼RNA可以放在純水裡DNA卻不能
你問反了抄吧,做質粒DNA純化,用試劑襲盒最後一步洗脫就可以用熱的純水,然後冷凍就OK了
而對於大多數RNA,由於是單鏈,而且環境中有菌,存在大量的 RNA酶 ,一般不容易保存,有些RNA酶熱滅菌都不能失活
❺ 在分離純化酶的過程中為什麼要不斷測定酶活力和酶蛋白含量
一方面,防止酶變性失活.一旦活力明顯下降,就要考慮換一種純化方法；
另一方面,計算純化效率.通過總活力和比活,評估純化效率,尋找最佳方法.
❻ DNA在純水中為何易變性
DNA的骨架磷酸根帶負電，在純水中沒有陽離子來中和它的電性，所以無法維持雙螺旋結構，易變性。
❼ 細菌提質粒最後一步為什麼要加入無rna酶得水.
只要是純水就可以了，在無金屬離子輔助下，DNA酶一般不起作用。
要沒RNA酶，可能是為了之後的實驗考慮吧。。。
❽ 在分離純化蛋白酶過程中，為什麼要不斷的測定蛋白酶的活力和蛋白含量
蛋白酶最終的功能和活性掛鉤的，也就是說在分離純化的過程中需要保證蛋白酶的活性收率。而不斷的測定蛋白酶的活力和蛋白含量可以知道每一步分離純化後蛋白酶的比活，通過比活的變化來確定活性收率，最終摸索出活性收率最高的分離純化工藝。
❾ 純化dna的濾液成分
（2）①洗滌劑是一些離子去污劑，它能溶解細胞膜，有利於DNA的釋放。 ②食鹽的主要成分是NaCl，適度的食鹽溶液有利於DNA的溶解。 ③研磨不充分會使細胞核內的DNA釋放不完全，提取的DNA量少，影響實驗效果，導致看不到絲狀沉澱物，用二苯胺鑒定不顯示藍色。 ④可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質。 （3）①根據DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，蛋白酶對DNA沒有影響，DNA對高溫的耐受性強等特性，可以設計不同的DNA純化方案。 ②方案1：在濾液中加入NaCl，使NaCl溶液濃度為2 mol/L，過濾除去不溶的雜質，再調節NaCl溶液濃度為0.14 mol/L，析出DNA，過濾去除溶液中的雜質，再利用2 mol/L的NaCl溶液溶解DNA。依據原理：利用DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度的不同。 方案2：直接在濾液中加入嫩肉粉，反應10～15分鍾，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能分解蛋白質。 依據原理：利用蛋白酶分解蛋白質，而對DNA無影響，從而使提取的DNA與蛋白質分開。 方案3：將濾液放在60～75 ℃的恆溫水浴箱中保溫10～15分鍾，注意嚴格控制溫度范圍。依據原理：利用DNA和蛋白質對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質變性與DNA分離。 （4）①一是抑制DNA水解酶活性，防止DNA降解，二是降低分子運動，易於形成沉澱析出，三是低溫有利於增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。 ②二苯胺法、紫外燈照射法、電泳法等。 考查DNA的粗提取過程和DNA的鑒定。用植物組織提取DNA時與動物細胞不同，需要用洗滌劑溶解細胞膜，其他操作都是相同的。DNA粗提取過程中，去除濾液中的雜質，有三種不同的方案，原理不同。
❿ 基因測序，pcr對純水有什麼要求
PCR產物直接測序技術現已成為分子生物學和基因組學研究中的一個重要技術,廣泛用於基因突變檢測、遺傳性疾病診斷、單核苷酸多態性研究、基因組重疊序列群等.與傳統克隆測序技術相比較,直接對PCR擴增的DNA進行測序,省去了耗時的克隆步驟,避免了傳統的細菌培養,模板提取等重復性操作,可以從少量的原始樣品中得到正確的DNA序列信息.PCR產物直接測序技術具有快速、簡便、穩定經濟的優點. 試驗試劑 PCR擴增的雙鏈DNA模板長約20個核苷酸的DNA引物 DNA聚合酶測序膠 0.1mol/L DDT α-32P-dATP dNTP/ddNTP混合物(80μmol/L/8μmol/L) dNTP(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L) 測序反應緩沖液：40mmol/L Tris-HCl(pH7.5),20mmol/L MgCl2,50mmol/L NaCl 終止緩沖液：95% 甲醯胺,20mmol/L EDTA,0.05% 溴酚藍,0.05% 二甲苯腈試驗步驟： 1、 4個微量離心管中各加入dNTP/ddNTP混合物2.5μl,混合物37OC溫浴5min,備用. 2、 在一個空的微量離心管中加入1pmol的PCR擴增雙鏈DNA,10pmol測序引物,2μl 5×測序緩沖液,加雙蒸水至總體積10μl,96OC加熱8min,冰浴泠卻1min,4OC 10000g離心10s. 3、 加入2μl預冷的標記混合物(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L),α-32P-dATP 5μCi,1μl 0.1mol/L DDT,測序酶2U,加水至15μl,混勻後置冰上2min,標記新合成的DNA鏈. 4、 在第1步驟的4個管中各加入3.5μl標記反應混合物,37OC溫浴5min.每管各加入4μl終止液. 5、 樣品在80OC的水浴中熱變性5min,每一泳道加2μl 加到測序膠上,電泳分離這些片段. 注意事項： 1.?PCR產物要有一定的長度(>200bp),因為測序結果兩端20-30bp的電泳峰圖的准確性較低. 2.?純化PCR產物可通過離子交換層析使擴增的DNA段與反應剩餘的dNTP及引物分離；也可通過瓊脂糖凝膠電泳,將PCR產物與非特異性擴增產物和引物分離開來；如果擴增的特異性較高時,可直接通過酚：氯仿抽提,乙醇沉澱的方法來純化. 3.?測序引物設計原則類似於PCR引物設計,可在DNA合成儀上合成20個左右的核苷酸作為引物,經過高壓液相層析或聚丙烯醯胺凝膠電泳純化後,即可用作測序引物. PCR循環測序法 PCR循環測序法是將PCR擴增和核酸序列分析技術相結合,從而形成的一種測定核苷酸序列的研究方法,也稱作線性擴增測序.該方法採用PCR儀加熱使DNA模板變性,在TaqDNA聚合酶作用下,以溫度循環模式在模板上進行多輪的雙脫氧核苷酸測序反應,線性擴增標記的DNA分子. PCR循環測序法與以往的測序方法相比,其優點在於：大大減少所需的模板量；能提高測序反應產生的信號,降低了操作的復雜性,且聚合酶的用量減少；可在小量制備的模板上進行篩選反應；高溫下進行的測序反應使DNA聚合酶催化的聚合反應能夠通過模板二級結構的區域；雙鏈閉環DNA可以直接作為反應模板應用,不用作預先鹼變性處理.由於PCR循環測序法能夠簡單、快速地檢測特定序列,因此, PCR循環測序法在核酸序列分析研究中受到廣泛的重視. 試驗試劑： DNA測序試劑盒 dNTP ddNTP 丙烯醯胺雙丙烯醯胺尿素 TEMED(N,N,N『,N』-四甲基乙二胺) 過硫酸銨 6%測序膠：6%丙烯醯胺,7mmol/L 尿素,1×TBE. 10×測序緩沖液：100mmol/L Tris-HCl(pH8.8),500mmol/L KCl,40mmol/L MgCl2,0.01%明膠,20μmol/L dATP,50μmol/L dCTP,50μmol/L dGTP,50μmol/L dTTP 終止混合液：ddATP (600μmol/L),ddCTP (600μmol/L),ddGTP (100μmol/L),ddTTP(1000μmol/L) 終止緩沖液：95%甲醯胺,20mmol/L EDTA,0.05%溴酚藍,0.05%二甲苯腈試驗步驟 1、 4個小離心管,每個小管加入3μl的終止混合液,將管子放在冰上. 2、 在DNA模板中加入引物(4pmol), 4μl 10×測序緩沖液, 10μlα-32P-dATP, 2U TaqDNA聚合酶,加雙蒸水到30μl徹底混勻,每管7μl加入上面4個小管中. 3、 反應液上加30μl的石蠟油. 4、 95OC 30S,50OC 30S,72OC 60S共30個循環,可根據具體的情況進行適當的調整循環條件及循環次數. 5、 反應結束後在油層下加入5μl的終止緩沖液並用加樣槍混勻. 6、 上樣前將樣品在大於80OC的水浴中熱變性5min,每一道加2μl加到測序膠上,電泳分離這些片段. 注意事項： 1、 制備測序模板：PCR 擴增的產物可以經過低熔點的瓊脂糖凝膠電泳純化回收後,用於序列分析；可經過柱層析純化,去除PCR 反應後剩餘的dNTP和引物後,用於序列分析.PCR 產物也可不經純化直接用於測序,但是這種測序產生的結果較差,建議測序之前應進行PCR產物的純化.各種標準的質粒制備方法所純化出的質粒均可作為測序模板使用.用標准方法制備的M13噬菌體、粘粒、λDNA都適合用作測序模板用.但要注意的是反應體系中不應有與引物互補的非目的基因序列,否則將會導致測序實驗的失敗. 2、 測序引物：測序引物是指合成的與測序模板鏈特異性互補的寡核苷酸序列.可用α-32P-dATP和T4多聚核苷酸激酶對引物的5『端進行標記,反應體系中引物、激酶和α-32P-dATP要保持在最佳的比例,以得到高比活性的標記引物；也可用α-32P-dATP標記新合成的DNA鏈.引物的濃度不宜高,否則容易形成引物二聚體,或產生非特異性的擴增引物. 3、 酶：各種缺乏3『—5『端外切活性的耐熱DNA聚合酶都可以用於循環測序,其中TaqDNA聚合酶在DNA測序中最為常用.雖然應用PCR循環測序法能夠簡單、快速的進行基因序列的測定,但仍未能適應大規模DNA序列測定的需要,而PCR循環測序法、熒游標記和自動測序儀的聯合使用成為大規模基因組測序的主要技術.該技術是採用熒游標記引物或雙脫氧核苷三磷酸,反應產物經聚丙烯醯胺凝膠電泳後,經特定的DNA序列分析儀和分析系統處理待測的DNA序列.它的應用減輕了DNA序列測定的工作量,提高了測序的效率.