中性樹脂封片實驗步驟

⑴ he染色的操作步驟

HE染色步驟：

1、脫蠟，脫蠟二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10分鍾，事先准備好蓋玻片。

2、覆水，100%（Ⅰ、Ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5分鍾，自來水沖洗5分鍾×3。

3.、蘇木精染色5分鍾，根據染色情況，可以適當增加或減少染色時間，流水沖洗。

4、5%乙酸分化1分鍾，流水沖洗，用吸管滴加乙酸，布滿玻片上的組織即可，分化後顏色變淺了一些，成為藍色。

5、返藍：返藍液，實驗室沒有，也可不用。

6、伊紅染色1分鍾，根據染色情況，可以適當增加或減少染色時間，流水沖洗。

7、脫水：70%、80%、90%、100%酒精各10秒，二甲苯1分鍾，可以在通風櫥自然晾乾再封

片，約5分鍾左右。

8、滴上中性樹膠，封片，用吸管滴上一滴即可，盡量少滴，但壓片後要將組織全部覆蓋完，避免中間有氣泡。

(1)中性樹脂封片實驗步驟擴展閱讀：

he染色原理：

易於被鹼性或酸性染料著色的性質稱為嗜鹼性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia )；而對鹼性染料和酸性染料親和力都比較弱的現象稱為中性（neutrophilia)。

構成組織內蛋白質的氨基酸的種類很多，它們有不同的等電點。在普通染色法中，染色液的酸鹼度為pH6左右，細胞內的酸性物質如細胞核的染色質、腺細胞和神經細胞內的粗面內質網及透明軟骨基質等均被鹼性染料染色，這些物質稱為嗜鹼性。

而細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色，這些物質稱為嗜酸型。如果改變染色液的酸鹼度，pH值升高時，則原來被酸性染料染色的物質可變為嗜鹼性；pH值降低時，原來被鹼性染料染色的物質則可變為嗜酸性。

所以說染色液的pH值可以影響染色的反應。脫氧核糖核酸（DNA）兩條鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵結合而被染色。蘇木精在鹼性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

⑵ 誰能告訴我石蠟封片怎樣操作

是經典的石蠟切片還是石蠟封片呢？
石蠟切片的最後一步就是封片
我們做的步驟是用中性樹膠封片
封片的過程中最應該注意的就是中性樹膠不要過多也不要過少，過多會溢出來，過少會出現空隙；詳細的量就要自己經驗掌握了。
另一個就是在放蓋玻片的時候動作要慢，不要有氣泡，如果有少量的氣泡，可以用解剖針較粗的那頭輕輕按壓蓋玻片趕出氣泡，如果氣泡過多，那就沒辦法了。

⑶ 用中性樹脂膠粘蓋薄片有什麼辦法能乾的快點兒呢

晚上好，已經黏合好的只能通過物理加熱的方式使其盡快交聯固化。如果你專的樹脂膠是單組份屬溶劑型，可以考慮往裡面加一些低沸點高溶解力的有機溶劑來加快揮發成膜速率比如乙酸乙酯和丙酮，雙組份通過加大B組固化劑的添加量也能明顯加快交聯時間請酌情參考。因為單組份樹脂膠水一般都是以溶劑揮發後高聚物自干成膜為基礎，升溫是唯一也是最有效的方法。

⑷ 中性樹脂封片用什麼溶解中性樹脂

可以試試飛秒實驗室的脫膠劑，或則脫漆劑，都可以，或者你自己用醇試試

⑸ 如何做樹脂吸附試驗包括樹脂如何預處理，裝柱，吸附，再生等操作步驟和注意事項

吸附樹脂裝柱：濕法裝柱，先於吸附柱中加入一定量的純水，然後加入樹脂，也可水與專樹脂同屬時加入柱內，這樣可以防止氣泡產生
吸附樹脂柱預處理：可用2倍體積1mol/l的鹼液過柱，水洗至中性，後再用2倍體積1mol/l酸液過柱，水洗至中性（根據所要吸附物料的PH值大小，選擇酸鹼加入的順序）。也可使用甲醇、乙醇有機溶液洗劑（效果更好）
樹脂再生：根據吸附的物料性質，若吸附鹼性物質，則選擇酸解析，若吸附酸性物質，則選擇鹼解析（酸鹼加熱解析效果更好），若酸鹼都不易解析，可選擇醇溶液解析

樹脂運行過程中，要注意保證樹脂層上必須有液體存在，防止液體流干，出現干柱，產生偏流現象，影響吸附效果；選擇合適的再生劑，否則樹脂性能下降很快；吸附過程要注意流速，不可過快

暫時想到這么多，有問題可以隨時找我

⑹ 中性樹膠封片多久干

中性樹膠封片3個小時干。

中性樹膠是將載玻片和蓋玻片粘合在一起的一種粘合劑，用於長久保留生物組織切片封存。中性樹膠透明度高，幾乎和光學玻璃一樣清晰。

該貨品屬中性，不會腐蝕玻璃。如果不放心可以在粘合以前用鹽酸酒精泡一泡，曬干再粘合會更好。

中性樹膠是顯微技術上使用的優良封藏劑，與加拿大樹膠性質相似，用途相同。中性樹膠是一種天然樹膠，經提煉與中和後溶解在二甲苯中成60%溶液，折光率與玻璃近似，乾燥後凝結成透明無色的固體。

中性樹膠，是一種粘合劑，用於將載玻片和蓋玻片粘合在一起，把生物組織切片封起來長久保留。

不過中性樹膠有些缺點，它是以二甲苯為溶劑的，封合後揮發很慢，製作的玻片起碼在通風處晾一兩個月才沒有二甲苯的味道。可能在烈日下暴曬會快點。

封片方法很簡單，在載玻片中央滴2-3滴樹膠液（注意要滴在一起否則容易有氣泡），然後把蓋玻片慢慢放上去，輕輕擠壓，樹膠液會向外側擴散至整個鏡片。

通風晾幾個小時後用棉球粘上二甲苯或者松節油把鏡片邊緣多餘的樹膠擦洗干凈。然後再放在通風處晾2個月。

⑺ HE染色的方法步驟及注意事項

一、實驗步驟：

（1）樣品制備：對於貼壁生長細胞，胰酶消化，調整細胞濃度約1×105/ml，滴加於蓋玻片上(置於6孔板中)，培養相應時間後，取出細胞爬片，用PBS 洗滌3次。

（2）樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。

（3）染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。

（4）分色：鏡下觀察，若細胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數秒，自來水洗滌。

（5）染胞質：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。

（6）吹乾或自然晾幹細胞 爬片後，中性樹膠封片。

若細胞用4%多聚甲醛固定，則染色時間相應延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。

二、注意事項：

1、染色時調節pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長，組織酸化而影響細胞核著色。因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2、切片染蘇木精後，分色這一步是關鍵，應在顯微鏡下控制進行，一般以細胞核染色清楚（晰）而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺，應重新染色後再行分色。

3、切片經酒精脫水後，入二甲苯時可出現白色不透明狀態，此為脫水不徹底，應將切片退回無水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明。

4、在染色過程中不要讓切片乾燥，以免切片收縮、變形，影響神經元形態。

5、切片從二甲苯取出或進入二甲苯前，切片周邊均應擦乾凈或吸干多餘水分。

6、最後封固時，要用中性樹脂，防止日後褪色，蓋片要選大於組織塊的面積，如漏出一部分不久將會褪色，所用樹脂濃度要適當，樹脂封固時不能有氣泡。

(7)中性樹脂封片實驗步驟擴展閱讀

一、細胞核染色原理：

蘇木精為鹼性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA，在DNA的雙螺旋結構中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外。

使DNA雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在鹼性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

二、細胞漿染色原理：

細胞漿內主要成分是蛋白質，為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關系，當pH調到蛋白質等電點4.7-5.0時，胞漿對外不顯電性，此時酸或鹼性染料不易染色。

當pH調到6.7-6.8時，大於蛋白質的等電點pH值，表現酸性電離，而帶負電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現時胞核也被染色，核和胞漿難以區分。因此必須把pH調至胞漿等電點以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。

伊紅Y是一種化學合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質的氨基正電荷（陽離子）結合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織，嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。

⑻ 有哪位高手能詳細指導一下用transwell板做細胞趨化實驗的具體方法和步驟嗎

1 材料與方法

1. 1
Matrigel：Becton Dickinson Compary, - 20 ℃保存；

Tanswell plate：Costar ,USA , # 3422 ,聚碳酯膜微孔直徑為8μm；

蘇木素染液，梯度乙醇，二甲苯溶液。

1. 2 趨化因子的制備 取傳代第二天長勢良好的NIH3T3細胞,無血清培養基輕柔漂洗兩次; 加入無血清培養基,37℃,5 %CO2 培養24 h～48h，收集細胞培養上清；4 ℃,12 000rpm 離心,10 min ,取上清；0.22 μm 濾膜過濾除菌；分裝,在- 20 ℃保存。

1. 3
transwell 培養板准備 所有操作均需無菌操作。-20℃保存的Matrigel 在冰上保2℃～8℃過夜融化。在冰上用預冷的槍頭吸取100μl Matrigel 加入冰預冷的300μl 無血清培養基中,充分混均。取上述稀釋的Matrigel 25 μl 加入transwell 板上室,覆蓋整個聚碳酯膜,37 ℃,30 min ,使Matrigel 聚合成膠。已鋪好Matrigel的transwell 培養板置於37℃可保存2 周。

1. 4
Matrigel 侵襲實驗(Matrigel Invasion Assay)刺激後的各組細胞用PBS 漂洗3 次。以常規方法用無血清培養基制備單細胞懸液,5 ×105個細胞/ ml ,每組細胞各分為兩部分。胎盤蘭拒染實驗,細胞活力需大於95 %。Transwell 培養板上室加入100μl 細胞懸液( 5 ×104 個) 並加入無血清培養基200 ul 。Transwell 培養板下室加入500μl 趨化因子,37℃,5 %CO2 培養24 h。用濕棉簽輕輕擦去Matrigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞。小心取出上室,用線拴住,並做好標記,用冰預冷的甲醇固定30 min。蘇木素染色1 min。梯度乙醇脫水(80 % ,95 % ,100 %) ,二甲苯透明。小心將聚碳酯膜自上室基底切取下來,置載玻片上中性樹脂封片。附著於聚碳酯膜下表面的細胞在高倍鏡下( ×400) 隨機取6 個視野[1 ] 計數,取平均數。重復實驗兩次。

注意 2. 1
NIH3T3 細胞制備的趨化因子與胎牛血清 趨化因子是能使細胞產生趨化運動的一類細胞因子[2 ] 。目前利用NIH3T3 細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗的實驗室比較多,時間較長且實驗步驟繁瑣。眾所周知,胎牛血清中有趨化因子,我們在不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實驗中發現用胎牛血清和用NIH3T3 細胞制備的趨化因子做細胞體外侵襲實驗效果是一樣的,兩組遷移的細胞數很接近。在實驗時間上，用NIH3 T3細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗周期為1 周,而用胎牛血清作趨化因子做細胞體外侵襲實驗周期為2 d ,實驗時間節省了很多。因此認為可以用胎牛血清來代替NIH3T3 細胞制備的趨化因子。

2. 2 細胞的准備 所需細胞應處在對數生長期,細胞活力需大於95 %。如果細胞活力小,就會造成細胞穿透能力下降,影響實驗結果。

2. 3 擦去Matrigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞 先用干棉簽將上室內液體吸去,再用蒸餾水浸濕的棉簽輕輕擦去Mat rigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞,如果沒有擦凈聚碳酯膜上表面的細胞,在細胞計數時就會將沒擦掉的細胞也計進來。尤其是細胞為圓形的時候,就會分辨不出是穿過去的細胞還是沒穿過去的細胞,對於長梭形細胞來說,穿過去的細胞為長梭形,沒穿過去的細胞多為圓形。

2. 4 蘇木素染色 上室浸泡在新蘇木素中的時間為1 min ,用過多次的蘇木素為2 min。在研究粉防己鹼對HUVEC 人類臍靜脈內皮細胞遷移能力的抑製作用沒有將多餘蘇木素洗去,直接脫水、透明,造成細胞圖片背景模糊,細胞不清楚(見圖1) 。在作不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實驗時我們將其置於盛有自來水的燒杯中,反復漂洗幾次,將多餘蘇木素洗去再行脫水、透明;這樣做出的細胞圖片背景干凈,細胞清楚(見圖2) 。

⑼ 中性樹膠是固體還是液體，用它作石蠟切片封片劑的配方

中性樹膠一般用強化學試劑去除，但這些試劑均有毒怎麼能用它來洗手？ 過不了多久自會掉的，我上次用中性樹膠封片沾在手上，一天過去就沒什麼了