❶ 尿激酶怎麼提取
提取方抄法:
1收集:桶襲裝滿尿液後,存放在陰涼處。調尿液的PH直到6.5以下。夏季尿液易變質,為了防尉面增加0.8的苯酚。每次收集的尿液應
在8小時內處理完。
2沉澱處理:尿液保持在10℃以下,用氫氧化鈉調PH值到8.5,攬拌均勻,靜置l小時,沉澱後用膠皮管虹吸抽出上層清液,酸化到PH
值5—5.5。
3硅藻土吸附。按酸化後尿液量l的比例,加入預先清洗處理成中性
的硅藻土,在5℃下吸附】小時。
4洗脫。先把硅藻土吸附物用5℃的涼水洗滌1次,然後裝入硅藻土柱(柱比1。1)中,用0.02%的氨水洗滌,使洗出液由渾變清,立即再用0.02的氨水和0.1m的氯化鈉溶液洗滌。當硅藻土柱上淌出
的水由清交渾時,即開始收集尿激酶。
註:一般從1000公斤人尿中可收集粗製尿激酶液l5升目前粗製尿激酶液主要是由設備較全的生物化學制葯廠製成尿激酶精品。
❷ 多少尿液能提取多少尿激酶政府支持收集尿液提取尿激酶嗎
一噸尿液可以提取90克左右的粗品,尿激酶粗品價格一個億單位5000元.
❸ 尿激酶的製造方法
尿激酶系70年代發展的治療血栓疾病的新葯,是此類葯物中安全度 大和療效好的品種,國外僅有少數國家有生產。其生產方法一般採用塑料桶收集新鮮男性尿液後迅速冷卻,成桶運回工廠進行分離、提純,製得高純度靜脈用制劑。此方法操作繁雜,耗費人力,設備要求高,收率低,葯價十分昂貴。為了填補國內空白,尋找一個從人尿中簡便而低成本的制備高純度尿激酶的工業生產方法,上海醫葯工業研究院於 1974年開始進行了本課題的研究。 在研究中創造了尿激酶連續自動吸附裝置,並研究選用了國產724樹脂作吸附劑和特定的吸附洗脫條件。可在公共廁所就地吸附,避免了收集尿源的繁雜過程。研究成功高純度尿激酶製取新工藝中發現了一種文獻中從未報導過的尿激酶復合物,找出了該復合物的解離方法,從而,使尿激酶總收率提高到50%以上。高分子量尿激酶含量在90% 以上,總收率超過25%,純度35000~50000單位/毫克蛋白。高鹽濃度過濾除菌法突 破了國外嚴格保密的技術關鍵,尿激酶回收達100%。解決了尿激酶穩定性制劑的配方, 達到國外同類產品的水平。臨床使用於各種血栓症,總有效率達70%,與國外報導的 相似。 尿激酶的研究成功,填補了我國的空白,為我國心腦血管疾病提供了一個療效確切 的新葯。生產工藝簡便,效率高,成本低。鑒定意見:上海醫工院創制的以國產724樹脂為吸附劑的新工藝,既可以成桶收 尿吸附,又可以採用自行設計研製成功的連續式吸附裝置在大中型公共廁所中就地提取 尿激酶,每噸小便可提得尿激酶300萬單位。該裝置具有收尿方便,有益於產品質量,大 大節約了勞動力,設備簡單,成本低廉的特點;並能採用國產DEAE纖維素與724樹 脂進行精製提純。該工藝經中試證明是可行的,收率達30%以上,質量達國外同類產品 水平,純度在臨床階段為1.5萬國際單位/毫克蛋白,後經研究達3.5萬國際單位/毫克 蛋白。
❹ 在線等!急...請問從尿激酶粗品中提取尿激酶大致生產過程是什麼會產生哪些廢棄物有污染嗎
污染是有的!只要處理得當就沒事!
❺ 尿激酶粗品生產中尿激酶粗品克單位效價低是怎麼回事呢
主要與吸附吸附後沖洗、硅藻土過濾後收集的數量等因素有關。揚州艾迪生物科技有限公司免費男性尿蛋白粗品技術咨詢服務
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❻ 本人想搞尿激酶的生產,請求幫助,謝謝!
尿激酶是從男性尿中提取的一種生化葯物,廣泛應用於治療新鮮血栓性閉塞性疾病、肺栓塞、急性腦血栓形成,腦血管栓塞以及視網膜中央靜脈血栓形成。我國由於人口眾多,資源豐富,勞動力價格低廉,因而尿激酶粗品的生產遍及全國各地。在生產的尿激酶粗品中,僅有一部分經過精製成精品出口,不少粗品直接出口,讓外商賺取了大量的利潤。研究純化尿激酶的技術與方法以及提高純化過程中各道工序尿激酶的收率,提高尿激酶產品的高附加值,利用再生資源,出口創匯,利國利民,具有顯著的經濟與社會效益和重要意義。
一、主要材料
尿激酶粗品(硅膠法生產),甘氨酸(C·P)、硫酸(A·R)、氫氧化鈉(A·R)、鹽酸
(A·R)、磷酸二氫鈉(C·P)、磷酸氫二鈉,疊氮化鈉(A·R),714樹脂,CM一S。
二、試驗過程與技術條件
(一)解析
1.取尿激酶粗品200克(經測定,比活為325iu/mgP),懸浮於8倍量的。.SM甘氨酸緩沖液中,尿激酶濃度在45ooiu/ml,維持低溫,攪拌75分鍾,靜置45分鍾,上清液經虹吸與底部沉澱分開。
2.虹吸上清液後的沉澱加入1倍量的甘氨酸緩沖液,處理同上,取上清液.
3.合並兩次上清液,在低溫下緩慢加入SNH:50.調PHlo.。士。.1(取樣測定價).
(二)714樹脂脫色
1.按解析液效價每億單位用1.4kg樹脂上柱,樹脂用蒸餾水洗幾個床體積後備用。
2.將PH10·。的解析液上柱,流速控制在1.8~2.oml/cmZ分,收集流出液,上柱完畢後,,柱用一個床體積的低溫蒸餾水洗滌.
3.合並柱流出液用sNHZSO『調PH為10.0士0.1.
(三)超濾處理
1.將PH為10.。的脫色液用超濾器超濾脫鹽,超濾濃縮至原體積的六分之一左右。
2.濃縮液中加入低溫蒸餾水,稀釋至電導4.smV(10℃)。
3.再次濃縮至六分之一體積。
4.二次濃縮液中加人低溫。.18M、PH6.8磷酸緩沖液及蒸餾水稀釋至原體積,二者加入的比例應使稀釋液電導為4.8士0.lmV(10℃時)。
5.再用SNHZSO.調PH為6.8士0.1。
6.再次校正電導為4.8士。.lmV(10℃)。
(四)CM一S交換凝膠純化(在低溫下進行)
1.CM一S預處理:CM一S用燕餾水浸泡後,分別用Na0H和HCL處理,然後用0.18M、
PH6.8磷酸緩沖液平衡,過濾;平衡過的CM一S懸浮於含0.08%NaN:,0.18M、PH6.8磷酸緩沖液中,低溫冷藏。
2.CM一S吸附
(1)經超濾PH6.8電導4.smV的尿激酸溶液,按skg/億單位加入經平衡的CM一S,攪
拌兩小時,防止起泡,靜置一小時,虹吸去除上清液。
(2)吸附尿激酶的CM一S上有機玻璃柱,防止柱內起泡,柱面平整.
3.洗滌去除雜蛋白
(1)CM一S上柱後用含0.3%NaN3,PH6.8、0.18M磷酸緩沖液洗滌,流速為1.8~
2.。而/cmZ分左右,流至流出液效價低於10oiu/耐,28onm光吸收峰低於。.04E/已。
(2)改用1.SMPH6.8磷酸緩沖液洗滌一個半床體積,流速不變,流出液280nm吸收峰應降至0.03以下。
4.尿激酸洗脫
(1)洗滌完畢後用0.08MP、H8.8磷酸氫二鈉、0.95M氛化鈉緩沖液洗脫,流速。.4ml/cmZ分,測定流出液效價及280nm吸收峰,將有活力流出液合並,使混合液濃度在S000in/ml以上。
(2)混合液調PH6.。~7.0.抽取試樣化驗後,裝於二升的塑料瓶內,乾冰速凍,一22℃以下低溫保存。
(五)尿激酸〔UK)效價和比活的測定
1.測試原理
(1)主要試劑與器材
恆溫水浴鍋、刻度鬧鍾、熒光燈、UK效價坐標紙、牛凝血酶(T)、牛纖維蛋白溶酶原(PG)、牛纖維蛋白(FG)、UK標准品、Barbiton一Na,Tri。,NaZEDTA,Nael
(2)試劑配製
T:牛凝血酶40BP(衛生部葯品生物製品檢驗所),每支加6.6mlBarbiton一Na緩沖液。
PG:牛纖維蛋白溶酶原22BP(衛生部葯品生物製品檢驗所),每支加24mlTris緩沖液。
PG一T:取PG6.6nil與配好的6.耐T等體積混勻,放入50血三角燒瓶中,扎口備用。
FG:片纖維蛋白原,12sBP(衛生部葯品生物製品檢驗所),每支加18mlBarbiton一Na
緩沖液。
(3)標准UK稀釋
將標准品(loooiu/支)用巴比妥溶液稀釋成60in/ml。
(4)繪制標准曲線
①取5時試管4支,作記號並分別加入FGO.3耐;
②分別加入稀釋標准UK溶液0.4、0.3、0.2、0.lm卜
③分別加巴比妥溶液0.6、0.7、0.3、0.9回;
④分別加入0.4mlPG一T,搖勻,立即放入37℃恆溫水溶鍋,記時;
⑤觀察氣泡上升情況,體積一半時記終止時間;
⑥以單位效價為橫坐標,時間為縱坐標,繪制標准曲線,要求至少有三點在一條直線上。
(5)樣品檢測
①繼標准曲線後,在同一條件下,同一試劑情況下,進行樣品檢測;
②分別加FGO.3ml,巴比妥緩沖液0.gml,PG一TO.4mh
③其餘步驟同前。
(6)測O.D值
將加酸後的樣品稀釋10倍,然後測其O·D值。
(7)計算效價與比活
①根據測試樣品的氣泡上升時間,在標准曲線上找出相應的點的效價,乘以20得出樣品
實際效價。
②總效價~單位效價(iu/mDx總體積(ml)
③比活~平均效價xl.75/0·D
2.對產品收率和比活的測定
①對解析液進行總效價和比活測定,結果如下:
總效價:2489萬單位,比活:325iu/mgP
②精製後總效價和比活
總效價:1082萬單位;比活:」660iu/mgP
③精製收率:41%
三、討論
1.尿激酶通常以兩種分子形式存在,即分子量36。。。和54000,大分子量的尿激酶活性
較小分子量尿激酶活性強得多,提高比活,一是要去除雜蛋白,二是要除去小分子量尿激酶。
分離出的小分子量尿激酶可以另作回收純化處理。
2.尿激酶作為一種活性物質,在純化過程中要注意防止失活。我們在研究過程中,先是
熟練地掌握尿激酶效價和比活的測定步驟,然後不斷改變操作條件,通過對每一道工序中影
響尿激酶收率、比活提高因素的研究,逐步摸索出最佳技術條件。
3.對CM一S吸附後的母液及CM一S洗脫液中效價大於200iu/ml的部分要進行超濾鹽
析回收,可用作粗品投料。
用於提取尿激酶的男性尿液,其pH值<6.5,電導為20~3OMO一』,細菌總數<1000
個/ml,用3N氫氧化鈉調pH~8·5一9.加入硅藻土吸附並沉澱後,濾取硅藻土,用清水攪拌洗滌,甩干裝入交換柱,用氨水淋洗,在洗脫液中加入飽和磷酸二鈉,調pH=8.0,再加氯化鈉調電導至22Mn,通過季錢乙基,交聯聚糖凝膠層析柱,再用磷酸緩沖液洗脫,合並流出液與洗脫液,加醋酸調pH一4.2,調電導至16~17Mn一』,通過甲基纖維素層析柱,用氨水洗脫,收集洗脫液,加水透析,經離心分機冷凍乾燥得到尿激酶成品。上述得到的僅為尿激酶粗品,還可用右旋糖配、肝素、人血清白蛋白等加以修飾精製,以增強其生化穩定性,延長在人體內的作用時間。除用上述分離法製取尿激酶外,還可以採用中性蛋白酶降解的辦法製取尿激酶。國外還有採用DNA重組的辦法,在大腸桿菌中培植尿激酶原。在提取尿激酶的同時還可利用剩餘尿液提取人尿白蛋白.
尿激酶屬鹼性蛋白酶無抗原性,無毒性和其它副作用,可臨床用於肺栓塞、冠心病、腦血栓、心肌梗塞、玻璃體混濁、眼底出血、顱內血腫、靜脈栓塞以及急
(慢)性腎小球腎炎等疾病的治療,還可用於治療纖維蛋白沉著引起的疾病,並可用作抗癌輔助葯物。此外,尿激酶還可用來開發保健飲料、太空飲料及化妝品等。作為鄉鎮企業,開發尿激酶產品,不僅投資少,效益高,能耗低,且原料易得,工藝簡單,無毒無害無污染,值得大力提倡.
❼ 提取尿激酶必須是男人尿嗎
提取尿激酶女人也可以,只是收集不方便。尿激酶,是一種溶血栓葯物.男女的尿都有,男的容易收集而已。