Ⅰ 水中大腸桿菌的檢測方法
大腸菌群測定的操作細則
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100ml(g)檢樣內大腸菌群最可能數(mpn)表示。
1
設備和材料
1.1
溫箱:36±1℃。
1.2
冰箱:0~4℃。
1.3
恆溫水浴
:44.5±0.5℃。
1.4
天平。
1.5
顯微鏡。
1.6
均質器或乳缽。
1.7
平皿:直徑為90mm。
1.8
試管。
1.9
吸管。
1.10
廣口瓶或三角燒瓶:容量為500ml。
1.11
玻璃珠:直徑約5mm。
1.12
載玻片。
1.13
酒精燈。
1.14
試管架。
2
培養基和試劑
2.1
乳糖膽鹽發酵管:按gb
4789.28中4.9規定。
2.2
伊紅美藍瓊脂平板:按gb
4789.28中4.25規定。
2.3
乳糖發酵管:按gb
4789.28中4.10規定。
2.4
ec
肉湯:按gb
4789.28中4.11規定。
2.5
磷酸鹽緩沖稀釋液:按gb
4789.28中3.22規定。
2.6
生理鹽水。
2.7
革蘭氏染色液:按gb
4789.28中2.2規定。
3
操作步驟
3.1
檢樣稀釋
3.1.1
以無菌操作將檢樣25ml(或g)放於有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8
000-10
000
r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2
用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3
另取1ml滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1ml滅菌吸管。
3.1.4
根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2
乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖
膽鹽發酵管內,接種量在1ml以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1ml及1ml以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃
溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
3.3
分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃
溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4
證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置
36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5
報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查mpn檢索表,報告每100ml(g)大腸菌群的mpn值。
4
糞大腸菌群(faecal
coliform)
4.1
用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於ec肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於ec肉湯液面),培養24±2h,經培養後,如所有ec肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的ec肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置
培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2
結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查mpn檢索表,報告每100ml(g)糞大腸菌群的mpn值。
Ⅱ 廢水中糞大腸菌群的標準是多少啊
我國廢水排放標準的糞大腸指標為1000個/升。國家規定「糞大腸菌群數」一級排放A標准為10³個/L,一級排放A標准為10^4個/L,二級排放標准為10^4個/L.三級不做規定。
(2)醫院污水糞大腸桿菌測擴展閱讀:
檢驗注意事項
(1)將接種好的樣品放人恆溫水浴箱或隔水式恆溫培養箱時,箱內溫度一定要求達到所要求的溫度(44±1℃)時,方可放入。如用恆溫水浴箱其水面要高於接種物面,放濾膜的培養皿要沉到水浴箱底部。
(2)MFC培養基中苯胺藍的純度和質量往往影響菌落的顏色,根據試驗結果用進口苯胺藍加O.1g,用國產苯胺藍加0.2g,培養出的糞大腸菌菌落顏色較典型。但國產苯胺藍的性能是否同樣穩定尚不能肯定。因此,制好的培養基在使用前,最好先接種典型糞大腸菌,以觀察對比菌落的顏色。
玫紅酸高壓後會分解,配好的試液應在2-lO℃保存不超過2周,如顏色由暗紅變成棕色沉澱時應棄去。如雜菌污染少,且加與不加玫紅酸對菌落計數無影響時,可不加。.
(3)在濾膜上生長的菌落除挑取藍色菌落外,淺藍色菌落或淺藍色中心較深的菌落也應挑取。
(4)生活飲用水通常都是經氯處理消毒的,水中含有一定量的余氯,使大腸菌群處於受損或受抑制狀態,在採集水樣時應加硫代硫酸鈉脫氯,使此受損的細菌得以復甦與修復,從而避免計數結果偏低甚至假陰性出現。
(5)采樣後水樣的正確保存很重要,如保存不當可使檢樣中的大腸菌群細菌死亡或在一定條件下再生長,這些都將影響檢驗結果的准確性。檢驗室接到水樣後,應立即檢驗。如因故不能檢驗時,應立即置於冰箱內並於2小時內檢驗。
關於水樣儲存時間與溫度對大腸菌群數的影響,Lonsans等報告認為水樣中大腸菌群數不多時,則冰箱保存與室溫保存相差不大;如水樣中菌數多時,則在室溫(23-39.5℃)內保存比在冰箱(0-1O℃)中保存菌數的減少速度快。
參考資料來源:
網路-糞大腸菌
Ⅲ 水中糞大腸菌群的測定
化妝品檢測項目中糞大腸菌群的檢測流程:
10g/mL樣品+90mL滅菌生理鹽水 →10mL+10mL雙倍乳糖膽(含中和劑)培養基→糞大腸菌群 44.5℃,48h培養
註:在化妝品檢測項目中,如果樣品含有油脂性的成分,如精油,在樣品前處理中需加入液體石蠟、吐溫80、生理鹽水進行均質,使樣品能夠均勻分散開來。
糞大腸菌群又是一個什麼樣的微生物呢?下面我們來詳細介紹下:
大腸菌群:大腸菌群並非細菌學分類命名,而是衛生細菌領域的用語,它不代表某一個或某一屬細菌,而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌,這些細菌在生化及血清學方面並非完全一致。
定義(GB2010):在一定培養條件下能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌。
糞大腸菌群:大腸菌群的一種,又稱耐熱大腸菌群,培養溫度:44.5±0.5℃,糞大腸菌群是化妝品檢測項目中必檢的微生物項目。
大腸埃希氏菌:((Escherichia. coli )通常稱為大腸桿菌。根據不同的生物學特性將致病性大腸桿菌分為5類:
致病性大腸桿菌(EPEC)、
腸產毒性大腸桿菌(ETEC)、
腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、
腸出血性大腸桿菌(EHEC)、
腸黏附性大腸桿菌(EAEC)。
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這個是先激活桿菌的活性,因為37度是人體體溫,所以要先這么做的
Ⅶ 水體衛生檢查中為什麼要用大腸桿菌做檢驗指標
樓上說的都有道理,原因如下:
首先大腸桿菌是致病菌,人體攝入會導致腹瀉,感染等疾病。
其次,更重要的是,大腸桿菌是人類和其它動物排泄物中的常見菌。數量巨大,且在自然水體中存活能力強。而其它的致病菌雖然致病能力非常強,但在自然水體中的存活能力差,數量有限,檢測困難,如沙門氏菌,志賀氏菌等,而這些病菌往往和大腸桿菌同時存在於污水中。因此水質監測中用大腸桿菌作為代表檢測水受人畜糞便等排泄物污染的程度。
Ⅷ 縣級及縣級以上綜合醫療機構污水中糞大腸菌群腸道致病菌腸道病毒總余氯的排放要求
縣級及縣級以上綜合性醫療機構污水中,糞大腸菌群、腸道致病菌、腸道病毒和回總余氯的排放要答求分為兩種情況:
1、處理後的污水通過下水道,進入城市污水處理廠的,其糞大腸菌群5000MPN/L;不得檢出腸道致病菌;不得檢出腸道病毒;總余氯≤6-9mg/L;
2、處理後的污水進入自然水體的,其糞大腸菌群500MPN/L;不得檢出腸道致病菌;不得檢出腸道病毒;總余氯≤0.5mg/L
Ⅸ 大腸菌群檢測方法
GB4789.3-2016《食品安全國家標准食品微生物學檢驗大腸菌群計數》中的規定操作步驟:
1、乳糖發酵試驗:樣品稀釋後,選擇三個稀釋度,每個稀釋度接種三管乳糖膽鹽發酵管。36±1℃培養48±2h,觀察是否產氣。
2、分離培養:將產氣發酵管培養物轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,36±1℃培養18-24h,觀察菌落形態。
3、證實試驗:挑取平板上的可疑菌落,進行革蘭氏染色觀察。同時接種乳糖發酵管36±1℃培養24±2h,觀察產氣情況。
SN0169-92《中華人民共和國進出口商品檢驗行業標准出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法》規定操作:
1、推測試驗:樣品稀釋後,選擇三個稀釋度,每個稀釋度接種三管LST肉湯。36±1℃培養48±2h,觀察是否產氣。
2、證實試驗:將產氣管培養物接種煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中,36±1℃培養48±2h,觀察是否產氣。以BGLB產氣為陽性。查MPN表,報告每ml(g)樣品中大腸菌群的MPN值。
大腸菌群並非細菌學分類命名,而是衛生細菌領域的用語,它不代表某一個或某一屬細菌,而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌,這些細菌在生化及血清學方面並非完全一致。一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。
大腸菌群是作為糞便污染指標菌提出來的,主要是以該菌群的檢出情況來表示食品中有否糞便污染。大腸菌群數的高低,表明了糞便污染的程度,也反映了對人體健康危害性的大小。
糞便是人類腸道排泄物,其中有健康人糞便,也有腸道患者或帶菌者的糞便,所以糞便內除一般正常細菌外,同時也會有一些腸道致病菌存在,因而食品中有糞便污染,則可以推測該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性,潛伏著食物中毒和流行病的威脅,必須看作對人體健康具有潛在的危險性。