Ⅰ 植物全磷、全氮、全鉀的測定
一、植物全氮測定
（一）H2SO4-H2O2消煮法
1、適用范圍
本方法不包括硝態氮的植物全氮測定,適合於含硝態氮低的植物樣品的測定。
2、方法提要
植物中的氮、磷大多數以有機態存在,鉀以離子態存在。樣品經濃H2SO4和氧化劑H2O2消煮,有機物被氧化分解,有機氮和磷轉化成銨鹽和磷酸鹽,鉀也全部釋出。消煮液經定容後,可用於氮、磷、鉀的定量。採用H2O2為加速消煮的氧化劑,不僅操作手續簡單快速,對氮、磷、鉀的定量沒有干擾,而且具有能滿足一般生產和科研工作所要求的准確度。但要注意遵照操作規程的要求操作,防止有機氮被氧化成N2氣或氮的氧化物而損失。
3、試劑
（1）硫酸(化學純,比重1.84);
（2）30% H2O2(分析純)。
4、主要儀器設備。消煮爐，定氮蒸餾器。
5、操作步驟
稱取植物樣品(0.5mm)0.3～0.5g(稱准至0.0002g)裝入100ml開氏瓶或消煮管的底部,加濃H2SO45ml,搖勻(最好放置過夜),在電爐或消煮爐上先小火加熱,待H2SO4發白煙後再升高溫度,當溶液呈均勻的棕黑色時取下。稍冷後加班10滴H2O2(3),再加熱至微沸,消煮約7～10min,稍冷後重復加H2O2,,再消煮。如此重復數次,每次添加的H2O2應逐次減少, 消煮至溶液呈無色或清亮後,再加熱10min,除去剩餘的H2O2。取下冷卻後,用水將消煮液無損地轉移入100ml容量瓶中,冷卻至室溫後定容(V1)。用無磷鉀的干濾紙過濾,或放置澄清後吸取清液測定氮、磷、鉀。每批消煮的同時,進行空白試驗,以校正試劑和方法的誤差。
6、注釋
（1）所用的H2O2應不含氮和磷。H2O2在保存中可能自動分解,加熱和光照能促使其分解,故應保存於陰涼處。在H2O2中加入少量H2SO4酸化,可防止H2O2分解。
（2）稱樣量決定於NPK含量,健狀莖葉稱0.5g,種子0.3g,老熟莖葉可稱1g,若新鮮莖葉樣,可按干樣的5倍稱樣。稱樣量大時,可適當增加濃H2SO4用量。
（3）加H2O2時應直接滴入瓶底液中,如滴在瓶勁內壁上,將不起氧化作用,若遺留下來還會影響磷的顯色。
（二）水楊酸-鋅粉還原- H2SO4-加速劑消煮法
1、適用范圍
包括銷態氮的植物全氮測定,適合於硝態氮含量較高的植物樣品的測定。
2、方法原理
樣品中的硝態氮在室溫下與硫酸介質中的水楊酸作用,生成硝基水楊酸,再用硫代硫酸鈉及鋅粉使硝基水楊酸還原為氨基水楊酸.然後按H2SO4-加速劑消煮法進行消煮法進行消煮樣品,使樣品中全部氮轉化為銨鹽。
3、試劑
（1）固體Na2S2O3;
（2）還原鋅粉(AR);
（3）水楊酸-硫酸:30g水楊酸溶於1L濃硫酸中。也可以該用含苯酚的濃硫酸:40g苯酚溶於1L濃硫酸中。
4、儀器設備。同上。
5、操作步驟
稱取磨細烘乾樣品(過0.25mm篩)0.1000～0.2000g或新鮮莖葉樣品1.000～2.000g,置於100ml開氏瓶或消煮管中,先用水濕潤內樣品(烘乾樣),然後加水楊酸-硫酸10ml,搖勻後室溫放置30min,加入Na2S2O3約1.5g,鋅粉0.4g和水10ml,放置10 min,待還原反應完成後,加入混合加速劑2g,按土壤全氮測定方法進行消煮, 消煮完畢,取下冷卻後,用水將消煮液無損地轉移入100ml容量瓶中,冷卻至室溫後定容(V1)。用於濾紙過濾,或放置澄清後吸取清液測定氮。每批消煮的同時,進行空白試驗,以校正試劑和方法的誤差。
（三）消煮液中銨的定量(凱氏法)
1、適用范圍。適合於各種植物樣品消煮液中氮的定量。
2、方法原理
植物樣品經開氏消煮、定容後,吸取部分消煮液鹼化,使銨鹽轉變成氨,經蒸餾,用H3BO3吸收,硼酸中吸收的氨可直接用標准酸滴定,以甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑指標終點。
3、試劑
（1）400g/L NaOH溶液。
（2）20g/L H3BO3-指示劑溶液。
（3）酸標准溶液[c(HCL或1/2H2SO4)=0.01mol/L]。
4、儀器設備。蒸餾裝置或半自動蒸餾儀。
5、蒸餾
檢查蒸餾裝置是否漏氣和管道是否潔凈後,吸取定容後的消煮液5.00～10.00mL (V2,含NH4-N約1mg),注入半微量蒸餾器的內室。另取150ml三角瓶,內加5 ml 2% H3BO3指示劑溶液(若為包括硝態氮的待測液,應加約6 mL的400g/L NaOH溶液),通過蒸氣蒸餾(注意開放冷凝水,勿使餾出液溫度超過40℃)。待餾出液體積約達50～60ml時,停止蒸餾,用少量已調節至pH4.5的水沖洗冷凝管末端。用酸標准溶液滴定餾出液至由藍綠色突變為紫紅色(終點的顏色應和空白測定的滴定終點相同)。與此同時進行空白測定的蒸餾、滴定、以校正試劑和滴定誤差。
6、結果計算
ω(N), %=c(V-V0)×0.014×D×100/m;
式中: ω(N)——植物全氮的質量分數,%;
c——酸標准溶液的濃度,mol/L;
V——滴定試樣所用的酸標准液體積,ml;
V0——滴定空白所用的酸標准液, ml;
0.014——N的摩爾質量,kg/mol;
D——分取倍數(即消煮液定容體積V1/吸取測定的體積V2)。
二、植物全磷的測定
（一） 釩鉬黃吸光光度法
1、適用范圍。適合於含磷量較高的植物樣品的測定(如籽粒樣品)。
2、方法原理
植物樣品經濃H2SO4消煮使各種形態的磷轉變成磷酸鹽。待測液中的正磷酸與偏釩酸和鉬酸能生成黃色的三元雜多酸,其吸光度與磷濃度成正比,可在波長400～490nm處用吸光光度法測定。磷濃度較高時選用較長的波長,較低時選用較短波長。
此法的優點是操作簡便,可在室溫下顯色,黃色穩定,在HNO3、HClO4和H2SO4等介質中都適用,對酸度和顯色劑濃度的要求也不十分嚴格,干擾物少,在可見光范圍內靈敏度較低,適測范圍廣(約為1～20mg/L P),故廣泛應用於含磷較高而且變幅較大的植物和肥料樣品中磷的測定。
3、試劑
（1）釩鉬酸銨溶液:25.0g鉬酸銨[(NH4)6Mo7O2·4H2O,分析純]溶於400mL水中,必要時可適當加熱,但溫度不得超過60℃。另將1.25g偏釩酸銨(NH4VO3,分析純)溶於300mL沸水中,冷卻後加入250mL濃HNO3(分析純)。將鉬酸銨溶液緩緩注入釩酸銨(溶液中,不斷攪勻,最後加水稀釋至1L,貯於棕色瓶中。
（2）NaOH溶液(c=6mol/L):24gNaOH溶於水, 稀釋至100ml。
（3）二硝基酚指示劑(ρ=2g/L):0.2g2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶於100ml水中。
（4）磷標准溶液ρ[(P)=50mg/L]:0.2195g(乾燥的KH2PO4(分析純)溶於水,加入5ml濃HNO3,於1L容器瓶中定容。
4、主要儀器設備。分光光度計。
5、分析步驟
准確吸取定容,過濾或澄清後的消煮液5～20ml(V2,含P0.05～0.75mg)放入50ml容量瓶中,加2滴二硝基酚指示劑,滴加6mol/LNaOH中和至剛呈黃色,加入10.00ml釩鉬酸銨試劑,用水定容(V3)。15min後,用1cm光徑的比色槽在波長440nm處進行測定,以空白溶液(空白溶液消煮液按上述步驟顯色),調節儀器零點。
校準曲線或直線回歸方程:准確吸取50mg/L P標准液0, 1, 2.5, 7.5, 10, 15ml分別放入50mL容量瓶中,按上述步驟顯色,即得0, 1.0, 2.5 , 5.0, 7.5, 10, 15 ml P的標准系列溶液,與待測液一起進行測定,讀取吸光度,然後繪制校準曲線或求直線回歸方程。
6、結果計算
ρ(P)×V3×(V1/V2)×10-4
ω(P)=
m
式中: ω(P) ——植物磷的質量分數,%;
ρ(P) ——從校準曲線或回歸方程求得的顯色液中磷的質量濃度, mg/L;
V1——消煮液定容體積, ml;
V2——吸取測定的消煮液體積, ml;
V3——顯色液體積, ml;
m——稱樣量,g;
10-4——將mg/L濃度單位換算為百分含量的換算因數。
7、注釋
（1）顯色液中ρ(P)=1~5 mg/L時,測定波長420nm;5～20mg/L用490nm。待測液中Fe3+濃度高應選用450nm,以清除Fe3+干擾。校準曲線也應用同樣波長測定繪制。
（2）一般室溫下,溫度對顯色影響不大,但室溫太低(如<15℃)時,需顯色30min。穩定時間可達24h。
（3）如試液為HCl,HClO4介質,顯色劑應用HCl配製;試液為H2SO4介質, 顯色劑也用H2SO4配製。顯色液酸的適宜濃度范圍為0.2～1.6 mol/L,最好是0.5～1.0 mol/L。酸度高顯色慢且不完全,甚至不顯色;低於0.2 mol/L易產生沉澱物, 干擾測定。鉬酸鹽在顯色液中的終濃度適宜范圍為1.6×10-3～10-2mol/L, 釩酸鹽為8×10-5～2.2×10-3 mol/L。
4、此法干擾離子少。主要干擾離子是鐵,當顯色液中Fe3+濃度超過0.1%時,它的黃色有干擾,可用扣除空白消除。
（二）鉬銻抗吸光光度法
1、適用范圍
適合於含磷量較低的植物樣品的測定(如莖稈樣品等)。
2、方法提要
植物樣品經濃H2SO4消煮使各種形態的磷轉變成磷酸鹽。在一定酸度下,待測液中的正磷酸與鉬酸銨和酒石酸銻鉀生成一種三元雜多酸,後者在室溫下能迅速被抗壞血酸還原為藍色絡合物,可用吸光光度法測定。
3、試劑
（1）6mol/L NaOH溶液
（2）0.2%二硝基酚指示劑
（3）2mol/L(1/2 H2SO4)硫酸溶液:5.6mL濃H2SO4加水至100mL。
（4）鉬銻貯存液: 濃H2SO4(分析純)126 ml緩慢地注入約400 ml水中,攪拌,冷卻。10.0g鉬酸銨(分析純)溶解於約60℃的300ml水中,冷卻。然後將H2SO4溶液緩緩倒入鉬酸銨溶液中,再加入100 ml0.5%酒石酸銻鉀(KSbOC4O6·1/2H2O, 分析純) 溶液,最後用水稀釋至1L,避光貯存。此貯存液含鉬酸銨為1%,酸濃度為c(1/2 H2SO4)=4.5 mol/L
（5）鉬銻抗顯色劑:1.50g抗壞血酸(C6H8O6,左旋,旋光度+21～+22, 分析純) 溶於100ml鉬銻貯存液中,此液須隨配隨用,有效期一天,冰箱中存放,可用3～5天。
（6）磷標准工作液[ρ(P)=5 mg/L]:吸取100mg/L P標准貯存液稀釋20倍,即為5 mg/L P標准工作溶液,此溶液不宜久存。
4、主要儀器設備。同上
5、分析步驟
吸取定容過濾或澄清後的消煮液2.00～5.00ml(V2,含P5～30ug)於50ml容量瓶中, 用水稀釋至約30ml,加1～2滴二硝基酚指示劑,滴加6mol/L NaOH溶液中和至剛呈黃色,再加入1滴2mol/L(1/2 H2SO4)溶液,使溶液的黃色剛剛褪去,然後加入鉬銻抗顯色劑5.00ml,搖勻,用水定容(V3)。在室溫高於15℃的條件下放置30min後,用1cm光徑比色槽在波長700nm處測定吸光度,以空白溶液為參比調節儀器零點。
校準曲線或直線回歸方程: 准確吸取ρ(P)= 5mg/L標准工作溶液0, 1, 2, 4, 6, 8 ml,分別放入50mL容量瓶中,加水至30ml,同上步驟顯色並定容, 即得0,按0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 mg/L P標准系列溶液, 與待測液同時測定,讀取吸光度,然後繪制校準曲線或直線回歸方程。
6、結果計算:同1。
7、注釋
根據分光光度計性能,可選用650～890nm波長處測定,880～890nm處靈敏度高
三、植物全鉀的測定—火焰光度法
（一）適用范圍。適合於植物樣品消煮液中鉀含量的測定。
（二）方法提要
植物樣品經消煮或浸提,並經稀釋後,待測液中的K可用火焰光度法測定。
（三）試劑
K標准溶液[ρ(K)= 100mg/L] :0.1907gKCl(分析純),在105～110℃乾燥2h)溶於水,於1L容量瓶中定容,存於塑料瓶中。
（四）主要儀器設備。火焰光度計。
（五）分析步驟
吸取定容後的消煮液5.00～10.00ml(V2)放入50mL容量瓶中,用水定容(V1),直接在火焰光度計上測定,讀取檢流計讀數。
校準曲線或直線回歸方程 准確吸取100mg/L K標准溶液0, 1, 2.5, 10, 20 ml, 分別放入50mL容量瓶中,加水定容的空白消煮液5或10ml(使標准溶液中的離子成分和待測液相近),加水定容。即得0, 2, 5, 10, 20, 40 mg/L K標准系列溶液。以濃度最高的標准溶液定火焰光度計檢流計的滿度(一般只定到90),然後從稀到濃依次進行測定,記錄檢流計讀數,以檢流計讀數為縱坐標,鉀濃度為橫坐標繪制校準曲線或求直線回歸方程。
（六）結果計算
ρ(K)×V3×(V1/V2)×10-4
ω(K)=
m
式中: ω(K) ——植物鉀的質量分數,%;
ρ(K) ——從校準曲線或回歸方程求得的測讀液中K的濃度, mg/L;
V1——消煮液定容體積, ml;
V2——吸取體積, ml;
V3——測讀液定容體積, ml;
m——干樣質量,g;
10-4——將mg/L濃度單位換算為百分含量的換算因數。
Ⅱ 有機肥氮磷鉀的測試方法
有機肥中全氮、全磷、全鉀含量的測定
(一)待測液的制備
准確稱取磨細過篩的肥料樣品 0.5g（精確到 0.01g）於三角瓶中，加幾滴水潤濕，依次加入5.0mL濃硫酸和10~40滴有機肥消化加速劑（初次可加30滴左右，待確定大致用量後再增減），輕輕搖勻，在電爐上加熱消化至灰白色，取下冷卻。
小心用蒸餾水將處理好的溶液轉移到 100mL 容量瓶中，用蒸餾水定容。搖勻後過濾到三角瓶中（若三角瓶不幹，棄去最初濾液）。吸取濾液 2mL 到 100mL 容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻後即為待測液。
(二)測定步驟
1.測全氮含量
用吸管分別吸取蒸餾水 2mL（作空白用）、蒸餾水 2mL+1滴肥料養分混合標准儲備液（作標准用）、待測液 2mL於三個小試管中，分別依次加入：
肥料銨態氮1號試劑 4滴
肥料銨態氮2號試劑 4滴
肥料銨態氮3號試劑 4滴
搖勻，靜置 5 分鍾後，分別轉移到比色皿中，上機測定：
①撥動濾光片左輪使數值置 1，置空白液於光路中，按「比色」鍵，功能號切換至 1，按「調整＋」鍵或「調整－」鍵，使儀器顯示 100％。
②將標准液置於光路中，按「比色」鍵，功能號切換至 3，按調整鍵，使儀器顯示值為 9.00。
③再將待測液置於光路中，此時顯示值即為肥料全氮的含量（%）。
2.測全磷含量
用吸管分別吸取蒸餾水 2mL（作空白用）、蒸餾水 2mL+1滴肥料養分混合標准儲備液（作標准用）、待測液 2mL於三個小試管中，分別依次加入：
肥料磷試劑 7滴
搖勻，靜置 10 分鍾後，分別轉移到比色皿中上機測定：
①撥動濾光片左輪使數值置 1，置空白液於光路中，按「比色」鍵，功能號切換至 1，按「調整＋」鍵，儀器顯示≤100％；按「調整－」鍵，使液晶顯示 100％。
②按「比色」鍵，功能號切換至 3，將標准液置於光路中，按調整鍵，使液晶顯示值為 9.00。
③再將待測液置於光路中，此時顯示值即為肥料全磷的含量（%）。
3.全鉀含量的測定
用吸管分別吸取蒸餾水 2mL（作空白用）、蒸餾水 2mL+1滴肥料養分混合標准儲備液（作標准用）、待測液 2mL於三個小試管中，分別依次加入：
肥料鉀1號試劑 4滴
肥料鉀2號試劑 4滴
充分搖勻，分別轉移到比色皿中，上機測定：
①撥動濾光片左輪使數值置 6，置空白液於光路中，按「比色」鍵，功能號切換至 1，按「調整＋」鍵或「調整－」鍵，使儀器顯示 100％。
②將標准液置於光路中，按「比色」鍵，功能號切換至 3，按調整鍵，使儀器顯示值為 14.00。
③再將待測液置於光路中，此時顯示值即為肥料全鉀的含量（%）。
Ⅲ 動物糞便中氮的測定方法
可按NY525-2002《有機肥料》中有關全氮的測定方法進行。為了您方便起見，現將具體測定方法復制如下（如有疑問，請您查閱該標准原文）：
5.3 全氮含量測定
5.3.1 方法原理
有機肥料中的有機氮經硫酸 -過氧化氫消煮，轉化為銨態氮。鹼化後蒸餾出來的氨用硼酸溶液吸收，以標准酸溶液滴定，計算樣品中全氮含量。
5.3.2 試劑
5.3.2.1 硫酸（ρ1.84）。
5.3.2.2 30%過氧化氫。
5.3.2.3 氫氧化鈉：質量濃度為40%的溶液。
稱取40g氫氧化鈉（化學純）溶於100mL水中。
5.3.2.4 硼酸：質量濃度為2%的溶液。
稱取2g硼酸溶於100mL約60℃熱水中，冷卻，用稀鹼在酸度計上調節溶液 pH=4 5。
5.3.2.5 定氮混合指示劑：稱取0.5g溴甲酚綠和0.1g甲基紅溶於100mL95%乙醇中。
5.3.2.6 硫酸〔c（1/2H2SO4）=0.05mol/L〕或鹽酸〔c（HCl）=0.05mol/L〕標准溶液：配製和
標定，按照 GB/T601進行。
5.3.3 儀器、設備
通常實驗室用儀器設備和定氮蒸餾裝置。
5.3.4 分析步驟
5.3.4.1 試樣溶液制備
稱取過φ0.5mm篩的風干試樣0.5g（精確至0.0001g），置於開氏燒瓶底部，用少量水沖洗沾附在瓶壁上的試樣，加5.0mL硫酸（5.3.2.1）和1.5mL過氧化氫（5.3.2.2），小心勻，瓶口放一彎頸小漏斗，放置過夜。在可調電爐上緩慢升溫至硫酸冒煙，取下，稍冷後加15滴過氧化氫，輕輕搖動開氏燒瓶，加熱10min，取下，稍冷後分次再加5-10滴過氧化氫並分次消煮，直至溶液呈無色或淡黃色清液後，繼續加熱10min，除盡剩餘的過氧化氫。取下稍冷，小心加水至20mL-30mL，加熱至沸。取下冷卻，用少量水沖洗彎頸小漏斗，洗液收入原開氏燒瓶中。將消煮液移入100mL容量瓶中，加水定容，靜置澄清或用無磷濾紙干過濾到具塞三角瓶中，備用。
5.3.4.2 空白試驗
除不加試樣外，試劑用量和操作同5.3.4.1。
5.3.4.3 測定
5.3.4.3.1 蒸餾前檢查蒸餾裝置是否漏氣，並進行空蒸餾清洗管道。
5.3.4.3.2 吸取消煮清液50.0mL於蒸餾瓶內，加入200mL水。於250mL三角瓶加入10mL硼酸溶液（5.3.2.4）和5滴混合指示劑（5.3.2.5）承接於冷凝管下端，管口插入硼酸液面中。由筒型漏斗向蒸餾瓶內緩慢加入15mL氫氧化鈉溶液（5.3.2.3），關好活塞。加熱蒸餾，待餾出液體積約100mL，即可停止蒸餾。
5.3.4.3.3 用硫酸標准溶液或鹽酸標准溶液（5.3.2.6）滴定餾出液，由藍色剛變至紫紅色為終點。記錄消耗酸標准溶液的體積（mL）。空白測定所消耗酸標准溶液的體積不得超過0.1mL。
5.3.5 分析結果的表述
肥料的全氮含量以肥料的質量分數表示，按式（3）計算：
（V-V0）×c×0.014×D
全氮（N）（%）=————————————×100……………（3）
m×（1-X0）
式中：V———試液滴定消耗標准酸溶液的體積，單位為毫升（mL）；
V0———空白滴定消耗標准酸溶液的體積，單位為毫升（mL）；
c———酸標准溶液的濃度，單位為摩爾每升（mol/L）；
0.014———氮的摩爾質量，單位為克每摩爾（g/mol）；
D———分取倍數，定容體積 /分取體積，100/50；
m———稱取試樣質量，單位為克（g）；
X0———風干試樣的含水量。
所得結果應表示至兩位小數。
5.3.6 允許差
5.3.6.1 取兩個平行測定結果的算術平均值作為測定結果。
5.3.6.2 兩個平行測定結果允許絕對差應符合表 4要求。
表4
氮（N）/（%） 允許差 /（%）
<0.50 <0.02
0.50-1.00 <0.04
>1.00 <0.06