廢水中糞大腸全部陰性怎麼發結果

❶ 大腸桿菌的結果該怎麼報告和它的單位是什麼

大腸桿菌檢測結果是一個統計學處理值，其全稱是大腸桿菌最近似值（MPN），當全不發酵時，應按表報告＜30。
檢測環境和用具，應是定性法，當然只能報未檢出或陰性。
定量檢測還應按上法報。

❷ 水中大腸桿菌的檢測方法

大腸菌群測定的操作細則
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100ml(g)檢樣內大腸菌群最可能數(mpn)表示。
1
設備和材料
1.1
溫箱：36±1℃。
1.2
冰箱:0～4℃。
1.3
恆溫水浴
:44.5±0.5℃。
1.4
天平。
1.5
顯微鏡。
1.6
均質器或乳缽。
1.7
平皿:直徑為90mm。
1.8
試管。
1.9
吸管。
1.10
廣口瓶或三角燒瓶:容量為500ml。
1.11
玻璃珠:直徑約5mm。
1.12
載玻片。
1.13
酒精燈。
1.14
試管架。
2
培養基和試劑
2.1
乳糖膽鹽發酵管:按gb
4789.28中4.9規定。
2.2
伊紅美藍瓊脂平板:按gb
4789.28中4.25規定。
2.3
乳糖發酵管:按gb
4789.28中4.10規定。
2.4
ec
肉湯:按gb
4789.28中4.11規定。
2.5
磷酸鹽緩沖稀釋液:按gb
4789.28中3.22規定。
2.6
生理鹽水。
2.7
革蘭氏染色液:按gb
4789.28中2.2規定。
3
操作步驟
3.1
檢樣稀釋
3.1.1
以無菌操作將檢樣25ml(或g)放於有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8
000-10
000
r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2
用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3
另取1ml滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1ml滅菌吸管。
3.1.4
根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2
乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖
膽鹽發酵管內,接種量在1ml以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1ml及1ml以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃
溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
3.3
分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃
溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4
證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置
36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5
報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查mpn檢索表,報告每100ml(g)大腸菌群的mpn值。
4
糞大腸菌群(faecal
coliform)
4.1
用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於ec肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於ec肉湯液面),培養24±2h,經培養後,如所有ec肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的ec肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置
培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2
結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查mpn檢索表,報告每100ml(g)糞大腸菌群的mpn值。

❸ 糞大腸菌群的測定

糞大腸菌群

Fecal Coliforms
1 定義

本規范採用下列定義

糞大腸菌群（Fecal coliforms）系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在44.5℃±0.5℃培養24h～48h能發酵乳糖產酸並產氣。

該菌直接來自糞便，是重要的衛生指示菌。

3 儀器

3.1 恆溫水浴箱或隔水式恆溫箱：44℃±0.5℃。

3.2 溫度計。

3.3 顯微鏡。

3.4 載玻片。

3.5 接種環。

3.6 電磁爐。

3.7 三角瓶，250mL。

3.8 試管：15×150mm。

3.9 小倒管。

3.10 pH計或pH試紙。

3.11 高壓滅菌器。

3.12 滅菌吸管，10mL、1mL。

3.13 滅菌平皿：直徑90mm。

4 培養基和試劑

4.1 雙倍乳糖膽鹽（含中和劑）培養基

成分：蛋白腖 40g

豬膽鹽 10g

乳糖 10g

0.4％溴甲酚紫水溶液 5mL

卵磷脂 2g

吐溫80 14g

蒸餾水 1000mL

製法：將卵磷脂、吐溫80溶解到少量蒸餾水中。將蛋白腖、膽鹽及乳糖溶解到其餘的蒸餾水中，加到一起混勻，調pH到7.4，加入0.4％溴甲酚紫水溶液，混勻，分裝試管（每支試管中加一個小倒管）。68.95kPa（115℃ 10 lb）20min滅菌。

4.2 伊紅美蘭（EMB）瓊脂

成分：蛋白腖 10g

乳糖 10g

磷酸氫二鉀 2g

瓊脂 20g

2％伊紅水溶液 20mL

0.5％美藍水溶液 13mL

蒸餾水 1000mL

製法：先將瓊脂加到900mL蒸餾水中，加熱溶解，然後加入磷酸氫二鉀蛋白腖，混勻，使之溶解。再以蒸餾水補足至1000mL。校正pH值為7.2～7.4，分裝於三角瓶內，103.43kPa（121℃ 15 lb）15min高壓滅菌備用。臨用時加入乳糖並加熱融化瓊脂。冷至60℃左右無菌操作加入滅菌的伊紅美藍溶液，搖勻。傾注平皿備用。

4.3 蛋白腖水（作靛基質試驗用）

成分：蛋白腖（或胰蛋白腖） 20g

氯化鈉 5g

蒸餾水 1000mL

製法：將上述成分加熱融化，調pH值為7.0～7.2，分裝小試管，103.43kPa（121℃ 15 lb）15min高壓滅菌。

4.4 靛基質試劑

柯凡克試劑：將5g對二甲氨基苯甲醛溶解於75mL戊醇中，然後緩慢加入濃鹽酸25mL。

試驗方法：接種細菌於蛋白腖水中，於44℃±0.5℃培養24h±2h。沿管壁加柯凡克試劑0.3mL～0.5mL，輕搖試管。陽性者於試劑層顯深玫瑰紅色。

註：蛋白腖應含有豐富的色氨酸，每批蛋白腖買來後，應先用已知菌種鑒定後方可使用。

4.5 革蘭氏染色液：

4.5.1 染液制備

4.5.1.1 結晶紫染色液：

結晶紫 1g

95％乙醇 20mL

1％草酸銨水溶液 80mL

將結晶紫溶於乙醇中，然後與草酸銨溶液混合。

4.5.1.2 革蘭氏碘液：

碘 1g

碘化鉀 2g

蒸餾水加至 300mL

將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解後，再加蒸餾水至300mL。

4.5.1.3 脫色液：95％乙醇。

4.5.1.4 復染液：

a 沙黃復染液：

沙黃 0.25g

95％乙醇 10mL

蒸餾水 90mL

將沙黃溶解於乙醇中，然後用蒸餾水稀釋。

b 稀石碳酸復紅液：稱取鹼性復紅10g，研細，加95％乙醇100mL，放置過夜，濾紙過濾。取該液10mL，加5％石碳酸水溶液90mL混合，即為石碳酸復紅液。再取此液10mL加水90mL，即為稀石碳酸復紅液。

4.5.2 染色法

4.5.2.1 將塗片在火焰上固定，滴加結晶紫染色液，染1min，水洗。

4.5.2.2 滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗。

4.5.2.3 滴加95％乙醇脫色，約30s，或將乙醇滴滿整個塗片，立即傾去，再用乙醇滴滿整個塗片，脫色10s，水洗。

4.5.2.4 滴加復染液，復染1min，水洗，待干，鏡檢。

4.5.3 染色結果

革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。

註：如用1:10稀釋石碳酸復紅染色液作復染，復染時間僅需10s。

5 操作步驟

5.1 取10mL 1:10稀釋的檢液，加到10mL雙倍乳糖膽鹽（含中和劑）培養基中，置44℃±0.5℃培養箱中培養24h～48h，如不產酸也不產氣，則報告為糞大腸菌群陰性。

5.2 如產酸產氣，劃線接種到伊紅美藍瓊脂平板上，置36℃±1℃培養18h～24h。同時取該培養液1～2滴接種到蛋白腖水中，置44℃±0.5℃培養24h±2h。

經培養後，在上述平板上觀察有無典型菌落生長。糞大腸菌群在伊紅美藍瓊脂培養基上的典型菌落呈深紫黑色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具有金屬光澤。也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紫色，中心較深的菌落，亦常為糞大腸菌群，應注意挑選。

5.3 挑取上述可疑菌落，塗片作革蘭氏染色鏡檢。

5.4 在蛋白腖水培養液中，加入靛基質試劑約0.5mL，觀察靛基質反應。陽性者液面呈玫瑰紅色；陰性反應液面呈試劑本色。

6 檢驗結果報告

根據發酵乳糖產酸產氣，平板上有典型菌落，並經證實為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質試驗陽性，則可報告被檢樣品中檢出糞大腸菌群。

❹ 關於水中糞大腸菌群數的測定

1.管的規劃不定，最好是帶蓋子的10－50ml的玻璃管，一般要最少做5個平行。
2.培養基都可以自己配的，建議用簡單的lb培養基即可，葯品為蛋白腖和nacl（固體用agar）。
3.塞子或蓋子都可以，但一定要加。
4.需要超凈台、高壓滅菌鍋、調溫搖床這些必備儀器。
糞大腸菌群是生長於人和溫血動物腸道中的一組腸道細菌，隨糞便排出體外，約占糞便乾重的1／3以上，故稱為糞大腸菌群。糞大腸菌群不是細菌學上分類命名，而是根據衛生學方面的需要，而設定的一類與糞便污染有關的一組細菌，是能在44.5℃24h內發酵乳糖產酸產氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。糞大腸菌群為一群需氧及兼性厭氧的菌群，呈革蘭氏陰性反應，能在普通培養基上生長繁殖；其生化活動能力較強，能發酵多種糖類，產酸產氣，其特點是能較快發酵乳糖，糞大腸菌群在乳糖培養基中於．37℃下進行培養，在24h內能使乳糖發酵產酸，還有甲酸解氫酶進行分解甲酸，生成氫氣和二氧化碳，產生大量氣體，這時，若加入伊紅美蘭指示劑，分解乳糖所產生的酸(帶陽電荷)與伊紅相染呈紫色且有金屬光澤，故常用此特性來鑒定識別糞大腸菌群。
具體操作如下：
(1)發酵(產酸產氣)試驗
將試樣液以無菌接種於雙倍乳糖膽鹽發酵管(其內放有倒置的小玻璃管，以收集氣體)內，置44'e培養箱中培養24—48h，由於乳糖膽鹽培養基是一種具有選擇作用的培養基，其中膽鹽具有抑製革蘭氏陽性菌的作用，若觀察到發酵管內不產酸(有酚紅指示劑指示)不產氣，則報告試樣為糞大腸菌群陰性，未檢出，檢測結束。
若發酵管內產酸產氣，則繼續進行下列檢測。
(2)鑒別培養
將有產酸產氣的發酵管內試樣培養液接種到伊紅美蘭瓊脂培養基平皿上，置37℃培養18～24h；同時將該培養液接種到蛋白腖水中，置44℃培養24h。
(3)驗證實驗
菌落觀察：在上述平皿培養基上，仔細觀察菌落生長情況：大腸菌群在伊紅美蘭瓊脂培養基上其典型菌落是呈深紫色、圓形、邊緣整齊、表面光滑、濕潤、常具有金屬光澤，或呈紫黑色不帶或略帶金屬光澤及粉紫色，中心較深的菌落。
革蘭氏染色、鏡檢：將以上典型的(或近似的)大腸菌群菌落進行革蘭氏染色、鏡檢，若革蘭氏染色呈陽性(紫色)反應，則報告糞大腸菌群呈陰性，未檢出。若革蘭氏染色呈陰性，檢測還需進行下一試驗，以待進一步證實。
靛基質試驗(吲哚試驗)：對前已培養好的蛋白腖水中，滴人靛基質試劑(對二甲基氨基苯甲醛試劑)，進行靛基質反應，若液面呈玫瑰紅色，呈陽性反應，則報告糞大腸菌群呈陽性，檢出；若液面仍是棕黃色，則報告糞大腸菌群呈陰性，未檢出。
(4)檢測程序
將上述檢測糞大腸菌群的操作步驟可歸結為以下程序圖示。
(5)檢驗報告
當發酵管內產酸產氣，觀察試液平皿上為典型糞大腸菌群菌落，並經革蘭氏染色、檢鏡試驗為陰性(—)及靛基質試驗為陽性，則報告該試液經檢測檢出糞大腸菌群。其他結果均為未檢出糞大腸菌群。

❺ 廢水中糞大腸菌群的標準是多少啊

我國廢水排放標準的糞大腸指標為1000個/升。國家規定「糞大腸菌群數」一級排放A標准為10³個/L，一級排放A標准為10^4個/L，二級排放標准為10^4個/L.三級不做規定。

(5)廢水中糞大腸全部陰性怎麼發結果擴展閱讀：

檢驗注意事項

(1)將接種好的樣品放人恆溫水浴箱或隔水式恆溫培養箱時，箱內溫度一定要求達到所要求的溫度(44±1℃)時，方可放入。如用恆溫水浴箱其水面要高於接種物面，放濾膜的培養皿要沉到水浴箱底部。

(2)MFC培養基中苯胺藍的純度和質量往往影響菌落的顏色，根據試驗結果用進口苯胺藍加O．1g，用國產苯胺藍加0．2g，培養出的糞大腸菌菌落顏色較典型。但國產苯胺藍的性能是否同樣穩定尚不能肯定。因此，制好的培養基在使用前，最好先接種典型糞大腸菌，以觀察對比菌落的顏色。

玫紅酸高壓後會分解，配好的試液應在2-lO℃保存不超過2周，如顏色由暗紅變成棕色沉澱時應棄去。如雜菌污染少，且加與不加玫紅酸對菌落計數無影響時，可不加。．

(3)在濾膜上生長的菌落除挑取藍色菌落外，淺藍色菌落或淺藍色中心較深的菌落也應挑取。

(4)生活飲用水通常都是經氯處理消毒的，水中含有一定量的余氯，使大腸菌群處於受損或受抑制狀態，在採集水樣時應加硫代硫酸鈉脫氯，使此受損的細菌得以復甦與修復，從而避免計數結果偏低甚至假陰性出現。

(5)采樣後水樣的正確保存很重要，如保存不當可使檢樣中的大腸菌群細菌死亡或在一定條件下再生長，這些都將影響檢驗結果的准確性。檢驗室接到水樣後，應立即檢驗。如因故不能檢驗時，應立即置於冰箱內並於2小時內檢驗。

關於水樣儲存時間與溫度對大腸菌群數的影響，Lonsans等報告認為水樣中大腸菌群數不多時，則冰箱保存與室溫保存相差不大；如水樣中菌數多時，則在室溫(23-39．5℃)內保存比在冰箱(0-1O℃)中保存菌數的減少速度快。

參考資料來源：

網路-糞大腸菌

❻ 水中大腸桿菌的測定實驗步驟

出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法
Method for examination of coliform，fecal coliform and escherichia coli in food for export
SN 0169—92
代替ZB X09 002—86
1 主題內容與適用范圍
本標准規定了出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌的檢驗方法。
本標准適用於出口食品的檢驗。
2 設備和材料
2.1 吸管：1mL，具0.1mL刻度；5mL和10mL，具1mL刻度。
2 2 水浴箱：44.5±0.5℃。
2.3 培養箱：36±1℃，44.5±0.5℃。
2.4 冰箱：0～5℃和-15～-20℃。
2.5 均質器。
2.6乳缽和研棒。
2.7 平皿：直徑90mm。
2.8天平：感量0.1g。
2.9 顯微鏡。
2.10 稀釋瓶：100mL、200mL和500mL三角燒瓶及廣口瓶。
2.11 玻璃珠：直徑約5mm。
2.12菌落計數器。
3 培養基及試劑
3.1 月桂基硫酸鹽胰蛋白 (LST)肉湯。
3.2 煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯。
3.3 EC肉湯。
3.4 伊紅美藍瓊脂(EMB)。
3.5營養瓊脂斜面。
3.6 色氨酸肉湯。
3.7 MR-VP培養基。
3.8 Korser氏枸椽酸鹽肉湯。
3.9 結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)。
3.10 Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液。
3.11 生理鹽水。
3.12 革蘭氏染色液。
3.13 Kovacs氏靛基質試劑。
3.14 甲基紅指示劑。
3.15 Voges—pros kauer(V—P)試劑。
4 樣品制備
4.1 以無菌操作取有代表性的樣品。如有包裝則用75％乙醇在開口處擦拭後取樣。若不能及時檢驗，應將冷凍樣品置於-15℃保存；非冷凍而易腐的食品，應置於4℃冰箱保存。檢驗前冷凍樣品可於2—5℃18h內解凍，或在45℃以下15min內解凍。
4.2 不同食品樣品勻液的制備
4.2.1 液體食品
以滅菌吸管取樣25mL放入裝有225mL稀釋劑的滅菌玻璃瓶(瓶內預置適當數量的玻璃珠)，以30cm幅度、於7s內振搖25次(或以機械振盪器振搖)，製成1：10的樣品勻液。
4.2.2 固體和半固體食品
以無菌操作取25g樣品，放入裝有225mL稀釋劑的滅菌均質杯內，於8000r／min均質1～2min，製成1：10樣品勻液(也可用滅菌乳缽研磨的方法代替)。
4.3 稀釋樣品勻液根據對樣品污染情況的估計，用稀釋劑將樣品勻液製成一系列十倍遞增的樣品稀釋液，如10-2、10-3、10-4.………。從制備樣品勻液至稀釋完畢，全過程不得超過15min。
5 大腸菌群的測定
5.1 大腸菌群MPN值的測定
5.1.1 對每個樣品，選擇適宜的三個連續稀釋度的樣品稀釋液。每個稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白 (LST)肉湯，每管接種1mL。
5.1.2 將接種管置於36±1℃培養48±2h。
5.1.3 觀察試管的產氣情況：檢查倒管內是否有氣泡產生，記錄在24h和48h內產氣的LST肉湯管數。如所有LST肉湯管均未產氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產氣者，則進一步作證實試驗。
5.2 大腸菌群的證實試驗
5.2.1 將所有產氣管用直徑為3mm的接種環移種到煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中。
5.2.2 置BGLB肉湯管於36±1℃培養48±2h。
5.2.3 記錄所有BGLB肉湯管的產氣管數。
5.2.4 結果報告：按BGLB肉湯產氣管數，查MPN表(見附錄B(補充件))報告每克(毫升)樣品中大腸菌群的MPN值。
6 糞大腸菌群測定
6.1 用直徑為3mm的接種環將所有48±2h內產氣的LST肉湯管培養物移種於EC肉湯管中。
6.2 將所有接種的EC肉湯管在30min內放入帶蓋44.5±0.5℃水浴箱內，培養24±2h。水浴箱的水平面應高於肉湯培養基液面。應以已知為44.5℃產氣陽性的大腸桿菌和44.5℃不產氣的產氣腸桿菌或其他大腸菌群細菌作陽性和陰性對照。
6.3 記錄EC肉湯管的產氣情況。產氣管為糞大腸菌群試驗陽性；不產氣管為糞大腸菌群試驗陰性。
6.4 結果報告：按產氣管數，查MPN表報告每克(毫升)樣品中糞大腸菌群的MPN值。
7 大腸桿菌測定
7.1 將6.3條中的EC肉湯管繼續培養24h，取其產氣管的培養物劃線接種於伊紅美藍(EMB)平板，36±1℃培養24±2h。
7.2 檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。
7.3 如有典型菌落，則從每個平板上至少挑取2個典型菌落；如無典型菌落，則從每個平板上至少挑取2個可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位，移種到營養瓊脂斜面上，36±1℃培養18～24h。
7.4 將斜面培養物移種到下列培養基中進行生化試驗。
7.4.1 色氨酸肉湯：在36±1℃培養24±2h後，加Kovacs氏試劑0.2～0.3mL，上層出現紅色為靛基質陽性反應。
7.4.2 MR—VP培養基；在36±1℃培養48±2h。以無菌操作移取培養物1mL至13mm×l00mm試管中，加5％ɑ—萘酚乙醇溶液0.6mL，40％氫氧化鉀溶液0.2mL和少許肌酸結晶，振搖試管後靜置2h，如出現伊紅色，為VP試驗陽性。
將MR—VP培養物的剩餘部分再培養48h滴加5滴甲基紅溶液。如培養物變紅色，為甲基紅試驗陽性，若變黃色則為陰性反應。
7.4.3 Koser氏枸椽酸鹽肉湯：於36±1℃培養96h記錄有無生長。
7.4.4 LST肉湯：於30±1℃培養48±2h，觀察試管中是否產氣。
7.4.5 革蘭氏染色：取18h營養瓊脂斜面培養物作革蘭氏染色。大腸桿菌為革蘭氏陰性。
7.4.6 大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下：
靛基質 MR VP 枸椽酸鹽 鑒定（型別）
+ + - - 典型大腸桿菌
- + - - 非典型大腸桿菌
+ + - + 典型中間型
- + - + 非典型中間型
- - + + 典型產氣腸桿菌
+ - + + 非典型產氣腸桿菌
如出現上表以外的生化反應類型，表明培養物可能不純，應重新劃線分離，必要時做重復試驗。
7.5 結果報告：大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，發酵乳糖產酸產氣，IMViC試驗為++--或-+--，再根據LST肉湯陽性管數查MPN表，報告每克(毫升)樣品中大腸桿菌MPN值。
8 大腸菌群固體培養基測定法
8.1 樣品制備同第4章。
8.2 計數
8.2.1 選取適宜的三個連續稀釋度的樣品液，每個稀釋度接種兩個滅菌平皿，每皿1mL。另取lmL稀釋劑加入一個滅菌平皿中，作空白對照。
8.2.2 將冷至45±0.5℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)10～15mL傾注於每個平皿中。小心旋轉平皿，將培養基與樣液充分混勻。
8.2.3 待瓊脂凝固後，再加3～4mLVRBA覆蓋平板表層。
8.2.4 翻轉平板，置於36±l℃培養18～24h。
8.2.5 選用有30～150個菌落的平板，計數平板上出現的典型大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉澱環。菌落直徑為0.5mm或更大。
8.2.6 證實
8.2.6.1 從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落，移種於BGLB肉湯管內，36±1℃培養24h和48h，觀察產氣情況。
8.2.6.2 將出現產氣的肉湯管判為大腸菌群陽性。對形成菌膜的陽性管，應進行革蘭氏染色，以便排除革蘭氏陽性桿菌。
8.2.7 結果報告
經最後證實為陽性(產氣，革蘭氏陰性桿菌)的試管百分比乘以於8.2.5條中計數的平板菌落數，再乘以稀釋倍數，即為每克(毫升)樣品中大腸菌群數。
例：10-4樣品稀釋液lmL，在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落，挑取其中10個接種BGLB肉湯管，證實有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數為：
100×6／10×104／g(mL)＝6.0×105／g(mL)
附 錄 A
培養基和試劑
(補充件)
A1 月桂基硫酸鹽胰蛋白 （LST）肉湯
胰蛋白 或胰酪腖(Trypticase)
20g
氯化鈉 5.0g
乳糖 5.0g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 2.75g
磷酸二氫鉀(KH2P04) 2.75g
月桂基硫酸鈉 0.1g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分溶解於蒸餾水中。分裝到有倒立發酵管的20mm×150mm試管中，每管10mL。121℃高壓滅菌15min。最終pH6.8±0.2。
A2 煌綠乳糖膽鹽(BGAB)肉湯
蛋白腖 10.0g
乳糖 10.0g
牛膽粉(oxgall或oxbile)溶液 200.0mL
0.1％煌綠水溶液 13.3mL
蒸餾水
將蛋白腖乳糖溶於約500mL蒸餾水中，加入牛膽粉溶液200mL(將20.0g脫水牛膽粉溶於200mL蒸餾水中，pH7.0～7.5)，用蒸餾水稀釋到975mL，調pH7.4。再加入0.1％煌綠水溶液13.3mL，用蒸餾水補足到1000mL，用棉花過濾後，分裝到20mm×l50mm試管(管內有倒立的小發酵管)中，每管10mL。121℃高壓滅菌15min。最終pH7.2±0.1。
A3 EC肉湯
胰蛋白 或胰酪
20.0g
3號膽鹽或混合膽鹽 1.5g
乳糖 5.0g
磷酸氫二鉀(KH2P04) 4.0g
磷酸二氫鉀(KH2P04) 1.5g
氯化鈉 5.0g
蒸餾水 1000.0mL
將以上成分溶解於蒸餾水中，分裝16mm×150mm試管(管內有倒立的小發酵管)，每管8mL。
121℃高壓滅菌15min，最終pH6.9±0。1。
A4 伊紅美藍瓊脂(EMB)
蛋白腖 10.0g
乳糖 10.0g
磷酸氫二鉀(KH2P04) 2.0g
瓊脂 15.0g
伊紅γ(水溶性) 0.4g或2％水溶液20mL
美藍0.065g或0.5％水溶液 13mL
蒸餾水 1000.0mL
在1 000mL蒸餾水中煮沸溶解蛋白腖、磷酸鹽和瓊脂，加水補足至原量。分裝於三角燒瓶中。每瓶100mL或200mL，高壓滅菌15min。最終pH7.1±0.2。使用前將瓊脂融化，於每100mL瓊脂中加5mL滅菌的20％乳糖水溶液、2mL的2％伊紅γ水溶液和1.3mL0.5％的美藍水溶液，搖勻，冷至45～50℃傾注平皿。
A5 營養瓊脂斜面
牛肉膏 3.0g
蛋白腖 5.0g
瓊脂 15.0g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分加於蒸餾水中，煮沸溶解。分裝合適的試管。121℃高壓滅菌15min。最終pH7.3±0.1。滅菌後擺成斜面備用。
A6 色氨酸肉湯
胰腖或胰酪腖 10.0g
蒸餾水 1000.0mL
加熱攪拌溶解胰腖或胰酪腖於蒸餾水中。分裝試管，每管5mL。121℃高壓滅菌15min。最終pH6.9±0.2。
A7 MR-VP培養基
腖
7.0g
葡萄糖 5.0g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 5.0g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分溶於蒸餾水中，分裝試管，121℃高壓滅菌15min，最終pH6.9±0.2。
A8 Koser氏枸椽酸鹽肉湯
磷酸氫銨鈉(NaNH4HPO4�6�14H2O) 1.5g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 1.0g
硫酸鎂(MgSO4�6�17H2O) 0.2g
枸椽酸鈉(含2H2O) 3.0g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分溶解於蒸餾水中，分裝試管，每管10mL，121℃高壓滅菌15min。最終pH6.7±0.2。
A9 結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)
蛋白腖 7.0g
酵母膏 3.0g
乳糖 10.0g
氯化鈉 5.0g
膽鹽或3號膽鹽 1.5g
中性 0.03g
結晶紫 0.002g
瓊脂 15～18g
蒸餾水 1000.0mL
將上述成分溶於蒸餾水中，靜置幾分鍾，充分攪拌，調至pH7.4±0.1。煮沸2min，將培養基冷 45～50℃傾注平板。臨用時制備，不得超過3h。
A1O Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液
貯存液
磷酸二氫鉀(K2HPO4) 34.0g
蒸餾水 500mL
將磷酸二氫鉀溶於蒸餾水中，用lmol／L氫氧化鈉約175mL調至pH7.2。用蒸餾水加至1000mL貯存於冰箱。稀釋液取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝於合適容器後，121℃高壓滅菌15min。
A11 生理鹽水
氯化鈉 8.5g
蒸餾水 1000.0mL
將氯化鈉溶於蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min。
A12 革蘭氏染色液
結晶紫染色液：
結晶紫 1.0g
95％乙醇 20.0mL
1％草酸銨水溶液 80.OmL
將結晶紫完全溶解於乙醇中，然後與草酸銨溶液混合。
革蘭氏碘液：
碘 1.0g
碘化鉀 2.0g
蒸餾水 300.0mL
將碘與碘化鉀先行混合，加入蒸餾水少許充分振搖，待完全溶解後，再加蒸餾水至300mL。
沙黃復染液：
沙黃 0.25g
95％乙醇 10.0mL
蒸餾水 90.0mL
將沙黃溶解於乙醇中，然後用蒸餾水稀釋。
染色法
a. 將塗片在火焰上固定，滴加結晶紫染液，染1min，水洗。
b. 滴加革蘭氏碘液，作用lmin，水洗。
c. 滴加95％乙醇脫色約15～30s，直至染色液被洗掉，不要過分脫色，水洗。
d 滴加復染液，復染lmin，水洗、待干、鏡檢。
結果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。
A13 Kovacs氏靛基質試劑
對二甲氨基苯甲醛 5.0g
戊醇 75.0mL
鹽酸(濃) 25.0mL
將對二甲氨基苯甲醛溶於戊醇中，然後慢慢加入濃鹽酸即可。
A14 甲基紅指示劑
甲基紅 0.1g
95％乙醇 300mL
將甲基紅溶解於300mL乙醇中，加水稀釋至500mL。
A15 Voges—Proskauer(V—P)試劑
甲液
a-萘酚 5.0g
無水乙醇 100.0mL
乙液
氫氧化鉀 40.0g
用蒸餾水加 100.OmL
附 錄 B
1g檢樣中最近似值(MPN)表
(補充件)
使用三管法，接種量分別為0.1，0.01和0.00lg。
陽性管數 MPN 陽性管數 MPN
0.1 0.01 0.001 0.1 0.01 0.001
0 0 0 <3 2 0 0 9.1
0 0 1 3 2 0 1 14
0 0 2 6 2 0 2 20
0 0 3 9 2 0 3 26
0 1 0 3 2 1 0 15
0 1 1 6.1 2 1 1 20
0 1 2 9.2 2 1 2 27
0 1 3 12 2 1 3 34
0 2 0 6.2 2 2 0 21
0 2 1 9.3 2 2 1 28
0 2 2 12 2 2 2 35
0 2 3 16 2 2 3 42
0 3 0 9.4 2 3 0 29
0 3 1 13 2 3 1 36
0 3 2 16 2 3 2 44
0 3 3 19 2 3 3 53
1 0 0 3.6 3 0 0 23
1 0 1 7.2 3 0 1 39
1 0 2 11 3 0 2 64
1 0 3 15 3 0 3 95
1 1 0 7.3 3 1 0 43
1 1 1 11 3 1 1 75
1 1 2 15 3 1 2 120
1 1 3 19 3 1 3 160
1 2 0 11 3 2 0 93
1 2 1 15 3 2 1 150
1 2 2 20 3 2 2 210
1 2 3 24 3 2 3 290
1 3 0 16 3 3 0 240
1 3 1 20 3 3 1 460
1 3 2 24 3 3 2 1100
1 3 3 29 3 3 3 >1100
註：①本表採用3個稀釋度[0.1g(mL)、0.0lg(mL)和0.001g(mL)]，每個稀釋度接種3管。
②表內所列檢樣量如改用1g(mL)、0.18(mL)和0.01g(mL)時，表內數字應相應降低10倍：如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)和0.0001g(mL)時，則表內數字應相應增加10倍，其餘類推。

❼ 關於水中糞大腸菌群數的測定

看來我們使用的方法是一樣的，區別是你沒有操作過，對吧
按你提問的順序分列
一、 試管的規格大約為長度--cm,直徑2--2.5cm,小玻璃管的長度大約2-3cm直徑約0.3-0.5cm。操作的時候是把小的玻璃管（一端封閉)開口的一端朝大試管底部放入，至於需要多少支。要看你一次做幾個樣品，幾個倍數，我們一般准備30--50套。
二、不管是什麼培養基，我們都是自己配製，試劑商店裡可以買到的（按方法中所列試劑品種購買。
三、肯定要加塞子的，我們用的塞子是軟材料（好像是軟橡膠？白色的，塞子中間另有一個可以活動的塞子，能保證加塞後的試管透氣，其實用什麼材料不重要的。
四、需要的儀器設備為：生化培養箱、無菌操作台（空氣精華級別100）、高壓滅菌鍋、冰箱、乾燥箱。

❽ 你好，請問水質糞大腸菌群檢測，如果接種1ml，0.1ml，0.01ml，結果都為陰性管，是報未檢出還是報＜200

按照 GB4789.39-2008標准，報告結果應該為<0.3MPN/mL

❾ 如何判斷飲用水是否受到糞便污染用什麼方法檢測判斷標准如何

生活飲用水受糞便污染最直接的指標肯定是大腸桿菌的數量，當然糞便中肯定含有COD、BOD等指標，不過大腸桿菌的數量已經足夠說明問題。
其中的標準是《生活飲用水衛生標准》（GB 5749-2006）
大腸桿菌的監測方法有相關的標准：
大腸菌群測定的操作細則
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100mL(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。
1 設備和材料
1.1 溫箱：36±1℃。
1.2 冰箱:0～4℃。
1.3 恆溫水浴 :44.5±0.5℃。
1.4 天平。
1.5 顯微鏡。
1.6 均質器或乳缽。
1.7 平皿:直徑為90mm。
1.8 試管。
1.9 吸管。
1.10 廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL。
1.11 玻璃珠:直徑約5mm。
1.12 載玻片。
1.13 酒精燈。
1.14 試管架。
2 培養基和試劑
2.1 乳糖膽鹽發酵管:按GB 4789.28中4.9規定。
2.2 伊紅美藍瓊脂平板:按GB 4789.28中4.25規定。
2.3 乳糖發酵管:按GB 4789.28中4.10規定。
2.4 EC 肉湯:按GB 4789.28中4.11規定。
2.5 磷酸鹽緩沖稀釋液:按GB 4789.28中3.22規定。
2.6 生理鹽水。
2.7 革蘭氏染色液:按GB 4789.28中2.2規定。
3 操作步驟
3.1 檢樣稀釋
3.1.1 以無菌操作將檢樣25mL(或g)放於有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3 另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。
3.1.4 根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2 乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖 膽鹽發酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃ 溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
3.3 分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃ 溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4 證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置 36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5 報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。
4 糞大腸菌群(faecal coliform)
4.1 用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於EC肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於EC肉湯液面),培養24±2h,經培養後,如所有EC肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的EC肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置 培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2 結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值。

❿ 水中糞大腸菌群的測定

化妝品檢測項目中糞大腸菌群的檢測流程：
10g/mL樣品+90mL滅菌生理鹽水 →10mL+10mL雙倍乳糖膽（含中和劑）培養基→糞大腸菌群 44.5℃，48h培養
註：在化妝品檢測項目中，如果樣品含有油脂性的成分，如精油，在樣品前處理中需加入液體石蠟、吐溫80、生理鹽水進行均質，使樣品能夠均勻分散開來。
糞大腸菌群又是一個什麼樣的微生物呢？下面我們來詳細介紹下：
大腸菌群：大腸菌群並非細菌學分類命名，而是衛生細菌領域的用語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌，這些細菌在生化及血清學方面並非完全一致。
定義（GB2010）：在一定培養條件下能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌。
糞大腸菌群：大腸菌群的一種，又稱耐熱大腸菌群，培養溫度：44.5±0.5℃，糞大腸菌群是化妝品檢測項目中必檢的微生物項目。
大腸埃希氏菌：（(Escherichia. coli )通常稱為大腸桿菌。根據不同的生物學特性將致病性大腸桿菌分為5類：
致病性大腸桿菌(EPEC)、
腸產毒性大腸桿菌(ETEC)、
腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、
腸出血性大腸桿菌(EHEC)、
腸黏附性大腸桿菌(EAEC)。
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