污水中分離噬菌體實驗

㈠ 離心法分離噬菌體和細菌會導致死亡么，為什麼

因為時間久了噬菌體在細菌體內大量繁殖到一定程度，細菌就會死亡裂解。而噬菌體便會從細菌中跑出，使分離後上清液含有噬菌體。因此具有放射性
而我們知道沉澱物是指細菌（因為它密度比較大），噬菌體密度較小。
因此脫離細菌後。經過分離便處於上清液中了

㈡ 噬菌體效價測定實驗中所用操作方法和書上介紹的操作方法比較有什麼優缺點

5 方法
5.1 噬菌體的檢查
5.1.1 樣品採集
將2～3g土樣或5mL水樣（如陰溝污水）放入滅菌三角瓶中，加入對數生長期的敏感指示菌（大腸桿菌(Escherichia coli)）菌液3～5mL，再加20mL二倍肉湯蛋白腖培養液。
5.1.2 增殖培養
30℃振盪培養12～18h, 使噬菌體增殖。
5.1.3 離心分離
將上述培養液以3000rpm離心15～20min, 取上清液，用pH7.0，1%蛋白腖水稀釋至10-2～10-3，用於噬菌體檢查及效價測定。
5.1.4 生物測定法
5.1.4.1雙層瓊脂平板法
5.1.4.1.1 倒下層瓊脂
融化下層培養基，倒平板（約10mL/皿）待用。
5.1.4.1.2倒上層瓊脂
融化上層培養基，待融化的上層培養基冷卻至50℃左右時，每管中加入敏感指示菌 (大腸桿菌(Escherichia coli)) 菌液0.2mL，待檢樣品液或上述噬菌體增殖液0.2～0.5mL，混合後立即倒入上層平板鋪平。
5.1.4.1.3恆溫培養
30℃恆溫培養6～12h觀察結果。
5.1.4.1.4 觀察結果
如有噬菌體，則在雙層培養基的上層出現透亮無菌圓形空斑──????噬菌斑。
5.1.4.2 單層瓊脂平板法
省略下層培養基，將上層培養基的瓊脂量增加至2%，融化後冷卻至45℃左右，如同上法加入指示菌和檢樣，混合後迅速倒平板。30℃恆溫培養6～16h後觀察結果。
5.1.5 離心分離加熱法（快速檢查）
取大腸桿菌(Escherichia coli)正常培養液和侵染有噬菌體的異常大腸桿菌(Escherichia coli)培養液，4000rpm離心20min，分別取兩組發酵液的上清液(A1)，一部分於721分光光度計上測定OD650光密度值，另外各取5mL上清液於試管中，置水浴中煮沸2min（A2），檢測A2溶液OD650光密度值，記錄結果。
5.2 噬菌體效價的測定
5.2.1 倒平板
將融化後冷卻到45℃左右的下層肉膏蛋白腖固體培養基傾倒於11個無菌培養皿中，每皿約傾注10mL培養基，平放，待冷凝後在培養皿底部註明噬菌體稀釋度。
5.2.2 稀釋噬菌體
按10倍稀釋法，吸取0.5mL大腸桿菌(Escherichia coli)噬菌體，注入一支裝有4.5mL1%蛋白腖水的試管中，即稀釋到10-1，依次稀釋到10-6稀釋度。
5.3 噬菌體與菌液混合
將11支滅菌空試管分別標記10-4、10-5、10-6和對照。分別從10-4、10-5和10-6噬菌體稀釋液中吸取0.1mL於上述編號的無菌試管中，每個稀釋度平行做三個管，在另外兩支對照管中加0.1mL無菌水，並分別於各管中加入0.2mL大腸桿菌(Escherichia coli)菌懸液，振盪試管使菌液與噬菌體液混合均勻，置37℃水浴中保溫5min，讓噬菌體粒子充分吸附並侵入菌體細胞。
5.4.4 接種上層平板
將11支融化並保溫於45℃的上層肉膏蛋白腖半固體瓊脂培養基5mL分別加入到含有噬菌體和敏感菌液的混合管中，迅速搓勻，立即倒入相應編號的底層培養基平板表面，邊倒入邊搖動平板使其迅速地鋪展表面。水平靜置，凝固後置37℃培養。
5.5 觀察並計數
觀察平板中的噬菌斑，並將結果記錄於實驗報告表格內，選取每皿有30～300個噬菌斑的平板計算噬菌體效價。
計算公式： N=Y/V?X
（N：效價值，Y：平均噬菌斑數／皿，V：取樣量，X：稀釋度）
例如：當稀釋度為10-6時，取樣量為0.1 mL/皿，同一稀釋度

㈢ 如圖是噬菌體侵染細菌實驗的部分步驟示意圖，對此過程的有關敘述正確的是（）A．選用噬菌體作為實驗

A、選用噬菌體作為實驗材料的原因之一是其成分只有蛋白質和DNA，A正確；
B、噬菌體必須寄生在活菌中才能培養，所以被³⁵S標記的噬菌體是接種在用³⁵S的培養基培養的大腸桿菌中獲得的，B錯誤；
C、實驗中採用攪拌和離心等手段是為了把噬菌體的蛋白質外殼和菌體分離，C錯誤；
D、在新形成的噬菌體中沒有檢測到³⁵S，說明噬菌體的遺傳物質是DNA，由於蛋白質沒有進入菌體，沒有觀察到蛋白質的作用，不能說明蛋白質不是遺傳物質，D錯誤．
故選：A．

㈣ 噬菌體侵染細菌實驗懸浮液和沉澱的成分 原因

離心法離心之後，質量大的在下層，質量小的在上層。沉澱中是大腸桿菌，上層液體中是噬菌體。由於噬菌體的繁殖方式是將核酸注入宿主細胞，而將蛋白質外殼留在外面，所以在試驗中，最理想的狀態是上層中只有剩下來的蛋白質外殼。但由於某些原因（如時間過長，導致大腸桿菌裂解，釋放出其中已經繁殖的噬菌體），上層可能出現含有核酸的噬菌體完整病毒。或者（如攪拌不充分，導致附著在大腸桿菌菌體表面的蛋白質外殼未能與大腸桿菌分離而一起沉澱），沉澱中也出現噬菌體蛋白質。

㈤ 就是哪個咯：噬菌體侵染細菌實驗中，檢測放射性物質上清下清都有是什麼情況呢，，求原因，請分開說明S,P

沉澱物的放射性很低：「攪拌不充分，少部分噬菌體與細菌未分離」。 上清液里放射性很低：「保溫時間過短，少數噬菌體未侵染」或者是「保溫時間過長，細菌裂解」。

㈥ 噬菌體侵染細菌實驗中採用攪拌離心等手段是為了把DNA和蛋白質分離。這句話對嗎為什麼

不對！
首先攪拌和離心是在噬菌體侵染大腸桿菌完成之後進行的工作,也就是說,現在的細菌表面有原來的噬菌體的蛋白質外殼,細菌內部,有新合成的噬菌體.然後,攪拌是為了讓細菌和他表面的噬菌體蛋白質外殼分離,離心是為了讓細菌沉到底部,而蛋白質外殼到上清液中,然後分別檢測上清液和沉澱物的放射性.（如果S標記,則上清液有放射性；如果P標記,則沉澱物有放射性）
綜上所述,攪拌和離心是為了把細菌和蛋白質外殼分離開來

㈦ 生物試題 噬菌體侵染細菌的實驗中攪拌和離心的目的是什麼

攪拌的目的是使吸附在細菌上的噬菌體與細菌分離.
離心的目的是讓上清液中析出重量較輕的T2噬菌體顆粒,而離心管的沉澱物中留下被感染的大腸桿菌.

㈧ 高中生物噬菌體侵染細菌實驗，離心為什麼不能代替攪拌。直接離心不行嗎

攪拌作用是讓吸附在細菌上的噬菌體與大腸桿菌分離。
離心是為讓上清液中析出重量較輕的噬菌體顆粒，而沉澱物中留下被感染的大腸桿菌。(即離心是為比重不同的物質分層)

㈨ 噬菌體浸染實驗中，離心和攪拌的作用分別是什麼上層是哪些物質（具體些），下層是哪些物質

如果只是攪拌而不離心，的確也能分開，但是需要的時間長，細菌會裂解。不知道你有沒有注意到教科書上的原話，這個實驗一定要在「短時間」保溫後攪拌、離心讓噬菌體和細菌分開。
攪拌和離心的目的是為了將噬菌體蛋白質外殼同侵入大腸桿菌的噬菌體DNA分開，以便對放射性元素跟蹤測試。離心會使質量較輕的噬菌體顆粒進入上清液，而被感染的細菌則形成沉澱，但這必須保證是在菌體裂解之前進行。噬菌體侵染細菌的速度很快，在37度的條件下大約40分鍾就可以產生100到300個子代噬菌體。從感染到釋放前的這段時間叫潛伏期，大約經歷20到30分鍾。短時間的保溫可獲得足夠數量的子代噬菌體，但又必須避免超出潛伏期（確保溶液分層），所以離心要在「短時間」保溫後及時進行。

㈩ 噬菌體侵染細菌實驗步驟

有四個步驟，分別是：

1、培養用p32和s35 標記的大腸桿菌，再用此大腸桿菌培養噬菌體。p32用於標記噬菌體蛋白質，s35 用於標記噬菌體DNA。

2、用培養後的p32和s35噬菌體侵染未被標記的的大腸桿菌。

3、培養物離心，分離。

4 、分別對上清液和沉澱物的放射性進行檢測。上清液中有S35，而沉澱中幾乎沒有；沉澱中有P32而上清液中幾乎沒有。

Alfed Hershey和Martha Chase（1952）將宿主大腸桿菌細胞分別放在含放射性同位素35S或32P的培養基中，用35S標記蛋白質，32P標記蛋DNA。宿主細胞在生長過程中就被35S或32P標記上了。然後用T2噬菌體分別感染被35S或32P標記的細菌，並在這些細菌中復制增殖。

宿主菌裂解釋放出很多子代噬菌體，這些子代噬菌體也被標記上35S或32P。然後用分別被35S，或32P標記的噬菌體去感染沒有被放射性同位素標記的宿主菌，然後測定宿主菌細胞帶有的同位素。被35S標記的噬菌體所感染的宿主菌細胞內很少有35S，而大多數35S出現在宿主菌細胞的外面。

也就是說，35S標記的噬菌體蛋白質外殼在感染宿主菌細胞後，並未進入宿主菌細胞內部而是留在細胞外面。被32P標記的噬菌體感染宿主菌細胞後，測定宿主菌的同位素，發現32P主要集中在宿主菌細胞內。所以噬菌體感染宿主菌細胞時進入細胞內的主要是DNA。

(10)污水中分離噬菌體實驗擴展閱讀

一、噬菌體核酸特點：

ss RNA：噬菌體中所含的核酸是單鏈RNA。

ds RNA：噬菌體中所含的核酸是雙鏈RNA。

ss DNA：噬菌體中所含的核酸是單鏈DNA。

ds DNA：噬菌體中所含的核酸是雙鏈DNA。

二、噬菌體繁殖特點

1、毒性噬菌體

指在宿主菌體內復制增殖，產生許多子代噬菌體，並最終裂解細菌。毒性噬菌體的增殖方式是復制，其增殖過程經歷吸附穿入、生物合成和成熟釋放3個階段。

進入菌細胞內的噬菌體核酸首先經早期轉錄產生早期蛋白質，並復制子代核酸，再進行晚期轉錄產生噬菌體的結構蛋白。子代噬菌體達到一定數量時，由於噬菌體合成酶類的溶解，菌細胞突然裂解，釋放出的噬菌體再感染其他敏感細菌。

2、溫和噬菌體

感染宿主菌後並不增殖。其基因整合於細菌染色體上，即前噬菌體，隨細菌染色體的復制而復制，並隨細菌分裂而分配至子代細菌的染色體中。溫和噬菌體有溶原性周期和溶菌性周期，可偶爾自發地或在某些理化或生物因素地影響下，整合的前噬菌體脫離宿主菌染色體，進入溶菌性周期導致細菌裂解，並產生新的成熟噬菌體。