① 用TE稀释质粒与用超纯水稀释有什么不一样的
正如楼上所说,来TE溶液有利于源保证核酸物质的稳定性,但我猜测你想知道其中的道理。我做补充如下:1)T(tris)是弱碱性,不容易导致核酸水解(DNA在酸性下更易自行水解);2)E(EDTA)可螯合DNA 水解酶的辅酶镁离子,抑制DNase活性,阻止DNA被酶解。但由于TE(主要是E)对一些 精密实验 比如酶切 甚至PCR 有负面影响(也作为酶的抑制剂),多使用很稀的TE 如0.1X 的TE作为buffer。
我们实验室做法:若很短时间就用掉的DNA溶液 就用纯水溶解直接做实验, 此时DNA没时间降解;若是长时间要保存的 就用10倍稀释的TE保存成浓的DNA溶液,用前稀释一下降低EDTA的影响。 供参考,祝顺利!
② 合成的引物该怎么处理,用超纯水还是什么稀释
12000rpm离心1min后加入ddH2O,涡旋震荡1min后瞬时离心甩一下即可。加水量根据你需要的浓度确定。比如引物管上是4nmol,那么加入400μl水,浓度就是100p
③ 如何稀释新引物啊
用TE(或ddH2O)稀抄释,按引物合成报袭告单上写的先稀释到100uM(一般有To dissolved into 100uM,add XX ul water...,不过注意一下是1OD的还是一管的,一般指1OD加这么多),作为贮存液。
然后再取出一部分,稀释10倍到10uM,使用
④ 引物稀释中水和TE的区别
稀释引物要达到的浓度(pmol/ul)=母液浓度(pmol/ul)×汲取母液的体积(ul)÷(汲取母液的体积(ul)+加水量(ul))
引物一般来的时候是干粉.这种状态能保存最长的时间.
如果用的话要先离心,5分钟(12000转).然后用它上面写的nmol*1000/你的终浓度=你要加的水量
溶解液有TE和dd水.TE其实就是tris盐酸和EDTA的混合液.理论上用TE保存好,不容易降解.
一般配的时候要先配成储存液(浓度是100umol/L),在配成使用液(浓度是10umol/L).这样的好处是引物不容易降解.
引物忌讳反复冻溶,大家要注意.如果你都配成了使用液就应该分装.使用液放在4度(2/3个月没问题的),储存液放在-20度.
引物稀释很简单,一般装引物的管子上都标有引物的量如3.6nmol/OD,可直接往管中加360ul的无菌双蒸水溶解就可以了,在加水之前要先高速离心管子几分钟,加水后要高速漩涡混匀几分钟就可以用了,此时的储存浓度是10umol/L,如果体系是20ul一般加1ul引物(引物的使用浓度最大为10pmol/ul,但一般在0.5-5pmol/ul即可 ).
引物的浓度设定,不同的人有不同习惯,有的喜欢稀释成100uM的,有的习惯于稀释成20uM,也有的稀释成10uM的.建议稀释成20uM的浓度,因为如果你稀释成100uM,当你所做PCR的体系不是很大的时候,体积太小了引物就不好加,容易产生误差;如果是稀释成10uM,引物浓度过低,容易降解.不过不管你稀释成多大浓度的,最好分装保存,免得反复冻融容易降解.
⑤ 请问引物是怎么稀释的
上面网友讲的估抄计应该会出现袭在你合成的引物单上。 在实际操作时,你首先需要进行离心。离心前请不要打开盖子。 离心后,在离心管底可见白色沉淀,这时你可根据合成单上的说明,加入适量的ddH2O或者Elution Buffer。合成单上标有Tm值,OD值以及引物长度等。通常,会有1OD=?ug的标记(由于引物长度不同,此处数值也对应不同),直接按??值加入等量ddH2O(如20ug对应加入20ul水)便可稀释为1ug/ul 最后充分涡旋,使沉淀完全溶解。 -20度保存,使用时,应稀释10倍。
⑥ 用TE稀释质粒与用超纯水稀释有什么不一样的
和ddH2O相比,TE溶液有利于保证核酸物质的稳定性,便于长时间的保存。个人经验:TE配置不合格的话会影响下游的一些操作,一般都是直接用ddH2O。
⑦ 引物用什么稀释
是做什么的引物?如果是PCR的,因为cDNA是比较稳定的,直接用双蒸水ddH2O稀释就行啦
⑧ 稀释引物用去离子水可以吗
用一般的纯化水就可以了,我们一般都用哇哈哈水,呵呵
⑨ 溶解引物需要什么水
先离心!然后加入适量的水或TE溶解。一般配制成较高浓度的母液(约100μM),保存于-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。引物浓度不宜偏高,浓度过高有两个弊端:一是容易形成引物二聚体(primer-dimer),二是当扩增微量靶序列并且起始材料又比较粗时,容易产生非特异性产物。一般说来,用低浓度引物不仅经济,而且反应特异性也较好。一般终浓度用0.25-0.5pM/μl较好。
1 引物的分子量如何计算? 比如:AAGCTTTTACCGC的分子量是多少?
2 OD值,1个OD值是不是等于40UG。
3 质量数,质量数的含义是什么,怎么计算?
4摩尔数(μmol)和终浓度(pM)和稀释水量(μl)
是不是计算稀释引物都要用到以上四点的各个参数?具体的公式是什么呢?
合成引物的单子上应该有算法:
1OD=33ug
1个碱基的分子量=324.5
(以上为近似值,通常都这样用)
1条引物的分子量=碱基数*324.5
质量数=OD*33ug
摩尔数=质量数/分子量
先离心的原因是什么?
因为引物合成后是干粉状的,在运输过程中可能会沾到管壁或管盖上,直接打开有些粉末可能会飘出去,引物的量就减少了。先离心使粉末都到管底,可以避免这种现象的发生。
然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量
33nmol/OD×管上所标OD值×100
是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。
可于-20度保存。
订引物回来的说明书背面一般都有引物稀释计算的说明的.
注意分装!
⑩ pcr用超纯水
最好还是在冰上做啦,一次两次没有问题,久了多了可能问题就出来了
一般用的是灭菌的双蒸水
保证引物的终浓度就可以.都是用水稀释的,没啥差别