❶ 高效液相色谱纯化蛋白质一般都用什么柱子
色谱柱在HPLC中是非常关键的部件.一台色谱仪如果没有色谱柱几乎什么工作也做不了.色谱柱是消耗品,有一定寿命,使用中也非常容易出问题.普通的正相反相色谱柱使用得当可用一、两年.使用不得当用两、三个月就可能损坏.所以使用中应该非常注意.
1.
在使用一根新的色谱柱之前,一定要看柱说明书,将柱子的使用压力、pH值、温度范围和所用流动相种类都要弄清楚.接触最多的是C18色谱柱,它对试剂应用的范围非常广,甲醇、水、乙腈、四氢呋喃、三氯甲烷、正乙烷、各种缓冲盐都适用.但其他的色谱柱所使用的试剂就有一定的要求,有的色谱柱只能使用水,不能使用有机试剂,有的色谱柱只能使用有机试剂,而且使用指定是某一种,象GPC色谱柱.这些事情一定搞清楚,如果流动相使用不对,柱子很快会损坏.另外在更换柱子时不能让不能使用的流动相进入柱子.
2.
柱子是有方向的,柱子上箭头的方向就是流动相流动的方向.当换新柱子时,不要马上就接到检测器上使用.将柱子入口处接在进样器的出口,柱子出口处（即箭头的一端）先不接检测器,按箭头方向垂直朝上,用流动相（甲醇）以1ml/min的流速冲洗1min左右.将柱子里的小气泡全部赶走以后再接到检测器上,否则小气泡跑到检测池里,就很难赶走,检测器产生噪声信号,基线也就走不好.
3.
关于压力对色谱柱的影响：常用的正反两相色谱柱一般耐压在12～20MPa之间,生产厂家不同,耐压也不同,从理论上讲耐压高的色谱柱柱效就高,但柱效高低不仅与耐压的高低有关,还有其他因素.从使用中看,在保证柱效的同时,耐压不要太高,仪器所显示的压力是流路、混合器、自动进样器、柱压、流通池总体的压力,检查柱压力应分段检查.压力过高不仅柱子受不了,其他的部件也会出问题,例如自动进样器.
4.
色谱柱对pH值是有一定的使用范围.以硅胶为担体的柱子一般使用范围在2～7pH.
耐碱性能不太好,流动相的pH大于8会使硅胶溶解.有些分析条件须用碱性流动相,这时一定要选耐碱性好的色谱柱,流动相的PH值过高或过低,流动相使用纯水,使用高浓度磷酸盐缓冲溶液,使用离子对试剂等,均可能造成色谱柱填料被化学破坏,这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的.
5.
色谱柱的使用温度不要超过说明书上规定的温度.一般使用温度在60℃以下,典型硅胶基质色谱柱的使用温度在5℃与60℃之间,高温使用会缩短柱寿命.
6.
色谱柱使用过程中压力的骤然波动,温度的骤然变化或机械撞击都会对色谱柱床产生影响.进样过程中,进样阀转动太慢引起压力波动；流速的突然增大都应在日常分析中尽量避免.一般说来,在低柱压下操作可大大减少由压力波动造成的柱效损失.这种问题是不可修复的
7.
色谱柱内存在缓冲盐时,如果用高浓度甲醇或其他有机溶剂冲洗色谱柱,会导致柱内缓冲盐结晶析出,造成柱压明显升高.出现该问题时,反相色谱柱首先应使用20%左右有机溶剂的水溶液低流速冲洗色谱柱,使柱内的盐全部溶解冲出,再换成高浓度甲醇或其他有机溶剂的流动相.
8.
样品的预处理,许多样品,特别是生物样品与中药材,其组分复杂,样品预处理是影响色谱柱寿命的关键.样品经过常规的前处理后,进样前还需进行以下步骤：a.用微孔过滤膜出除去样品中的不溶颗粒,以免赌塞柱头筛板及柱内填充床,使柱压升高.b.将样品用流动相溶解或用与流动相互溶的溶剂溶解.
9.
为了保护色谱柱,在色谱柱前接了一个保护柱.保护柱通常是比较短的分析柱,通过吸附可能污染分析柱的强保留杂质,达到保护色谱柱的目的.保护柱的筛板与在线过滤器一样可以阻挡微粒杂质.为了达到最好的保护效果同时避免导致色谱结果的改变,最好选用与分析柱相同或相似的填料填充保护柱.
10.
色谱柱用合适的溶剂保存,若为C18柱推荐用甲醇保存.在日常分析中,流动相含有的不纯物质和样品中的某些组分会吸附在色谱柱中,随着分析时间的延长,吸附量会越多,所以柱子要经常清洗,一般柱子使用一两个星期洗一次,柱子不同清洗的流动相就不同,C18柱子常用甲醇清洗,不要用水清洗这对柱子不好,一般清洗3～4小时,另外色谱柱长时间不用,存放时要将柱子洗干净,脏柱子放置时间越长,柱效会大大降低.存放时,柱内应充满溶剂（甲醇或乙腈）,两端封死.
近几年化验室用的液相色谱仪是越来越多,所用色谱柱的种类也越来越多,问题出的也较多,值得注意的是,不论怎样对色谱柱进行处理,一般都很难恢复到原有水平,因此,大家再使用色谱柱之前一定要看说明书,把以上几项问题搞清楚后再使用,尽量避免发生如上问题.
❷ 液相色谱能不能用纯水冲柱子为什么
C18柱子不能用纯水冲洗,再说本来就堵了,压力很高应该选择压力低的溶剂.如果你确定是回堵塞了,就用纯乙腈反冲,先用低答一点的流速,比如01ml/min,看压力情况,不要超过200bar,再慢慢提高流速,但不要超过1.的流速,如果是真的...
❸ 液相色谱里面能只用水做流动相吗
这个得看你的色谱柱。
一般的反相色谱柱不耐纯水。如果用的话会特别费。专
我当初做过属一个实验，流动相是0.025mol/L的KH2PO4，色谱柱是C18柱，大概半个月换一根吧。
特殊的色谱柱可以耐受纯水，但是可能分离效果不好，峰型也不一定好。
另外，纯水很 容 易 长微生物。一般纯净水开瓶之后在25℃放置1天，过滤的速度就会缓慢，放三天就浑浊了。如果你的流动相是纯水，那么系统、色谱柱很容易堵塞。所以不建议使用。
❹ 如何有效选择高效液相色谱柱
使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。
❺ 纯水是否能通过高效液相色谱柱
看是什么柱子，有一些做糖的柱子就是要求纯水做流动相的。但一般的C8或C18柱子不行，要求最少5%有机相，以防对色谱柱伤害
❻ 碳十八色谱柱能进水吗
可以。不知道你说的“进水”是用水做流动相还是用水作为样品，不过都是可以的。
C18是最常见的回反相色谱答柱。反相的色谱柱都是可以用水作为流动相的。
不过一般来说，至少要有10%的有机相，也就是流动相里最好加入至少10%的甲醇或者乙腈。也有色谱柱的厂家说可以耐受100%的纯水相，不过如果用100%的水作为流动相，对色谱柱和的损伤有点大，会减少寿命。
样品进水溶液就更没有问题了，流动相那么大体积的水溶液都可以进柱子，进样不过几微升的体积而已，当然也是可以的。
❼ 液相色谱柱merck rp18可以用100%水做流动相吗
一般是严禁用纯水做流动相的，对柱子伤害比较大
你可以看看你用来检测什么物质，然后根据对应的国标看看流动相是什么
纯水容易把填充物冲塌陷