① 在制备酪蛋白过程中,在第一步中用缓冲液洗涤沉淀与用蒸馏水洗涤沉淀提取酪蛋白理论上是不是应该缓冲液那个
从牛奶中分离酪蛋白和乳糖
一、引言
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/l。酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸钙-磷酸钙复合体胶粒存在，
胶粒直径约为20～800纳米，平均为100纳米。在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白会沉淀，加工后可制得干酪或干酪素。本实验利用加酸，当达到酪蛋白等电点PH=4.7时，酪蛋白沉淀。脱脂乳中除去酪蛋白后剩下的液体为乳清，在乳清中含有乳白蛋白和乳球蛋白，还有溶解状态的乳糖，乳中糖类的99.8%以上是乳糖，可通过浓缩、结晶制取乳糖。
二、实验材料和试剂
脱脂乳或脱脂奶粉。
醋酸-醋酸钠缓冲溶液（PH=4.7），95%乙醇，乙醚，碳酸钙粉末，苯肼试剂。
三、实验步骤
1. 从牛奶中分离酪蛋白
在烧杯中加入2g脱脂奶粉，再加入40ml40℃，PH=4.7的醋酸-醋酸钠缓冲溶液40ml，
用PH精密试纸检验液体的PH值。静置冷却至室温，倾去上层清液（留作分离乳糖用），剩下的悬浮液分别装入两支离心试管中，用转速为2000转/分离心分离3～5分钟，倾出上层清液，（合并于上一清液中），得酪蛋白粗品。于离心管中加入5ml蒸馏水，用玻棒充分搅拌，洗涤除去其中的水溶性杂质（如乳清蛋白，乳糖以及残留的缓冲溶液），离心后弃去上层液，再用蒸馏水洗一次。于试管中加入5ml95%乙醇，充分搅拌，离心后弃去乙醇溶液，用乙醇洗涤主要是除去磷脂类物质。最后再用5ml乙醚以同样方法洗涤，以除去脂肪类物质。将酪蛋白沉淀物凉干，称重、并计算得率。
2. 从牛奶中分离乳糖
在除去酪蛋白的乳清中，加入1.5g CaCO3粉末，搅拌均匀后加热至沸。加CaCO3的目的一方面是中和溶液的酸性，防止加热时乳糖水解，另方面又能使乳白蛋白沉淀。过滤除去沉淀，在滤液中加入1～2粒沸石，加热浓缩至3～5ml，加入10ml 95%乙醇（注意离开火焰）和少量活性炭，搅拌均匀后在水浴上加热至沸腾，趁热过滤，滤液必须澄清。加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用95%乙醇洗涤产品。
3. 乳糖成脎试验
取自制乳糖溶于少量水中，浓度约为5%，在试管中加入1ml乳糖溶液，1ml苯肼试剂①，摇匀，试管口用棉花塞住，在沸水浴中加热，并不时振摇，加热10～15分钟后，取出放置冷却，乳糖脎成结晶析出。取少量乳糖脎在显微镜下观察其结晶形态，可证实为乳糖。
①苯阱试剂有毒，小心使用，勿触及皮肤，如触及皮肤先用稀醋酸洗，再用水洗。
另外附上：
蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤：
（一）材料的预处理及细胞破碎
分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有：
1. 机械破碎法
这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。
2. 渗透破碎法
这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
3. 反复冻融法
生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。
4. 超声波法
使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。
5. 酶法
如用溶菌酶破坏微生物细胞等。
(二) 蛋白质的抽提
通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100等），使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。
（三）蛋白质粗制品的获得
选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法：
1. 等电点沉淀法
不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。
2. 盐析法
不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。
3. 有机溶剂沉淀法
中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。此外，有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性，使用该法时，要注意在低温下操作，选择合适的有机溶剂浓度。
（四）样品的进一步分离纯化
用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。
② 蛋白质纯化仪
蛋白质纯化与结晶的原理 获得蛋白质的晶体结构的第一个瓶颈，就是制备大量纯化的蛋白质（>10mg），其浓度通常在10mg/ml以上，并以此为基础进行结晶条件的筛选。运用重组基因的技术，将特定基因以选殖（clone）的方式嵌入表现载体（expression vector）内，此一载体通常具有易于调控的特性。之后再将带有特定基因的载体送入可快速生长的菌体中，如大肠杆菌（Escherichia coli），在菌体快速生长的同时，也大量生产表现载体上的基因所解译出之蛋白质。一般而言纯度越高的蛋白质比较有机会形成晶体，因此纯化蛋白质的步骤就成为一个重要的决定因素。 在取得高纯度的蛋白质溶液后，接下来就是晶体的培养。蛋白质晶体与其他化合物晶体的形成类似，是在饱和溶液中慢慢产生的，每一种蛋白质养晶的条件皆有所差异，影响晶体形成的变量很多，包含化学上的变量，如酸碱度、沉淀剂种类、离子浓度、蛋白质浓度等；物理上的变数，如溶液达成过饱和状态的速率、温度等；及生化上的变数，如蛋白质所需的金属离子或抑制剂、蛋白质的聚合状态、等电点等，皆是养晶时的测试条件。截至目前为止，并无一套理论可以预测结晶的条件，所以必须不断测试各种养晶溶液的组合后，才可能得到一颗完美的单一晶体。 蛋白质晶体的培养，通常是利用气相扩散法（Vapor Diffusion Method）的原理来达成；也就是将含有高浓度的蛋白质（10～50mg/ml）溶液加入适当的溶剂，慢慢降低蛋白质的溶解度，使其接近自发性的沈淀状态时，蛋白质分子将在整齐的堆栈下形成晶体。举例来说，我们将蛋白质溶于低浓度（~1.0M）的硫酸铵溶液中，将它放置于一密闭含有高浓度（~2.0M）硫酸铵溶液的容器中，由气相平衡，可以缓慢提高蛋白质溶液中硫酸铵的浓度，进而达成结晶的目的。 蛋白质晶体在外观上与其他晶体并无明显不同之处，但在晶体的内部，却有很大的差异。一般而言，蛋白质晶体除了蛋白质分子外，其他的空间则充满约40%至60%之间的水溶液，其液态的成分不仅使晶体易碎，也容易使蛋白质分子在晶格排列上有不规则的情形出现，造成晶体处理时的困难及绕射数据上的搜集不易等缺点。但也由于高含水量的特性，让蛋白质分子在晶体内与水溶液中的状态，极为相似。所以由晶体所解出的蛋白质结构，基本上可视为自然状态下的结构。
③ 生物高手请进：请问“利用透析法纯化蛋白酶时，应以蒸馏水作为透析液”这句话为什么错了难道蒸馏水会...
1，用缓冲液更能保证蛋白质的活性，用蒸馏水虽说没有严重错误但对蛋白质活性的保持还版是有风险的，若实验权中不小心溅进去酸或碱，显然缓冲液更保险。
2，合适的缓冲液可以抑制蛋白质水解，保持将ph控制在等电点附近，防止蛋白质聚沉。3，蛋白质多亲水，缓冲液中离子可以防止过多水分子水合蛋白质。
至于别的缓冲液，最好还是用磷酸，原因：1，磷酸三元且弱酸，缓冲余地更大，而且磷元素比较亲生物。2，碳酸钠，碳酸氢钠易分解，亚硫酸根又时不时会产生有毒物质，硫代硫酸根又活泼，氢氟酸，次氯酸更不用说，常见的只有磷酸缓冲液最佳。
④ 纯净水和蒸馏水有什么区别哪种水比较好
1、纯净水指的是不含杂质的H2O，简称净水或纯水，是纯洁、干净，不含有杂质或细菌的水，如有机污染物、无机盐、任何添加剂和各类杂质，是以符合生活饮用水卫生标准的水为原水。
2、蒸馏水就是将水蒸馏、冷凝的水，蒸二次的叫重蒸水，三次的叫三蒸水。低耗氧量的水，加入高锰酸钾与酸工业蒸馏水是采用蒸馏水方法取得。（简单地说就是水沸腾后液化成的小水滴）
蒸馏水
采用蒸馏法或其他多层过滤加工制成，将有害物质及微生物去除，但同时也去除了钾、钙、镁等人体所需的矿物质。
在这个看似十分严密的生产过程中却隐藏着一定的风险。自来水中含有氰化物和挥发酚，这两种物质容易挥发，用蒸馏法生产则会浓缩这两种物质的含量。在蒸馏的过程中，如果方法不注意，将会存在风险。
肾结石患者建议选择无矿物质的蒸馏水为好，对于健康体质的人群，则不建议过多饮用蒸馏水。
没有矿物元素，容易有氰化物和挥发酚。
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纯净水
纯净水是用符合生活饮用水卫生标准的水为原料，通过离子交换、反渗透等生产工艺制成。一方面滤掉了水中的有害物质，另一方面也滤掉了对人体有益的矿物质和微量元素。
离子含量低，水的硬度低，几乎不含矿物质，用它来烧水不会形成水垢，但长期饮用可能会造成微量元素缺乏，降低人体免疫力，增加心脑血管患病的风险。
运动量大、出汗多的如运动员、炼钢工人等人群不宜大量补充纯净水，因为无法从中摄取钠等微量元素。
是很干净，但缺乏营养元素，不建议长期喝。
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蒸馏水能喝吗
水沸腾后产生的水蒸气经过冷却凝缩，再次成为水，这样的加工的水被称为蒸馏水。蒸馏水能喝吗，有网友认为蒸馏水最纯净，可以饮用，而且饮用后也没有什么症状发生。但是，蒸馏水是去除了有机物和无机物的，长期饮用只怕不能满足人体对必需的物质的吸收。所以蒸馏水最好不要长期饮用。
1、蒸馏水是经加热至蒸发气化，水蒸汽经冷凝得到的水，它是比较纯净的卫生用水，常被用来配制药剂和化学试剂等，但不宜当饮用水喝。
2、蒸馏水经过长时间的加热沸腾，水中的一部分硝酸盐就会变成亚硝酸盐，亚硝酸盐会使血液中的血红蛋白变性，从而使血压下降，严重时会引起血脱。
3、蒸馏水在蒸馏过程中失去很多人体需要的矿物质，如果大量长期饮用蒸馏水，会引起胸闷、恶心、腹泻和体力衰退、性情焦躁等症状，危害人体健康。
4、蒸馏水没有人体所需的矿物质元素镁、钠、钙，对人体没什么好处，长期饮用会导致人体无机盐流失。
5、蒸馏水是活跃的吸收媒介，当它与空气接触，会吸收二氧化碳令水变酸。蒸馏水喝得越多，身体的酸化越利害。
⑤ 在进行蛋白质盐析时,用自来水代替蒸馏水进行试验,试验结果会不同么为什么
肯定不同,因为自来水杂质较多.不同的盐,结果都不相同,何况水质不一.
⑥ 蒸馏水是什么呢
蒸馏来水就是将水源蒸馏、冷凝的水，蒸二次的叫重蒸水，三次的叫三蒸水。低耗氧量的水，加入高锰酸钾与酸工业蒸馏水是采用蒸馏水方法取得。（简单地说就是水沸腾后液化成的小水滴）
蒸饭，蒸包子时锅盖上的水珠都是蒸馏水。
⑦ 透析法纯化蛋白酶为什么不能用蒸馏水
溶解度问题
⑧ 利用透析法纯化蛋白酶应以蒸馏水作为透析液这句话对吗
不对
用缓冲溶液
⑨ 为什么利用透析法纯化蛋白时，为什么不能用蒸馏水做透析液
因为蛋白在范馏水中不稳定。也许是进化的关系，蛋白要保证有一定浓度的盐离子才能比较稳定，相互之间不会产生聚集而沉淀。
一般如果没有特别的溶液，用PBS就可以了。最好是放四度冰箱，经常换水，尽快透析完。
⑩ 蛋白质纯化方法及原理
原理：不同蛋白质具有不同的等电点，当蛋白质混合物调到其中一种蛋白质的等电点时，这种蛋白质大部分和全部被沉淀下来。
将待提纯蛋白质放在透析袋中放在蒸馏水中，利用磁力搅拌器。常用的半透膜：玻璃纸、火棉和其他材料合成。
当不同分子大小的蛋白质混合物流进凝胶层析柱时，比凝胶网孔大的分子不能进入珠内网状结构，排阻在凝胶珠以外，在凝胶珠缝隙间隙中向下移动。而比孔小的分子不同程度地进入凝胶珠内，这样由于不同大小分子所经历的路径不同而到分离。