『壹』 pcr实验室分为哪四个区
PCR扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。
为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
PCR原理
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。
『贰』 PCR实验室规划设计怎么布局
SICOLAB这样布局设计:
一、临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域:
1、试剂贮存和准备区
2、标本制备区
3、扩增反应混合物配制和扩增区
4、扩增产物分析区
如使用全自动分析仪,区域可适当合并。
二、各工作区域必须有明确的标记,避免不同工作区域内的设备、物品混用。
三、进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,即试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
SICOLAB实验室整体设计建设工程、生物样本库建设工程、GMP环境建设工程、环保工程。
『叁』 PCR实验室离心机应存放在第几区
1. 要有紧连PCR实验室的高压灭菌锅。
2. PCR实验室内每个房间的所有进、出风口均需加装高效过滤器。
3. 标本处理间必须配备A2生物安全柜和通风橱并有外连,外连出口需加高效过滤膜。
4. PCR实验室的压力梯度,从高到低单一流向:试剂制备区--标本制备区--扩增区--产物分析区,建议调整为:试剂制备区+10pa>标本制备区0pa>扩增区—10pa>产物分析区—15pa~—20pa。缓冲间压力梯度为 试剂制备区—10pa、标本制备区—10pa、扩增区—5pa、产物分析区—10pa。
5. 外走廊内距离标本制备区的门最近的地方加装一个水池(手卫生用),并放一个半截柜(用于存放和穿防护服等);标本制备区实验室内有两个水池(一个倾倒废液,一个用于手卫生),此区的缓冲间加装一个水池(用于脱防护服时手卫生)。
6.建议紧邻PCR实验室洁净区设置厕所、淋浴房和休息间。
『肆』 标准的pcr实验室一般是正压的工作区是哪里
试剂准备区。
试剂准备区用于试验试剂的准备,该区域为正压,目的是防止污染物质溢入。
此区主要是进行试剂的制备分装和主反应混合液的制备,试剂盒用于样品制作的材料应直接运送至该区域。
『伍』 请述如何进行pcr实验室的工作独立分区,pcr实验室分区有哪些要求
要求及功能分区PCR实验室分为四个区域,进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,不同的工作区域使用 不同的工作服(例如不同的颜色)。
工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出,
四区域分别 1.试剂配制区n2.样品处理区n 3.核酸扩增区n 4.产物分析区n 如使用全自动分析仪,区域可适当合并,三四区可合并为扩增产物分析。
各区的功能是:
1.1.1 试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。
1.1.2 样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。
1.1.3 扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
1.2 扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间最好有一定的间隔。
1.3 使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
1.4 在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内: 1.4.1 在生物安全柜内操作。
1.4.2 每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。
1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
1.4.4 用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。
设计要求:
PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式,现要主要是以组合形式为主流。完成一组PCR 实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还 应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。
对于这种布置形式的PCR实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。
二、组合形式
所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域 的形式。对于组合形式PCR实验室,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体 布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。 试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染,可以通 过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。
核酸扩增室及产物分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品,可以通 过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。
在理想情况下,PCR实验室缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向 室内。
PCR实验室进风由原有中央空调控制,要求将中央空调风口安装到指定定点,且高度为地面铺 装好后2600mm处。 如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并。
若房间进深允许,可设PCR内部专用走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间 比专用走廊更有意义。 各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免 实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。 实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;
所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内 壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
主要设备 试剂准备区 仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等,加样器、天 平除了要专用外,还应有定期校准。 试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子 生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。 标本制备区 仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等 扩增区 扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩 增仪需进行校准。并配备UPS电源,以防止由于电压的波动,停电对扩增效果的影响。 分析区 本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规定的.
主体结构:主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污 染、积尘、不易清扫等问题。
结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。 标准的四区分隔和气压调节:将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增,产物分析四个独立的实验区。整个区域有一个 整体缓冲走廊。
每个独立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试 剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可打开缓冲区,缓冲区和 PCR 扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上 都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
消毒:在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。
在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。 不锈钢传递窗:试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在 传递过程中不受污染(人物分流)。
地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。便于进行清扫,耐腐蚀。 照明灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。 在建设的过程中应注意: 规范的安装流程和全面的服务流程。
『陆』 标准PCR实验室设计原则是什么
(一)标准PCR实验室的工作区
(1)试剂准备区
设置有实验桌、柜子、冰箱、可移动紫外灯、与标本制备区连通的传递窗和椅子,在实验桌上可放置实验仪器设备(包括离心机、震荡器、移液器、离心管、废液缸和垃圾筒等)。
(2)标本制备区
设置有实验桌、冰箱、生物安全柜、可移动紫外灯、水槽和椅子,在实验桌上和生物安全柜内还放置有实验仪器设备(包括离心机、恒温金属浴、移液器、离心管、废液缸和垃圾筒等)。
(3)PCR扩增区
设置有实验桌、柜子、与标本制备区连通的传递窗和椅子,在实验桌上放置有实验仪器设备(包括定量PCR扩增仪、电脑、打印机、废液缸和垃圾筒等)。前面设置有专用走廊,走廊的一侧是各实验区的缓冲区。三间实验区的布置依次为试剂准备区,标本制备区以及PCR扩增区。
(二)标准PCR实验室各工作区之间注意事项
(1)各工作区必须有明确的标记,避免不同工作区域内的设备、物品滥用。
(2)进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,即:试剂准备区→标本制备区→PCR扩增区。
(3)不同的工作区域使用不同的工作服,工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出。
(三)气流方向设置
(1)为了防止环境对扩增产物的影响,按临床基因扩增实验室调协要求,各实验区的气流设置方向为:空气由试剂准备区流向缓冲区,标本制备区流向缓冲区,缓冲区流向PCR扩增区(如图3所示)。
(2)工作时,应使缓冲区、缓冲区和PCR扩增区为负压,其它各室为“0”压或“+”压。可打开缓冲区,缓冲区和PCR扩增区的排风扇往外排气,并且在实验区的外墙上各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
『柒』 PCR实验室的布局应该怎样
基因扩增实验又称PCR实验,其特点是能将微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物学研究和实验的常规方法,广泛应用于生物学各个领域,例如:艾滋病检测、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的检测和诊断,DNA指纹、个体识别、亲子鉴定及法医物证,动、植物检疫,动物及其衍生产品检测,动物饲料、化妆品、食品卫生检测,转基因作物与转基因微生物检测等。
一、PCR实验室布局
PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有专用走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔独立的,各工作区有明显的标志,不能直通,如果紧密相连,需安装物品传递窗。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区,扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm,每20㎡一支40W的紫外灯。
二、实验室各区功能及主要设备
1、试剂准备区:主要进行试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其它区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的试剂。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。
对于气流压力的控制,本区并没有严格的要求。
2、样品制备区:主要进行样品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区主要设备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴等。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
3、扩增区:主要进行DNA扩增。此外,已制备的DNA模板 (来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区主要设备有:扩增仪、冰箱、离心机、加样器等。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。
4、扩增产物分析区:扩增产物的测定。本区主要设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。
本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
三、PCR实验室通风系