实验设计分离纯化养殖尾水的细菌

① 设计分析纯化大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草压宝杆菌混合菌液的实验程序并解析其理论原理

先将混合菌液稀释100倍 1000倍 10000倍……等几个梯度
然后用接种换蘸去这些液体在培养基中划Z字形接种
总会有一个梯度接种时可以将这些细菌分开
原理就是稀释的菌液当中可以蘸取单个的细菌
划Z 字线呢就可以把单个细菌分离开

② 生物实验设计，关于培养细菌，和细菌的分离与计数的具体操作步骤

细菌的培养步骤：配置培养基（计算→称量→溶化→灭菌→倒平板），接种细菌（平板划线法、稀释涂布平板法等），恒温箱培养。

土壤中细菌的分离与计数：土壤取样→制备土壤悬液→梯度稀释→涂布平板→培养观察→计数

。

③ 请用实例设计分离生物大分子目标物的实验方案及其可行性分析

1、根据生物目标物分离纯化的特点用实例设计实验方案？？
参考答案：
1.目的与意义（答到目的得2.5分，答到意义得2.5分）
随着科学技术的发展及社会的进步，人们对食品有了新的要求，从单纯摄取营养成分为目的转变到摄取对健康有益、对防病有效的成分等多种目的，消费者对高糖高热量兴趣转向低糖低热量、人体难以消化、并可防龋齿、具整肠的作用糖类。
低聚乳果糖(lactosucrose)甜度低、热量含量低，难以被人体消化，不被口腔酶分解，有防止龋齿功能。同时它又是一种双歧杆菌的增殖因子，可以选择性地促进双歧杆菌的繁殖，使其在肠道中占有优势，从而改善肠菌群。此外人们发现低聚乳果糖能促进人体对钙的吸收，从而可治疗骨骼疾病。由于其具有优越的生理功能特性和良好的理化特性，深受消费者和食品、制药、日化、饲料等行业的青昧，市场需求不断上升。但是商业化低聚乳果糖产量低、费时长、工艺复杂、成本高，因此，利用基因重组技术、现代发酵技术、固定化酶技术、膜分离技术来实现低聚乳果糖高效低成本工业化生产具有重要意义，它将为低聚乳果糖在食品、动物饲料中、医药工业中的广泛应用奠定原料基础。

2.拟采用的技术路线（流程图合理并列出分离方法得7分，流程图合理未列出分离方法得4分，流程图不合理得1分）

克隆β-半乳糖苷酶的基因 → 构建工程菌

β-呋喃果糖苷酶的发酵条件优化

β-呋喃果糖苷酶纯化

蔗糖和乳糖的混合液→固定化β-呋喃果糖苷酶

分离反应液→固定化酶回收

糖浆产品→纳滤膜纯化→喷雾干燥

含低聚乳果糖70％粉末 ← 冷冻干燥 ← 蒸发浓缩含低聚乳果糖95％粉末

3.本研究的技术特点及技术优势（答到技术特点得2分，答到技术优势得2分）
目前日本公司均采用液体发酵法生产低聚乳果糖，生产用酶只能利用一次，后处理工艺需要活性炭脱色和离子交换树脂除盐，产品的总低聚乳果糖含量只有35-55%,还有约50%的葡萄糖、乳糖和蔗糖等副产物。本课题以乳糖和蔗糖为原料进行深加工，采用固定化酶法生产-纳米膜纯化耦合技术生产低聚乳果糖，生产用酶可反复利用，后处理工艺无需脱色和离子交换，工艺简化流程缩短，糖浆生产成本大幅度下降；并结合采用纳米膜过滤高新技术，能生产低聚乳果糖纯度达到95%以上的产品，可直接供糖尿病人服用。特别是粉状低聚乳果糖产品，贮存、运输和使用十分方便。

4.产品应用范围及市场前景（答到应用范围得2分，答到市场前景得2分）
产品应用范围广。a、作为益生素即双歧杆菌促生素。低聚乳果糖能明显促进肠道内双歧杆菌的增长繁殖，抑制腐败细菌的生长，调整与维持肠道健康；b、作为膳食纤维素，可以有效地降低血清胆固醇和血脂，对因血脂高而引起的高血压、动脉硬化等有一系列心血管疾病有较好的改善作用；c、作为活化因子即钙、镁、铁等矿物质和微量元素的活化因子，可以达到促进矿物质和微量元素吸收的效果，如在补钙、铁、锌等食品、保健品中添加低聚果糖，可以提向产品的功效；d、作为独特的低糖、低热值、难消化的甜味剂，添加于食品中，不仅可以改善产品的口味，降低食品的热值，而且可以延长产品的货架期。如在减肥食品中添加低聚果糖，可以极大降低产品热值；在低糖食品中低聚果糖，较难引起血糖升高；在酒类产品中添加低聚果糖，可以防止酒中内溶物沉淀，改善澄明度，提高酒的风味，使酒的口感更醇厚、更清爽；在果味饮料和茶饮料中添加低聚果糖，可以使产品口味更细腻柔和、更清爽。e、低聚乳果糖还是一种优于抗生素和益生素的新型饲料添加剂；f、低聚乳果糖还可用于药物、化妆品中。
市场潜力大。a、国际市场：目前日本市场低聚乳果糖年需求量在2500吨以上，以平均售价为800日元/公斤算，年销售额达到20亿日元；随着低聚乳果糖应用领域的不断扩展及日本市场、世界市场对低热值功能性甜味剂的需求不断增长，低聚乳果糖一直处于供不应求状态；b、国内市场：我国食品行业中的娃哈哈、光明和乐百氏等著名品牌为提高产品科技含量，已开始关注并参与功能性低聚糖的研制与生产。随着国内消费者对低聚乳果糖特殊保健功能的认知程度提高，国内消费市场也将启动，市场前景十分看好。
总之，本研究以蔗糖和乳糖为主要原料生产高纯度低聚乳果糖干粉、浓缩液等，为蔗糖和乳糖的深加工和生产产业链的拉长开辟了一条新途径。在国内外保健食品市场日趋扩大、社会需求日益增加的21世纪，该项目完成后研制出的具有我国自主知识产权的高纯度低聚乳果糖发展前景广阔，经济效益可观。

④ 试设计一个实验分离土壤中的细菌、放线菌、霉菌的纯培养

1.分别配细菌、放线菌和霉菌的培养基
2.得到不同浓度土壤溶液,涂布在三种培养基上.
3.从三种培养基上分别挑取单菌落,划线培养

⑤ 从活性污泥中初步分离和鉴定细菌的主要步骤

从活性污泥中初步分离和建立细菌最主要的步骤是要确定细菌提取的方式和确认细菌的种类，这方面都需要有深刻的研究

⑥ 如何从环境中分离得到厌氧固氮菌（设计试验）

取少量的土壤在培养基上培养，经过多次分离后得到一些细菌，再接种在另外的培养基上（这个培养基中加碳源、水、无机盐、不含氮的有机物）在无氧的条件下培养。最后经过多次分离，多次培养，就可以分离得到厌氧固氮菌。

⑦ 细菌分离培养的基本要领和常用方法有哪些

一、基本要领

菌种分离主要在培养皿上进行，常用的方法是稀释法和划线法。

菌种分离的目的是是微生物的一个个体通过繁殖，在固体培养基上长出肉眼能见的群体，然后根据培养特征，用接种针调取所需菌种并在显微镜下检查，证明为单一形状的菌体。

改变培养基条件也有助于菌种分离。没有一种培养基或一种培养条件能够满足一切微生物生长的需要，在一定程度上所有的培养基都是选择性的。

如果某种微生物的生长需要是已知的，也可以设计特定环境使之适合这种微生物的生长，因而能够从混杂的微生物群体中把这种微生物选择培养出来，尽管在混杂的微生物群体中这种微生物可能只占少数。

二、方法

1、稀释倒平板法

首先把微生物悬液作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。

如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。

2、涂布平板法

因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的微生物悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。

3、平板划线法

最简单的分离微生物的方法是平板划线法，即用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。

有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

4、 稀释摇管法

用固体培养基分离严格厌氧菌有特殊性，如果该微生物暴露于空气中不立即死亡，可以采用通常的方法制备平板，然后置放在封闭的容器中培养，容器中的氧气可采用化学、物理或生物的方法清除。

对于那些对氧气更为敏感的厌氧性微生物，纯培养的分离则可采用稀释摇管培养法进行，它是稀释倒平板法的一种变通形式。

先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右，将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。

培养后，菌落形成在琼脂柱的中间。进行单菌落的挑取和移植，需先用一只灭菌针将液体石蜡--石蜡盖取出，再用一只毛细管插入琼脂和管壁之间，吹入无菌无氧气体，将琼脂柱吸出，置放在培养皿中，用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察和菌落的移植。

(7)实验设计分离纯化养殖尾水的细菌扩展阅读

在以上介绍的几种方法中，平板分离法普遍用于实验室微生物的分离与纯化，稀释法是液体培养基分离纯化常用的方法。

一般情况下可以通过适当改善培养基的条件来培养特点菌种。

如为了得到嗜热微生物，可在50℃~60℃下进行培养。有时投加相应的抑制剂也能提高菌种分离效果，如在土壤样品的悬浮液中投加10%的苯酚数滴，可以抑制霉菌和细菌的生长，而有利于放线菌的分离。在培养基中投加一定量的青霉素或链霉素能抑制细菌的生长，而有利于霉菌的分离。

⑧ 下述微生物的生态环境如何如何设计实验分离它们嗜热菌,嗜盐菌,光合细菌,金

(一)鸣炮庆祝
用品：研钵、玻璃片、滴管、玻棒、纸。
氯酸钾、红磷、酒精、浆糊。
原理：氯酸钾为强氧化剂，红磷为易燃物，两者之间很容易发生化学反应。用药匙将它们相混时会发生燃烧。将混和物撞击时会发生猛烈的爆炸。
5KClO3＋6P＝5KCl＋3P2O5
操作：将2克氯酸钾晶体放在研钵里研成粉末，倒在玻璃片上。取0.6克红磷放在氯酸钾粉末旁。用滴管吸取酒精滴到两种药品上，使药品潮湿，然后用玻棒将它们混和均匀调成糊状，分成三等分。等它们干燥后分别用纸包紧粘牢。
庆祝开始时，把三个纸包先后用力朝水泥地或砖头上掼，就会发出三声炮响。
(二)玻棒点火
用品：玻棒、玻璃片、酒精灯。98％浓硫酸、高锰酸钾。
原理：高锰酸钾和浓硫酸反应产生氧化能力极强的棕色油状液体七氧化二锰。它一碰到酒精立即发生强烈的氧化-还原反应，放出的热量使酒精达到着火点而燃烧。
2KMnO4＋H2SO4＝K2SO4＋Mn2O7＋H2O
2Mn2O7＝4MnO2＋3O2↑
C2H5OH＋3O2→2CO2＋3H2O
操作：用药匙的小端取少许研细的高锰酸钾粉末，放在玻璃片上并堆成小堆。将玻棒先蘸一下浓硫酸，再粘一些高锰酸钾粉末。跟着接触一下酒精灯的灯芯，灯芯就立即燃烧起来，一次可点燃四、五盏酒精灯。
注意事项：七氧化二锰很不稳定，在0℃时就可分解为二氧化锰和氧气。因此玻棒蘸浓硫酸和高锰酸钾后，要立即点燃酒精灯。否则时间一长，七氧化二锰分解完，就点不着酒精灯了。
(三)钢丝点火
用品：钢丝、瓶盖、蜡烛、硫粉。
原理：利用铁丝上硫燃烧时火焰很淡，白天在远处看不出来，好象真的是钢丝把蜡烛点着的。
操作：事先把自行车钢丝一端锤扁成凹槽，在槽里放一些硫粉，加热熔化着火，备用。将一支蜡烛点燃后放在桌上。这时用瓶盖将烛焰盖灭，再用钢丝接触烛芯上升的白烟，烛火便复燃。可再盖灭，再点燃。这样一亮一灭，令人暗暗叫奇。
(四)手指点火
用品：研钵、小木板。
蜡烛、氯酸钾、硫。
原理：蜡烛的余烬使硫燃烧。硫燃烧时放出的热量使氯酸钾分解产生氧气，因而硫燃烧得更旺，余烬便着火了。
操作：取1克氯酸钾和0.5克硫，分别放在研钵里研成很细的粉末，然后把它们混和均匀。或者用十根火柴，把头药刮下研细也行。
在小木板上固定好一支蜡烛，并将它点燃。事先用手指头蘸些混和好的药粉。表演时，将烛火吹灭，趁着尚有余烬，把蘸有药粉的手指头，轻轻地向烛芯碰一下，蜡烛便可

⑨ 设计实验方案分离并区分以下微生物：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酪酸棱菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母

①原始样品用无菌水稀释后，涂布加富培养基平板，一份置于37℃培养：过夜后挑取长出的单菌落进行显微镜镜检。大肠杆菌,枯草芽胞杆菌，金黄色葡糖球菌属于细菌，生长速度较快，它们的最适生长温度在37℃附近。37℃过夜培养后长出的是这三种菌。嗜热脂肪芽胞杆菌的最适生长温度不在37℃附近，在此温度下，应该不长或生长极缓慢。酿酒酵母属于真菌，菌落形成时间比细菌长。
②将长出的单菌落，分别进行显微镜镜检细胞形态：大肠杆菌和枯草芽胞杆菌都是杆菌，细胞呈杆状；金黄色葡糖球菌是球菌，细胞呈球形。
③对杆状的菌进行革兰氏染色：大肠杆菌是革兰氏阴性菌；枯草芽胞杆菌是革兰氏阳性菌。
④原始样品用无菌水稀释后，接种于液体加富培养基中，置于55℃培养过夜培养：嗜热脂肪芽胞杆菌是嗜热菌，那么其最适生长温度高于55℃（实际最适生长温度为65℃），在此温度下长出的菌为嗜热脂肪芽胞杆菌；为了获得纯培养菌，可以转接50℃长出的菌种于固体培养基中，45℃（温度过高，固体琼脂培养基可能坍塌）培养过夜，挑取单菌落。
⑤原始样品用无菌水稀释后，加富培养基中添加15%的乙醇，然后接种样品，置于30℃培养2~3天。长出的菌为酿酒酵母。酿酒酵母是已知的唯一乙醇浓度可以耐受到15%以上的微生物。根据这个特点将它从样品中分离。
望采纳