① 紫外分光光度计如何使用 详细
使用前仪器要调零、调百校准,参比溶液又称空白溶液。测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液。通常,用参比溶液扫描的曲线应是一条平坦的直线。有时,基体中虽不含被测物质,但含有别的物质,这时必须保证其不影响测试。经常碰到的是试剂空白中含有被测物质,此时必须经过纯化将其除去。否则将影响测定结果。在色谱分析中,有时基体中可能存在一个以上的和被测组分相距较远的色谱峰,计算机在数据处理中不会计入它们,不影响测定。
以所含铁离子是多少为例:
参比溶液与测量溶液就相差铁离子含量,在测量之前要用不含铁离子的参比溶液扫描,调整仪器后(调100的过程),然后再测量含铁离子溶液的比色皿,这样测量溶液中的铁离子会形成自己特定的峰值,次峰值与数据库里基准峰值对比就可以得出溶液所含量了。如果数据库中没有铁离子的曲线,你还要自己先用不同铁离子浓度的溶液做工作曲线,然后进行测量。
② 用紫外分光光度计测I+G含量时,为什么样品溶液里要加入0.01mol/l的盐酸溶液
因为I+G是IMP和GMP的混合物,IMP与GMP是肌苷酸二钠和鸟苷酸二钠,这两种物质又是由肌苷和鸟苷组成的,所以根据肌苷和鸟苷在紫外吸收特性下,pH在3到6有最大吸收峰,所以选择用0.01盐酸当溶剂,同时做空白,但是在不同的pH值下,最大吸收的波长也是不固定的,多多少少都会有降解,所以要尽快检测,你可以在可以扫描光谱的紫外分光光度计下扫一下谱图,可以看到肌苷的最大吸收波长应该是248.5nm。以上是个人观点,请参考
③ 紫外分光光度计的使用步骤是什么
开机自检预热,主要设置狭缝,自动样品架控制,数据存储调用打印,测试光度、定量、光谱扫描、动力学测量、蛋白质测量。说起来简单,建议您可以联系下紫外的专业供应商 京东7G旗舰店或者青岛法特科技,让他们技术人员给您这边详细讲解下,很快就学会操作了,各品牌他们都很精通
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光纤熔接机主要用于光通信中光缆的施工和维护,所以又叫光缆熔接机。一般工作原理是利用高压电弧将两光纤断面熔化的同时用高精度运动机构平缓推进让两根光纤融合成一根,以实现光纤模场的耦合。
普通光纤熔接机一般是指单芯光纤熔接机,除此之外,还有专门用来熔接带状光纤的带状光纤熔接机,熔接皮线光缆和跳线的皮线熔接机,和熔接保偏光纤的保偏光纤熔接机等。
按照对准方式不同,光纤熔接机还可分为两大类:包层对准式和纤芯对准式。包层对准式主要适用于要求不高的光纤入户等场合,所以价格相对较低;纤芯对准式光纤熔接机配备精密六马达对芯机构、特殊设计的光学镜头及软件算法,能够准确识别光纤类型并自动选用与之相匹配的熔接模式来保证熔接质量,技术含量较高,因此价格相对也会较高。
最常见的单芯光纤熔接机的使用方法一般都基本相同:
1、开剥光缆,并将光缆固定到盘纤架上。常见的光缆有层绞式、骨架式和中心束管式光缆,不同的光缆要采取不同的开剥方法,剥好后要将光缆固定到盘纤架。
2、将剥开后的光纤分别穿过热缩管。不同束管、不同颜色的光纤要分开,分别穿过热缩管。
3、打开熔接机电源,选择合适的熔接方式。光纤常见类型规格有:SM色散非位移单模光纤(ITU-T G.652)、MM多模光纤(ITU-T G.651)、DS色散位移单模光纤(ITU-T G.653)、NZ非零色散位移光纤(ITU-T G.655),BI耐弯光纤(ITU-T G.657)等,要根据不同的光纤类型来选择合适的熔接方式,而最新的光纤熔接机有自动识别光纤的功能,可自动识别各种类型的光纤。
4、制备光纤端面。光纤端面制作的好坏将直接影响熔接质量,所以在熔接前必须制备合格的端面。用专用的剥线工具剥去涂覆层,再用沾用酒精的清洁麻布或棉花在裸纤上擦试几次,使用精密光纤切割刀切割光纤,对0.25mm(外涂层)光纤,切割长度为8mm-16mm,对0.9mm(外涂层)光纤,切割长度只能是16mm。
5、放置光纤。将光纤放在熔接机的V型槽中,小心压上光纤压板和光纤夹具,要根据光纤切割长度设置光纤在压板中的位置,并正确地放入防风罩中。
6、接续光纤。按下接续键后,光纤相向移动,移动过程中,产生一个短的放电清洁光纤表面,当光纤端面之间的间隙合适后熔接机停止相向移动,设定初始间隙,熔接机测量,并显示切割角度。在初始间隙设定完成后,开始执行纤芯或包层对准,然后熔接机减小间隙(最后的间隙设定),高压放电产生的电弧将左边光纤熔到右边光纤中,最后微处理器计算损耗并将数值显示在显示器上。如果估算的损耗值比预期的要高,可以按放电键再次放电,放电后熔接机仍将计算损耗。
7、取出光纤并用加热器加固光纤熔接点。打开防风罩,将光纤从熔接机上取出,再将热缩管移动到熔接点的位置,放到加热器中加热,加热完毕后从加热器中取出光纤。操作时,由于温度很高,不要触摸热缩管和加热器的陶瓷部分。
8、盘纤并固定。将接续好的光纤盘到光纤收容盘上,固定好光纤、收容盘、接头盒、终端盒等,操作完成。6489是我的幸运数字,祝你好运!
④ 紫外可见分光光度计使用中应注意哪些问题
【紫外可见分光光度计使用注意事项】在使用紫外可见分光光度计时,必须要注意一些使用后的维护、保养,和一些基本使用注意事项,才能达到更好的使用效果。
1、使用的吸收池必须洁净,并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。
2、取吸收池时,手指应拿毛玻璃面的两侧,装盛样品以池体的4/5为度,使用挥发性溶液时应加盖,透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净,检视应无溶剂残留。吸收池放入样品室时应注意方向相同。用后用溶剂或水冲洗干净,晾干防尘保存。
3、供试品溶液浓度除各该品种已有注明外,其吸收度以在0.3~0.7之间为宜。
4、测定时除另有规定外,应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照,采用25px石英吸收池,在规定的吸收峰±2nm以内,测几个点的吸收度或由仪器在规定的波长附近自动扫描测定,以核对供试品的吸收峰位置是否正确,并以吸收度最大的波长作为测定波长,除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的测定波长±2nm以内。
5、供试品应取2份,如为对照品比较法,对照品一般也应取2份。平行操作,每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。
6、选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度,否则测得的吸收度值会偏低,狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准,对于大部分被测品种,可以使用2nm缝宽。
⑤ 紫外分光光度计的使用步骤是什么
仪器名称:紫外/可见分光光度计系统
使用方法:开机步骤
1 开光谱仪电源
2 开计算机电源
3 在文件管理器中用鼠标指按UV WinLab图标,此时出现UV WinLab的应用窗口,仪器已准备好,可选用适当方法进行分析操作.
2 方法:在分析中必须对分光光度计设定一些必要的参数,这些参数的组合就形成一个“方法”.Lambda系列UV WinLab软件预设四类常用方法.
1)扫描(SCAN),用以进行光谱扫描.
2)时间驱动(TIME DRIVER),用以观察一定时间内某种特定波长处纵坐标值的变化,如酶动力学.
3)波长编程(WP)用以在多个波长下测定样品在一定时间内的纵坐标值变化,并可以计算这些纵坐标值的差或比值.
4)浓度(CONC)用以建立标准曲线并测定浓度.
2.1 进入所需方法,在方法窗口中选择所需方法的文件名.
2.2 方法的设定
2.2.1 扫描、波长编程及时间驱动
各项方法可根据显示的参数表,逐项按需要选用或填入,并可参考提示.
2.2.2 浓度
浓度方法窗口下方标签较多,说明做浓度测定时需要参数较多.用鼠标指按每一标签,可翻出下页,其上有一些需要测定的参数.必须逐页设定.
3 工具条
3.1 SETUP
当所需的各项参数都已在参数中设好后,必须用鼠标指按SETUP,才能将仪器调整到所设状态.
3.2 AUTOZERO
用鼠标指按此键,分光光度计即进行调零(在光谱扫描中则进行基线校正).
3.3 START
用鼠标指按此键,光度计即开始运行所设定的方法.
4 方法运行
4.1 扫描,时间驱动,波长编程
方法选好后,先放入参比溶液,按AUTOZERO键,进行自自动校零或背景校正结束后再放入样品,按START,分光光度计即开始进行,同时屏幕上出现图形窗口,将结果显示出来.
4.2 浓度
4.2.1制订标准曲线
1 方法选好后,确认各项数据正确,特别是REFS页中第一行要选中右上角的“edit mode”.再放入参比溶液,按AUTOZERO键自动校零或背景校正.
2 按setup,待该图标消失后,再按“start”,按提示依次放入标准色列的各管溶液,每次都按提示进行操作.
3 标准色列测定
完毕后,屏幕上出现calibgraphwindow,显示拟合的标准线,并标出各项标准管的位置,屏幕下方还有一条Concentration mode的对话框,可以用来修改拟合的曲线类型(按 change calbration),或修改标准溶液的任何一管(replace),或取消某一管(delete),或增加标准溶液管数(add).如过已经满意,则按analyse sample键,进入样品测定窗口.
4 标准曲线有关的各项数据,均在calibresultwindow中,可用鼠标将其调出观察.其中包括每个标准溶液的具体数据,标准曲线的回程方程式,相关系数,残差.
4.2.2样品浓度测定
4.2.2.1刚制定好的标准曲线接着进行样品浓度测定时
1 只需在concentration mode对话框按analyse sample键,进入样品测定窗口.
2 按设定的样品顺序放入各样品管,每次按提示进行操作.
3 屏幕上出现结果窗口,结果数据将依次显示在样品表中的相应位置.
4.2.2.2利用原有的标准曲线接着进行样品浓度测定时
4.2.2.2.1 调出所测定样品的浓度方法文件,首先调出refs页,将原设edit mode选项取消,改设左上角的using exiting
calibration.重新将方法存盘,则今后再调用时即不需再作修改.
4.2.2.2.2 在sample页中按要求重设各种样品名称机样品信息.
4.2.2.2.3 按工具条中setup键,将主机设到该方法所设定的条件.
4.2.2.2.4 将参比溶液放入比色室,按autozero键做背景校零.
4.2.2.2.5 按start键,按设定的样品顺序放入各样品管,每次按提示进行操作.
4.2.2.2.6 屏幕上出现结果窗口,结果数据将依次显示在样品表中相应位置.
⑥ 如何用紫外分光光度计,测量水中二甲苯的浓度(步骤)
分光光度计要测量的样品必须是均一的溶液,不能有沉淀,如果有沉淀的话就要摇匀。之于为什么这样做和可以做哪些测量、如何测量,下面详述:
分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。
而分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析。 常用的波长范围为:(1)200~400nm的紫外光区,(2)400~760nm的可见光区,(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm<-1>~400cm<-1>)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。 单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式: 1 A=log — =ECL T 式中 A 为吸收度; T 为透光率; E 为吸收系数,采用的表示方法是(E1% 1cm),即吸收度换算成溶液浓度为1%(g/ml),液层厚度为1cm的数值; C 为100ml溶液中所含被测物质的重量,g(按干燥品或无水物计算); L 为液层厚度 ,cm。 物质对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多,且常使用单色光纯度较差的仪器,故测定时应用标准品或对照品同时操作。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
分光光度计的简单原理
分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样品液。然而,实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大。
事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%(1A)。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动,都是正常的。另外,还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值,离子浓度等:在测试时,离子浓度太高,也会导致读数漂移,因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液,如TE,可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素:由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高(超过光度计的测试范围)。最后是操作因素,如混合要充分,否则吸光值太低,甚至出现负值;混合液不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。
除了核酸浓度,分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品,A320一般是0。
蛋白质的直接定量(UV法)
这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg 公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质,一般要消除320nm 的“背景”信息,设定此功能“开”。与测试核酸类似,要求A280的吸光值至少大于0.1A,最佳的线性范围在1.0-1.5 之间。实验中选择Warburg 公式显示样品浓度时,发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上,只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%,表明结果非常稳定。漂移的原因是因为Warburg 公式吸光值换算成浓度,乘以一定的系数,只要吸光值有少许改变,浓度就会被放大,从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高。
比色法蛋白质定量
蛋白质通常是多种蛋白质的化合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等几种方法。
Lowry 法:以最早期的Biuret 反应为基础,并有所改进。蛋白质与Cu2 反应,产生蓝色的反应物。但是与Biuret 相比,Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂;反应需要的时间较长;容易受到非蛋白物质的影响;含EDTA,Triton x-100,ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。
BCA(Bicinchoninine acid assay)法:这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2 反应产生Cu ,后者与BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强,反应后形成的化合物非常稳定。相对于Lowry法,操作简单,敏感度高。但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。
Bradford 法:这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应,产生的有色化合物吸收峰595nm。其最大的特点是,敏感度好,是Lowry 和BCA 两种测试方法的2 倍;操作更简单,速度更快;只需要一种反应试剂;化合物可以稳定1小时,方便结果;而且与一系列干扰Lowry,BCA 反应的还原剂(如DTT,巯基乙醇)相容。但是对于去污剂依然是敏感的。最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。
某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致,感到迷惑,究竟该相信哪种方法?由于各种方法反应的基团以及显色基团不一,所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。例如:Keller等测试人奶中的蛋白,结果Lowry,BCA 测出的浓度明显高于Bradford,差异显著。即使是测定同一样品,同一种比色法选择的标准样品不一致,测试后的浓度也不一致。如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质,以BSA作标准品,浓度1.34mg/ml,以a球蛋白作标准品,浓度2.64mg/ml。因此,在选择比色法之前,最好是参照要测试的样本的化学构成,寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外,比色法定量蛋白质,经常出现的问题是样品的吸光值太低,导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是,反应后1011分光光度计的重要配件—— 比色杯的颜色是有一定的半衰期,所以每种比色法都列出了反应测试时间,所有的样品(包括标准样品),都必须在此时间内测试。时间过长,得到的吸光值变小,换算的浓度值降低。除此,反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因。此外,非常重要的是,最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材质的比色杯,因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色,导致样品吸光值不准确。
细菌细胞密度(OD 600)
实验室确定细菌生长密度和生长期,多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验,需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液,之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作,必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数,做出校正曲线。实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值,原因是采用了显色的培养基,即细菌培养一段时间后,与培养基反应,发生变色反应。另外,需要注意的是,测试的样品不能离心,保持细菌悬浮状态。
分光光度计的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积,有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不适合比色法测定。因为反应中的染料(如考马斯亮兰)能让石英和玻璃着色,所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。
由于另外测试的样品量不同,所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求。目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量,亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯,样品用量仅需50μl,比色杯单个无菌包装,可以回收样品。如Eppendorf UVette塑料比色杯,是目前比色杯市场上一个革新。随着生命科学以及相关学科发展,对此类科学的实验研究提出更高的要求,分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器,也成为微生物、食品、制药等相关实验室的必备设备之一。
随着科技的发展,现在比色杯已经不是使用分光光度计时的必备物品。目前国外Nanodrop公司(现已被Thermo Fisher公司收购)生产的ND1000分光光度计与旧式分光光度计相比,已经可以做到无需稀释样品,无需使用比色杯,每次测量仅需1-2μl样品即可完成测量。
⑦ 紫外_可见分光光度法,用吸收系数法定量,公式是什么
一、原理可见光、紫外线照射某些物质,主要是由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收,而产生化合物的可见紫外吸收光谱。基于物质对光的选择性吸收的特性而建立分光光度法或称吸收光谱法的分析方法。它是以朗伯──比耳定律为基础。1朗伯—比耳定律A=lg—-=ECLT式中A为吸收度;T为透光率;E为吸收系数,采用的表示方法是(E1%1cm),其物理意义为当溶液浓度为1%(g/ml),液层厚度为1cm时的吸收度数值;C为100ml溶液中所含被测物质的重量(按干燥品或无水物计算),g;L为液层厚度,cm。二、使用范围凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物,根据在特定吸收波长处所测得的吸收度,可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。三、仪器可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200~400nm的紫外光区、400~850nm的可见光区。主要由辐射源(光源)、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。本仪器是根据相对测量的原理工作的,即先选定某一溶剂(或空气、试样)作为标准(空白或称参比)溶液,并认为它的透光率为100%(或吸收度为0),而被测的试样透光率(或吸收度)是相对于标准溶液而言,实际上就是由出射狭缝射出的单色光,分别通过被测试样和标准溶液,这两个光能量之比值,就是在一定波长下对于被测试样的透光率(或吸收度)。本仪器可精密测定具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物、有色物质或在适当条件下能与某些试剂作用生成有色物的物质。使用前应校正测定波长并按仪器说明书进行操作。四、仪器的校正1.波长的准确度试验以仪器显示的波长数值与单色光的实际波长值之间误差表示,应在±1.0nm范围内。可用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正。2.吸收度的准确度试验3.杂散光的试验4.波长重现性试验5.分辨率试验五、测定方法1.对照品比较法(1)按各品种项下的方法,分别配制供试品溶液和对照品溶液,对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的100±10%,所用溶剂也应完全一致,在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度后,按下式计算含量,即得。(2)计算式A样×G对/稀释倍数×100×1含量(%)=————————————--×100%A对×G样/稀释倍数×100×12.吸收系数法(1)按各品种项下的方法配制供试品溶液,在规定的波长处测定其吸收度,再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时,应注意仪器的校正和检定。(2)计算式A样含量(%)=——————————————-×100%G样/稀释倍数×(E1%1cm)对×100×13.计算分光光度法采用计算分光光度法应慎重。本法有多种,使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时,波长的微小变化可能对测定结果造成显著影响,故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品,如维生素A测定法,则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。六、注意事项1.空白溶液与供试品溶液必须澄清,不得有浑浊。如有浑浊,应预先过滤,并弃去初滤液。2.测定时,除另有规定外,应以配制供试品溶液的同瓶溶剂为空白对照,采用1cm的石英吸收池。3.在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度,以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确,除另有规定外,吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内;否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度,并以吸收度最大的波长作为测定波长。4.一般供试品溶液的吸收度读数,以在0.3~0.7之间的误差较小。5.吸收池应选择配对,否则要引入测定误差。
⑧ 求教使用紫外分光光度计测定人血红蛋白溶液的浓度
是可以测定的,具体的波长可以问问庚辰诺顶的专业技术人员吧,我也不是很清楚
⑨ 紫外分光光度计纯水吸光度
“进行分光光度计调节时,将高纯水推入光路调节100%透光比”这是正确的做法
“水样显色反应后测得到的吸光度减去高纯水作为水样进行显色反映后测得的吸光度”这是正确的原理,lz说的对