胶回收纯水洗脱

㈠ 胶回收DNA-漂洗液忘记加乙醇就直接上柱子了-可以补救吗

乙醇应该是展开剂吧
过柱子忘记加展开剂是影响分离效果的
如果刚加进去，应该影响不大，可以把上面一点点抠出来，单独装柱，用乙醇洗脱，再浓缩以后重新过柱子
如果已经加了有一段时间了，就直接在柱子里加乙醇吧
把柱子里的东西全洗脱出来没然再浓缩、重新过

㈡ pcr产物的胶回收和纯化的步骤是分开的吗

胶回收是胶回收，纯化是纯化。胶回收的过程也能达到纯化的目的，只是因为要跑胶要稍麻烦些，一般用于产物特异性不大好时。纯化相对就要省事多了，但不适用有非特异扩增的产物

㈢ 琼脂糖凝胶回收漂洗液成分是什么

你是想要了解漂洗液的成分的话，可以吧东西寄到像英格尔检测这样的大型第三方机构，做一份产品的成分分析就能够得到你想要知道的产品成分。

㈣ PEGE胶怎么回收到DNA我用沸水煮10分钟，捣碎后再煮10分钟，刚开始PCR后有带，现在怎么都没有带

从PAGE胶中回收DNA应该比较容易，
首先最简便的方法是跑PAGE胶后，根据目的条带切割，用直接购买的从PAGE胶回收DNA的试剂盒回收，得率可为80-90%左右。好几个公司都有售。
如广州齐科特生物工程公司的E.Z.N.A. Poly Gel DNA Extraction Kit（聚丙烯酰胺DNA胶回收） 从PAGE胶上回收DNA片段
上海皓嘉科技的【D2561-01】PAGE胶DNA回收试剂盒.
等等应该都可用，
其次，更简便，更简陋的方法是不需要试剂盒，直接PAGE胶跑完后，紫外灯下切割，在洗脱液中浸泡 37摄氏度，过夜。大部分都可溶入洗脱液中。但此法得率较低，我做过PAGE胶回收RNA，得率约50%，但DNA可能会高一些，不妨一试，祝你好运！

㈤ 质粒或者胶回收试剂盒最后一步洗脱时用的是试剂盒自带的TE buffer还是去离子水

用Buffer吧，质粒在一定离子强度和pH值的条件下溶解度要大于去离子水。

㈥ 胶回收的吸附柱没用平衡液bl进行处理，会对后续的实验有什么影响

不是避免与空气接触，关键是排除其中气泡，气泡影响分离效果。

㈦ 胶回收试剂盒里各溶剂的作用

1试剂盒

简介：
试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
2胶回收试剂盒的操作步骤(omega)

1. 配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段。任何类型或等级的琼脂糖都可以使用。
我们强烈的推荐使用新鲜的TAE/TBE电泳缓冲液。不要重复使用电泳缓冲液，旧的电泳缓冲液PH会增加而降低DNA的回收产量；[1]
2. 电泳足够时间后，在紫外灯下小心地把所需的DNA的片段切下来。并尽量去除多余的凝胶。
注意：DNA在紫外灯下的曝光的时间不要超过30秒，同时在紫外灯下操作的时候一定要戴保护眼镜。
3. 称取空离心管的重量，切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量，求出凝胶块的重量，近似地确定其体积。一般情况下，凝胶的密度为1g/ml，于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算：凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml；加入等倍凝胶体积的Binding Buffer，把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化，其间每隔2-3分钟混匀一次；
重要提醒：在凝胶完全溶解之后，注意凝胶-Binding Buffer混合物的pH值。如果其pH值大于8的话，DNA的产量将大大减少。观察混合物的颜色，如果是橙色或红色，则要加入5μl 浓度为5 M，pH为5.2的醋酸钠，以调低其pH值。经过这一调节，该混合物的颜色将恢复为正常的浅黄色。一般情况下，使用新鲜的电泳缓冲液，凝胶－Binding buffer混合物的PH值的不会升高；
4. 转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTM DNA柱子，并把柱子装在一个干净的2ml收集管内，室温下，10,000×g离心1min，弃去液体。
一个HiBind DNA柱子最多可容纳700μl的溶液，如果DNA-琼脂糖混合物的体积大于700μl，可先转移700μl溶液至柱子，离心完后，将余下的溶液继续加上柱子上。但是每一个HiBindTM柱子最多可以结合25~30μg DNA。如果预期产量较大，则把样品分别加到合适数目的柱中。
5. 将柱子重新套回收集管中，加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中；室温下，10,000×g离心 1分钟，去弃滤出液；这一步相当关键，不要忽略此步。
6. 将柱子重新套回收集管中，加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中，室温下，10,000×g离心1分钟，去弃滤出液；注：SPW Wash buffer在使用前必须按瓶子标鉴要求用无水乙醇进行稀释。
7. 将柱子重新套回收集管中，重复加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中，室温下，10,000×g离心1分钟，去弃滤出液；
8. 弃去液体，将空柱子重新套回收集管中，10,000×g离心1min以甩干柱基质残余的液体。
这步可以去除柱子基质上残余的乙醇，不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的。
9. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上，加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上，10,000×g离心1分钟，离心管中的溶液就是纯化的DNA产物，保存于-20度。
如果再洗脱一次的话可以把残余的DNA洗脱出来，不过那样的浓度就会较低。
DNA的产量及质量：
把纯化产物的样品稀释一定的倍数后，分别在260nm和280nm下测其光吸收值，回收得到的DNA的浓度可按以下公式来计算： DNA浓度=光吸收260×50×稀释倍数μg/ml
长度大于500bp的片段通常能纯化得到80%的产量。 而50bp~500bp的带则可达到55%~80%的回收率。(光吸收260/光吸收280)的比率是核酸纯度的一个标记。如果此值1.8，则意味着核酸的纯度>90%。另一方面，如果纯化产物的产量较低时，可以用琼脂糖EB电泳估算产物的浓度。

㈧ Dna胶回收实验中 binding buffer ，wash solution ，elution buffer的作用分别是什么

用binding buffer是为了增加洗脱柱对核酸的结合活性；wash solution是洗掉柱子里除核酸物质以外的杂质；而shuelution buffer就是最后把DNA从柱子上洗脱下来使用的溶液，一般是pH=8.0的TE，dd水也可以。

如果不是马上使用DNA，可以将切下的胶放入离心管中-20度保存，这样可以保存更长时间，而且对DNA影响较小；使用时再从胶里回收DNA。

(8)胶回收纯水洗脱扩展阅读：

把纯化产物的样品稀释一定的倍数后，分别在260nm和280nm下测其光吸收值，回收得到的DNA的浓度可按以下公式来计算： DNA浓度=光吸收260×50×稀释倍数μg/ml

长度大于500bp的片段通常能纯化得到80%的产量。 而50bp~500bp的带则可达到55%~80%的回收率。(光吸收260/光吸收280)的比率是核酸纯度的一个标记。如果此值1.8，则意味着核酸的纯度>90%。另一方面，如果纯化产物的产量较低时，可以用琼脂糖EB电泳估算产物的浓度。

㈨ 电泳做凝胶回收时应注意哪些细节

DNA胶回收，应该就是琼脂糖电泳的吧？首先要确定方法，是试剂盒还是自己配的试剂，试剂盒的话有protocal，照着做就是了，自己配的呢操作流程也跟试剂盒差不多，基本上都是切胶--加热溶解--上柱结合--洗涤杂质--去离子水洗脱 其次需要注意的就是相对应的几个环节呢，首先电泳缓冲液一定要是新的，保证所用的器具的洁净，包括刀片，避免污染，倒的胶尽量比平时厚，保证样品全部上完，其次避免紫外的长时间照射，切胶的时候尽量少切胶，上柱结合的时候洗涤液一定要记得加酒精，洗涤后多敞洗脱液一般用去离子水30-50ul，可以洗两次。

㈩ Takara胶回收试剂盒 说明书，具体操作步骤

1. 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段,任何类型或等级的琼脂糖都可以使用.我们强烈的建议您使用新鲜的TAE Buffer作为电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,因为会因其PH的升高而减少产量.新鲜的TBE也可以用,但只能得到较低的产量.
2. 当所需DNA片段完全分离时,转移凝胶至紫外灯上,尽可能快地把所需的DNA片段切下来.
注:切胶时尽量把多余的凝胶切去,DNA曝露在紫外灯下不能超过30秒.
3. 将带有目的片段的凝胶块转移至1.5ml离心管(离心管已经称重了)中,称重得出凝胶块的重量.近似地确定其体积.假设其密度为1g/ml(几乎所有DNA凝胶的密度都可以近似为1g/ml),于是凝胶块的体积便可通过如下方法得到:凝胶薄片的重量为0.2g, 则其体积为
0.2 ml.加入等体积的Binding Buffer(XP2),于55-65℃水浴中温浴7min或至凝胶完全融化,每2-3 min振荡或涡旋混合物.
重要提醒:在凝胶完全溶解之后,注意凝胶-Binding buffer混和物的pH值.如果其pH值大于8的话,DNA的产量将大大减少.观察混和物的颜色,如果是橙色或红色,则要加入5 ul 浓度为5 M,pH为5.2的醋酸钠,以调低其pH值.经过这一调节,该混合物的颜色将恢复为正常的浅黄色.
4. 取一个干净的HiBind DNA Mini柱子装在一个干净的2ml收集管内(已备好).
5. 将第三步获得的DNA/熔胶液全部转移至柱子中.室温下10,000 x g离心1分钟.弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.
6. 如果DNA/凝胶熔液的体积超过700ul,一次只能转移700ul至柱子中,余下的可继续重复第5步至所有的溶液都经过柱子.每一个Hibind DNA回收纯化柱都有一个极限为25gDNA的吸附能力.如果预期产量较大,则把样品分别加到合适数目的柱子中.
7. 弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.移300ul Binding Buffer(XP2)至柱子中,室温下, 10,000 x g下离心1min.
8. 弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.移700ul SPW Wash buffer(已用无水乙醇稀释的)至柱子中.室温下10,000xg离心1min.
注意:浓缩的SPW Wash Buffer 在使用之前必须按标签的提示用乙醇稀释.如果DNA 洗涤缓冲液在使用之前是置于冰箱中的,须将其拿出置于室温下.
9. 重复用700ul SPW Wash buffer洗涤柱子.室温下10,000xg离心1min.
10. 弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.室温下,13,000 x g离心2 min以甩干柱子基质残余的液体.
11. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入15~30ul(具体取决于预期的终产物浓度)的Elution Buffer(或TE缓冲液)到柱基质上,室温放置1min, 13,000xg离心1min以洗脱DNA.
第一次洗脱可以洗出70-80%的结合DNA. 如果再洗脱一次的话,可以把残余的DNA洗脱出来,不过那样的浓度就会较低.