纯化水细菌内毒素含量

❶ 细菌内毒素标准要求小于0.50EU，购买鲎试剂选择灵敏度单位多大的合适呢，之前没做过这个项目请教下各位

细菌内毒素检测（凝胶法）标准操作目的：规范细菌内毒素的检测操作，保证细胞质量。范围：适用于所有从治疗中心发放的细胞（包括CIK、DC、干细胞等）内毒素限量检测。责任人：质量检测人员。

抗原性不同：

外毒素强，刺激机体产生抗毒素；甲醛液处理脱毒形成类毒素。

内毒素弱，刺激机体产生的中和抗体作用弱；甲醛液处理不形成类毒素。

到1940年，摩根利用痢疾志贺氏菌阐明细菌内毒素是由多糖、脂类和蛋白质组成的复合物。1950年以后，随着生物学、物理学、化学、免疫学、遗传学等学科的发展，细菌内毒素特别是其化学结构的研究工作开始展开。而且各种生物活性之间的关系也更加明确。

外毒素是剧毒的，可以杀死实验动物的数量非常少。重要的外毒素主要有两类：一类是体外产生的外毒素，引起食物中毒。它们引起的疾病不是一种传染过程，而是由于食用含有这种毒素的食物而引起的中毒过程。

❷ 细菌内毒素的量值

在80年代以前，所有研究内毒素的报道，毫无例外地使用重量单位表示内毒素的量，在鲎试剂建立后也同样以重量单位表示鲎试验的灵敏度。随着人们对细菌内毒素生物活性认识的提高，以重量单位表示的不科学性被揭示，即相同重量的内毒素，对于菌种来源不同，其生物活性相差很大。1980年美国学者Hochstein完成了将重量单位转化为内毒素单位的工作。当时美国内毒素参考标准品代号为EC-2，该品的家兔发热剂量ED50为1.04ng/kg，而与此同时美国食品药品管理局（FDA）批准的鲎试剂参考品为第四批，FDA邀请当时已获有鲎试剂生产许可证的制造商进行协作研究，采用EC-2与第四批鲎试剂参考品，求出两者的凝聚终点用ng/ml表示，四个实验室的56次单独试验结果，几何平均值为0.194ng/ml，FDA就此规定该值为EC-2的1个内毒素单位，EC-2的量值为5EU/ng。自1982年美国药典修订1980年（20）版首次收载的细菌内毒素试验，内毒素单位（EU）被正式引入，明确指出美国内毒素参考标准品每瓶含10000EU。1EU与1个内毒素国际单位（IU）相当。USP版ng跟EU通过RSE/CSE的比率进行转化。其比率附在COA证书中。CSE与所使用的鲎试剂一一对应。

❸ 细菌内毒素检测不同浓度怎么稀释我们用的是 0.25EU/ml的鲎试剂

药典美药典细菌内毒素检测同点比较
1、细菌内毒素工作标准品（CSE）
CP CSE用途及效价进行定义细菌内毒素工作标准品每1ng细菌内毒素效价应于2EU于50EU
USP未提CSE
2、细菌内毒素检查用水
CP ： 与灵敏度0.03EU/ml或更高灵敏度鲎试剂37±1℃条件24产凝集反应灭菌注射用水；
USP：与鲎试剂限定灵敏度发反应灭菌注射用水或其水
CP：用于细菌内毒素定量测定用细菌内毒素检查用水内毒素含量应于0.005EU/ml
USP： 未提
3、实验用具准备
CP：实验所用器皿需经处理除能存外源性内毒素用250℃干烤至少1用其确证干扰细菌内毒素检查适宜
USP：使用经验证除热原程序所玻璃器皿遇热稳定材料热空气烘箱进行除热原用低温度少间250℃30钟
4、内毒素标准品贮备液标准品溶液制备
CP： 未提
USP：RSE效价定10,000USP EU/支用5ml鲎试剂检查用水复溶1支RSE全部内容物用漩涡混合器间歇混合30钟并用原液作系列稀释原液置于冰柜保存超14作稀释用使用前用漩涡混合器强力混合少于3钟作步稀释前需前面稀释液混合少于30秒要贮存稀释液没数据能证明其吸附作用失性
5、供试品溶液制备
CP：|某些供试品需进行复溶、稀释或水性溶液浸提 用LRW复溶或稀释药品或抽提医疗器械某些物质能更适于用其水性溶液溶解、稀释或抽提
于酸、碱或本身缓冲能力供试品需调节测溶液（或其稀释液）pH值般要求供试品溶液pH值6.0-8.0范围内
USP：用LRW复溶或稀释药品或抽提医疗器械某些物质能更适于用其水性溶液溶解、稀释或抽提
需要调节待测溶液（或其稀释液）pH值使鲎试剂品混合物pH范围落鲎试剂产商指定范围内通适用于pH值6.0-8.0范围内产品
6、内毒素限值建立
CP：药品、物制品细菌内毒素限值（L）般按公式确定：L=K/M
L 供试品细菌内毒素限值般 EU /ml、EU / mg 或 EU / U （性 单位）表示； K 每千克体重每接受内毒素剂量 EU / ( kg · h ）表示注 射剂 K = 5EU/(kg?h ) 放射性药品注射剂 K=2.5EU / （kg· h ) 鞘内用注射剂 K = 0.2EU / （kg· h ) ； M 用每千克体重每供试品剂量 ml / ( kg · h ）、mg / ( kg · h ） 或 U / ( kg · h ）表示均体重按 60kg 计算体表面积按 1.62m2 计算注射间若足 1 按 1 计算供试品每平米体表面积剂量乘 0.027 即转换 每千克体重剂量（M）
USP：非经肠道药品内毒素限值剂量定义等于K/M
除鞘内给药外任何给药途径K均5 USP-EU/kg鞘内给药K0.2 USP-EU/kg于非鞘内给药放射性药品内毒素限值计算175/VVmL单位推荐剂量于鞘内给药放射性药品其内毒素限值14/V于按每平体表面积计算给药剂量（通抗肿瘤药品）计算公式K/M其K=5EU/kgM（剂量/m2/×1.80m2)/70kg
7、灵敏度复核实验
CP：浓度2.0λ管阳性低浓度0.25λ管均阴性阴性照管阴性实验效按式计算反应终点浓度几何平均值即鲎试剂灵敏度测定值（λc）：λc=lg-1(ΣX/4)
USP：|浓度低标准品溶液所重复管均阴性实验效
用式计算终点浓度数值平均值再计算该平均值反数：终点浓度几何平均值= antilog(Σe/f)
Σe稀释系列终点浓度数值f重复管数反应终点浓度几何平均值即鲎试剂灵敏度测定值
8、凝胶限量实验：

CP：溶液制备添加内毒素溶液供试品溶液’---USP：经稀释供试品溶液

CP：使用稀释倍数MVD并且已经排除干扰供试品液制备溶液AB----USP；使用稀释倍数超MVD稀释液制备溶液AB

CP：复试溶液A需做4支平行管所平行管都阴性供试品溶液符合规定
------------USP：复试溶液A两支平行管均阴性供试品溶液符合规定

USP：供试品溶液超MVD某稀释倍数稀释检测结阳性进步稀释供试品溶液能超MVD再重新进行试验------CP；规定

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❹ 细菌内毒素样品，限值是小于＜10eu/ml那我怎么计算MVD值

首先你得先确定进行供试品干扰试验预试验，确定所需检测的供试品的最大不干扰浓度和适宜的鲎试剂灵敏度，然后再按
MVD = c L/λ进行正式干扰试验，确定所检供试品的稀释倍数，在进行细菌内毒素检测前，你得先多看药典，了解内毒素检测步骤

❺ 纯化水微生物限度检测如何控制其测定准确性

目的来
探讨紫外线照射源法杀菌结合0.2μm微孔除菌过滤在纯化水微生物控制中的应用。方法
运用紫外线杀菌和0.2μm微孔过滤除菌，对饮用水经过预处理一级反渗透和混合床时（阴、阳离子交换树脂）系统制备的纯化水进行紫外线照射杀菌和0.2μm微孔除菌过滤循环使用，再次进行紫外线照射杀菌，比较经混合床制备的纯化水在不同取样点微生物含量，以证明紫外杀菌器和0.2μm微孔除菌过滤对纯化水微生物控制的效果。
结果
经过混合床制备的纯化水，含有较高的微生物，平均为4.07CFU/ml；经紫外线一次照射杀菌后纯化水样平均为2.25CFU/ml；经0.2μm除菌过滤器后纯化水样平均为1.17CFU/ml；纯化水贮罐出水口纯化水样平均为1.15CFU/ml；纯化水循环使用前经紫外线二次照射杀菌后纯化水样平均为0.83CFU/ml，回水口纯化水样平均为0.96CFU/ml；纯化水细菌内毒素含量检测<0.25EU/ml。
经统计学分析，混合床出水样与回水样检测结果比较，具有显著统计学意义（P<0.01）。结论
运用紫外杀菌结合0.2μm微孔除菌过滤器对纯化水微生物能够进行有效的控制；纯化水细菌内毒素检测结果可以达到注射用水标准。

❻ 二级反渗透+edi出水的细菌内毒素能<0.125eu/ml吗

理论上讲是可以的，因为离子级别的都可以截留住，有机物肯定是进入不到纯水中去的，但是由于管道材质、安装水平等原因造成的二次污染会影响测定结果。

❼ 细菌内毒素样品浓度是2时,我要稀释40倍咋稀释是怎么计算的

细菌内毒素在测定是怎么稀释阿
1、如果用了：0.1ml和0.9ml得水，那才1ml母液了，你后面那些稀释液就没母液让你配制了。
2、这样的稀释太好算拉，你按倍数换算就是了呀。

❽ 细菌内毒素，浸提样品多少毫升怎么算

产品为固体的，根据产品结构及大小，设定合理的浸提体积，体积以能浸没产品或者充内满产品为准。
产品为溶液容的，溶液即浸提液。
之后还需根据产品细菌内毒素限量及浸提液体积计算浸提液内毒素限量
再根据浸提液内毒素限量及鲎试剂灵敏度计算最大有效稀释倍数

❾ 欧洲药典对纯化水有细菌内毒素的要求吗

纯化水没有要求，注射用水有