⑴ ELISA实验中如何包被抗原、抗体的呢
包被抗体就是你买过来的板子中已经被包在
96孔板
里面的抗体，包被抗原就是你要检测的东西，加到96孔板中就被称作包被抗原了
⑵ ELISA中包被抗体与一抗有何区别
包被抗体可以结合待检测的抗原,多抗和单抗都可以的,用样的一抗也是和待检测的抗原结合,如果抗体较多
⑶ 怎样提高免疫层析包被抗体的稳定性
包被抗体就是你买过来的板子中已经被包在96孔板里面的抗体，包被抗原就是你要检测的东西，加到96孔板中就被称作包被抗原了
⑷ 实验中用PBS作为CD3功能抗体的稀释液，即CD3抗体包被在培养板上的包被液，包被液可以用D-Hank's液代替吗
可以的 你大概是做T淋巴细胞增殖实验吧
⑸ ELISA检测抗体的方法中，包被抗原后封闭前要不要洗板封闭后加一抗前要不要洗板，谢谢各位老师指点！
您问的这个问题我也曾疑惑过，我跟您交流一下我的想法。
封闭前要不要洗板？我觉得是要的。因为包被液同封闭液的成分不同，pH也可能不一样，有必要将孔板洗净。
加一抗前要不要洗板？我觉得要看情况。一般的ELISA实验中封闭液同时也是一抗稀释液，这时就没必要洗板了。但是如果一抗稀释液同封闭液成分不同，则应该洗板，去除封闭液的游离成分。
⑹ ELISA实验中需要包被抗体或者抗原怎么包被使其固相化
（一）包被用抗原
用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等（例如AFP从脐带血或胎肝中提取）。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外，其他杂质少，而且无传染性，但纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份，用于ELISA试剂盒，在反应中可出现假阳性，因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培养成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCVELISA中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。在传染病诊断中，不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得应用。合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质（BSA）等偶联，借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇，因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。另外，某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化，在这种情况下，用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。
⑺ 免疫层析怎样提高包被抗体的稳定性
elisa抗原包被和抗体包被的区别
（一）包被用抗原
用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等（例如AFP从脐带血或胎肝中提取）。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外，其他杂质少，而且无传染性，但纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份，用于ELISA试剂盒，在反应中可出现假阳性，因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培养成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCVELISA中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。在传染病诊断中，不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得应用。合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质（BSA）等偶联，借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇，因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。另外，某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化，在这种情况下，用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。
（二）ELISA试剂盒包被用抗体
包被固相载体的抗体应具有高亲和力和高特异性，可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培养液。如免疫用抗原中含有杂质（即便是极微量的），在抗血清中将出现杂抗体，必须除去（可用吸收法）后才能用于ELISA，以保证试验的特异性。抗血清不能直接用于包被，应先提取IgG，通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法。一般经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被，高度纯化的IgG性质不稳定。如需用高亲和力的抗体包被以提高试验的敏感性，则可采用亲和层析法以除去抗血清中含量较多的非特异性IgG。腹水中单抗的浓度较高，特异性亦较强，因此不需要作吸收和亲和层析处理，一般可将腹水作适当稀释后直接包被，必要时也可用纯化的IgG。应用单抗包被时应注意，一种单抗仅针对一种抗原决定簇，在某些情况下，用多种单抗混合包被，可取得更好的效果。
⑻ 我是做ELISA实验的初学者，最近在建立双抗体夹心法的检测方法，不知道如何确定包被浓度和抗原浓度，谢谢！
你是不知道包被的浓度还是不知道怎样配治包被液啊？
我这里有份ELISA的实验过程。不过是除掉前两部的。
1、 加被检抗原（重组蛋白或自然样品）：用稀释液（DS01、AS01、AS02、AS03、AS04）将被检抗原按实验设计稀释，每孔100µl，同时用稀释液作空白对照。封板膜封板，室温放置两小时。
2、 洗涤：到尽板孔中的液体，加满洗涤液（WS03），静止放十秒，洗四次，最后在毛巾或吸水纸上拍干板子：
3、 加检测抗体：将生物素标记的检测抗体稀释适当浓度（稀释液DS01），每孔100 µl封板膜封板，室温放置一小时：
4、 洗涤：到尽板孔中的液体，加满洗涤液（WS03），静止放十秒，洗四次，最后在毛巾或吸水纸上拍干板子：
5、 加亲和素-辣根过氧化酶（HRP）稀释适当浓度（稀释液HD01）每孔100µl，封板膜封板，室温放置30分钟：
6、 加底物：新鲜配制的四甲基联苯胺溶液（TMB），每孔100µl，室温暗处放置30分钟：
7、 加终止液（SS01）：每孔100µl，立即读值：
8、 观察结果：用酶标仪记录450nm读数.
⑼ 想请问有关抗体包被的问题.在用酶标板包被抗体，然后
洗涤时候不会被甩出去。因为在放水浴箱里孵育的那段时间里，血清已经跟杯子里的化学试剂起了反应，粘附在里面了，洗涤甩干只是洗去多余的液体而已