A. 我做高效液相，用乙腈和水做流动相，双泵，跑梯度，波长280nm，在乙腈多的期间会有好多杂质峰，怎么办啊急
用高比例的乙腈多冲一会，看你的情况要不就是柱子脏的厉害，要不就是乙腈不合格，先试着用高比例的乙腈（95:5）冲几个小时看看，如果还是有很多杂峰的话建议换新的乙腈。
B. 流动相乙腈要过滤吗
一定要过滤.
C. waters c18 5u 250*4.6,纯乙睛、10%乙睛、甲醇、纯水各作为流动相流量为1ml时，压力多少正常
一般说来，衡量色谱柱的柱压高低主要以甲醇为流动相时的柱压为准。不同的液专相仪柱压也略有差异。属
你所提供的色谱柱，一般情况下，以甲醇为流动相，流速为1ml/min时，柱压在700-900psi，压差在50psi以下均为正常。
10%乙腈我没用过，30%乙腈的一般在1500psi左右，10%乙腈应该比它低。
纯水可能损坏色谱柱，纯乙腈可能堵塞单向阀，不建议使用上述流动相。
D. 液相色谱配流动相乙腈甲醇水按10：20：70怎么配
在反相键合相色谱中，键和固定相的极性小与流动相的极性，适用于分离非极性、极性低的化合物。
在反相键合相色谱法色谱柱中使用的是非极性键和固定相，它是将全多孔微粒硅胶载体，经酸活化处理后与含烷基链或苯基的硅烷化试剂反应，生成表面具有烷基的非极性固定相。目前，最常用色谱柱是采用十八烷基硅烷键合固定相，流动相为强极性溶剂水、甲醇、乙腈等。
E. 我用乙腈和水作为流动相跑液相开始挺顺利，但是后来换了一瓶已经以后就出不来原来的峰了，这是怎么回事呀
顺序检查1，流动相纯度和流动相比例；2，样品是否失效；3，色谱柱是否正常；4，仪器是否正常
F. 液相色谱里面能只用水做流动相吗
这个得看你的色谱柱。
一般的反相色谱柱不耐纯水。如果用的话会特别费。专
我当初做过属一个实验，流动相是0.025mol/L的KH2PO4，色谱柱是C18柱，大概半个月换一根吧。
特殊的色谱柱可以耐受纯水，但是可能分离效果不好，峰型也不一定好。
另外，纯水很 容 易 长微生物。一般纯净水开瓶之后在25℃放置1天，过滤的速度就会缓慢，放三天就浑浊了。如果你的流动相是纯水，那么系统、色谱柱很容易堵塞。所以不建议使用。
G. 高效液相流动相中甲醇乙腈与水的配比的多少有什么区别
一般对于C18柱，有机相比例越大，分离效果越好，但是不是所有比例都允许用的，有些比例会导致流动相极易产生气泡而不能使用，所以一般不采用有机相和水相比例相近的配比。而且对于一些不溶于水的有机物，只能用高比例有机相流动相。
H. 高效液相色谱的流动相要经过哪些处理
流动相要先过滤，超声脱气后方可使用。
另外选用试剂是要选用色谱级的专，过滤时选择合属适的滤膜。流动相最好现配现用，不要保存太长时间。
使用旋转蒸发仪上的真空泵 抽空气20min，可以达到脱气的作用。使用滤膜过滤掉杂质。
流动相必须过滤膜，用前要超声除气泡半个小时左右，否则基线不稳
仪器和色谱柱先要用有机溶剂（如乙腈等）好好清洗一下，待基线平衡后才能进一步工作，乙腈和水混合的流动性最好先超声抽滤脱气，准备工作做好了会节省好多时间。
若用色谱纯的乙腈和超纯水做流动相，流动相可以不用过滤膜，但超纯水需要超声约30分钟脱气。
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I. 用甲醇做流动相和用乙腈做流动相有什么区别
乙腈(ACN)和甲醇(MeOH)是在反向色谱柱方法开发中广泛使用的两种常见溶剂。所以，除了知道乙腈比甲醇有更高的洗脱能力这一事实外，色谱分析人员还应该知道其他的特性吗?让我们来讨论一些所有色谱专家都应该知道的问题。
首先，对流动相溶液的准备提出几点意见。
只有纯水溶液部分才能正确调整pH值。不要尝试测量或调整有机或有机混合物的pH值。
制备二元混合物的方法有两种，即V/V流动相溶液。
方法#1是用特定体积的“A”溶液填充一个量瓶，然后用“B”溶液将量瓶填满。
方法#2是用指定数量的“A”溶液填充量筒(或容量瓶)；用指定数量的“B”溶液填充第二个量筒(或容量瓶)，然后将两者的内容混合在一起。
无论您使用哪种方法，请在您的高效液相色谱法中完整地记录它，以便任何阅读它的人都能准确地复制它。上面描述的两种方法在设计上都是正确的，但是会产生不同性质的结果。
紫外线吸光度
对于HPLC级溶剂(我们在HPLC分析中应始终使用HPLC级溶液)，乙腈的吸光度在这两种溶剂中最低，非常适合低紫外光分析。甲醇在205-210nm左右有较高的紫外光吸收值，在非常低的紫外光范围内略有限制。
溶剂溶解性
乙腈和甲醇在溶解多种缓冲盐和样品的能力上存在显著差异。这些差异在方法开发中至关重要。
1.流动相溶解度
梯度运行显示低重现性或失败的一个常见原因可能与运行高浓度缓冲液和高浓度有机溶液有关。而含有浓度小于10mM盐溶液的水溶液/有机溶液在大多数梯度条件下不太可能沉淀（最多98%是有机溶剂，而不是100%)，大多数与高效液相色谱应用一起使用的缓冲溶液会有更高的盐浓度，当分析条件中有机溶剂含量较高时可能会从溶液中析出（导致堵塞，泄漏，插头和不准确的结果）。在反向色谱法中选择有机组成时要谨慎。确保使用的溶液在所有浓度下都是稳定的。还要验证缓冲能力是否仍然存在，当使用高有机浓度时(当缓冲液被稀释时)。
不确定盐是否会溶解?只要把同样浓度的溶剂混合起来做测试就行了。观察它，有任何浑浊或可见颗粒吗?你就可以得到你需要的答案。
甲醇总体上具有更好的溶解度特性(优于乙腈)，这意味着它在较高浓度下能更好地溶解大多数盐，从而获得更好的性能和更少的沉淀。
2.样品的溶解度(对峰形和保留的影响)
液相色谱的一个基本要求是样品完全溶解在流动相(初始流动相)中。在分析前，将样品溶解在流动相或强度稍弱的溶液（不是更强的溶液）。这确保它将作为一个集中的段塞加载到柱的顶部，以改善峰形和RSD。如果样品没有完全溶解在流动相，那么你实际上并没有分析整个样品。甲醇优于乙腈的另一个方面是它能完全溶解更多类型的样品。这一改进的溶解度可能导致更好的整体峰形。甲醇的选择性也不同于乙腈(不仅仅是洗脱强度)，这可能导致峰洗脱时间与预期的保留时间不同。这也是为什么在开发反向方法时，我们总是尝试使用含有乙腈或甲醇的不同流动相混合物的另一个原因。
永远不要假设一种溶剂会比另一种溶剂更好。太多的色谱新手只使用乙腈作为他们方法开发的主要有机溶剂。请不要犯他们的错误，这样的策略表明缺乏实践经验和知识。您必须首先分别尝试它们（乙腈&甲醇）用你的样品来评估结果（在适用的情况下最好从不同pH值的全面梯度开始）。如果您在最初的时间内测试了这两种类型的溶剂，那么将获得回报，因为还没有开发出能够使用您自己的样品来预测真正准确的结果的模拟器。可能会惊讶地发现，有多少样品使用甲醇溶液显示出更好的峰形和性能。如果没有看到任何改善，至少你现在知道了，因为你已经尝试过了，并且可以满怀信心地前进。
背压
乙腈的粘性比甲醇小，因此通常会导致整体柱压和系统背压降低。乙腈和水的混合物也会发生吸热反应(冷却溶液)，从而在溶液中捕获气体。如果你预先混合你的流动相，让它静置几分钟后在制备。
甲醇比乙腈更粘稠。它还有一个不寻常的特性，就是甲醇和水的50/50混合物会产生一个比甲醇或水更高的系统和柱背压。它的峰值压力是由50/50的混合物所观察到的。两种溶液在开始混合释放出一些气体也会产生放热反应。在制备溶液时，最好是让溶液静置几分钟，然后在高压液相色谱系统中使用。