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超纯水可以用了做RNA提取吗

发布时间:2021-02-10 17:05:58

㈠ 提取细胞的RNA时,如何有超纯水还是去离子

提取细胞的RNA时,如何有超纯水还是去离子水
提取RNA时应该使用DEPC处理过的水版,999ml三蒸水中加入权1mlDEPC,搅拌过夜使之充分溶解,分装到小瓶里,121℃高压30min,使DEPC分解,封口膜包口就可以保存备用了.配置及分装时候小心点,DEPC具有一定的毒性.

㈡ rna的提取还有何种方法是比较各自的优缺点

常见的的总RNA提取方法有苯酚法、阴离子去污剂法、LiCl一尿素法、改良的内Gomez法、容异硫氢酸胍法、CTAB法、热硼酸法及改良热硼酸法、TRIZOL试剂快速提取法。
RNA提取时,就变性剂的选择来说,CTAB(CTAB法)比异硫氰酸胍(RIZOL试剂法)和SDS(改良热硼酸法)更有效;就CTAB法来说,由于以CTAB为变性剂,同时加入PVP和β一巯基乙醇共同作用变性蛋白、抑制RNase的活性,使用无水乙醇或异丙醇沉淀杂蛋白和总核酸等,然后再选择性地分离出RNA。所以CTAB法是一种很好得总RNA得提取方法。

㈢ 请教哪位高人能够提供一套有效提取水中的RNA方法

北京华越洋生物,核酸提取试剂领导者!

㈣ 提取细胞的RNA时,如何有超纯水还是去离子水

2.加热至90 100℃使蛋白质变性,破坏两类磷酸酯酶,有利于RNA的提取。 *1)、6孔板细胞(CNE-2)汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,

㈤ RNA提取问题

纯的RNA加异丙醇后:溶液开始稍稍变白浊,只有离心后才能看到沉淀。
我倒觉得,你别管黄色东专西是什么,就那个属时候离心,然后去上清作为rna去跑胶,看看如果效果很好就可以了。显然黄色物是不容于水的,离心很容易去掉。但是如果跑胶效果不理想可能需要考虑换方法了。

㈥ RNA的提取方法步骤及原理.

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:


Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。


Trizol作用原理:


在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。


水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

(6)超纯水可以用了做RNA提取吗扩展阅读

与DNA不同,RNA一般为单链长分子,不形成双螺旋结构,但是很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。

RNA的碱基配对规则基本和DNA相同,不过除了A-U、G-C配对外,G-U也可以配对。

在细胞中,根据结构功能的不同,RNA主要分三类,即tRNA(转运RNA),rRNA(核糖体RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白质的模板,内容按照细胞核中的DNA所转录;tRNA是mRNA上碱基序列(即遗传密码子)的识别者和氨基酸的转运者;rRNA是组成核糖体的组分,是蛋白质合成的工作场所。

㈦ 有关RNA提取的问题

RNA极易变性,你那样不可能提到,顶多是DNA.提取RNA需要加入极强的蛋白质变性剂,比如:专异硫氰酸属胍!目前提取RNA的方法:用酸性胍盐/苯酚/氯仿抽提!注意事项:提取用的玻璃器皿要经过高温焙烧,塑料用具经过高压灭菌,不能灭菌的用0.1%的焦炭酸二乙酯处理,再煮沸以除净焦炭酸二乙酯;在破碎细胞细胞的同时加入强的变性剂使RNase失活;在RNA反应体系中加入RNase的抑制剂。

㈧ pcr用超纯水

最好还是在冰上做啦,一次两次没有问题,久了多了可能问题就出来了
一般用的是灭菌的双蒸水
保证引物的终浓度就可以.都是用水稀释的,没啥差别

㈨ 无RNA酶水(RNase-free &DNase-free水)是指DEPC处理过的超纯水吗可以直接用来溶解RNA吗

外源RNA酶处理一下超纯水就可以溶解RNA了。

㈩ RNA的提取方法

1、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速离心后取上清,所得DNA大小为100-150kb

2、甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

3、玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

4、异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)

5、表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。

6、加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。

7、碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。

(10)超纯水可以用了做RNA提取吗扩展阅读:

DNA提取原则:

1、保证核酸一级结构的完整性;

2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;

3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度;

4、其他核酸分子,如RNA,也应尽量去除。

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