双水相法分离纯化花青素

⑴ 求高人~葡萄籽原花青素的成分到底是“聚多酚类”还是“黄酮类物质”

花青素属於酚类化合物中的类黄酮类(flavonoids)。基本结构包含二个苯环，并由一3碳的单位连结(C6-C3-C6)。花青素经由苯基丙酸路径和类黄酮生合成途径生成，由许多酵素调控催化。

⑵ 双水相萃取的操作步骤

一、重点
双水相萃取放大容易：一般10ml离心管的实验结果可直接放大到工业规模。具体实验步骤：
1、配制一系列不同浓度、pH及离子强度的双水相，每个双水相改变一个参数。
2、加入料液，再加水使整个系统质量达到5~10g。离心管封口后充分混合。
3、1800－2000g下离心3－5min，使两相完全分离。
4、用吸管或移液管将上相和下相分别吸出，测定上、下相中目标产物的浓度或生物活性，计算分配系数。
5、上、下两相中目标产物的总量应与加入量对比，以检验是否存在沉淀或界面吸附现象，并可确认浓度或活性测定中产生的系统误差。
6、分析目标产物的收率和纯化倍数，确定最佳双水相系统。
二、特点：
1、含水量高（70%～90%），适宜提取水溶性的蛋白质、酶等生物活性物质，且不易引起蛋白质的变性失活。2、不存在有机溶剂残留问题。3、易于放大，各种参数可按比例放大而产物收率并不降低。这是其他分离技术无法比拟的。
萃取是在两个液相间进行。大部分萃取采用一个是水相。另一个是有机相。但有机相易使蛋白质等生物活性物质变性。最近，发现有一些高分子水溶液（如分子量从几千到几万的聚乙二醇硫酸盐水溶液）可以分为两个水相，蛋白质在两个水相中的溶解度有很大的差别。故可以利用双水相萃取过程分离蛋白质等溶于水的生物产品。
例如用聚乙二醇（PEG Mr为6000）/磷酸钾系统从大肠杆菌匀浆中提取β-半乳糖苷酶。这是一个很有前途的新的分离方法，特别适用于生物工程得出的产品的分离。

⑶ 蛋白质分离纯化的四种方法

1、盐析法：

盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。

2、有机溶剂沉淀法：

有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其一、与盐溶液一样具有脱水作用；其二、有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。

3、蛋白质沉淀剂：

蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用，常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。

4、聚乙二醇沉淀作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。

(3)双水相法分离纯化花青素扩展阅读：

蛋白质是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。

机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20% ，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。

人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸（Amino acid）按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。

⑷ 花青素的纯化方法

微波提取技术
一种采用频率为2450 MHz或 915 MHz、功率为500 W～15 000 W 的微波对葡萄籽 在选用水、内碳链容长为C ～C，的醇、乙醚、丙酮、乙 酸乙酯、甲苯或其混合物的溶剂中进行处理，从葡 萄籽提取原花青素类物质的新方法。该方法较常规 化学法工艺简便、高效、快速，成本低，废液排放 量少。
花青素是一种水溶性色素，可以随着细胞液的酸碱改变颜色。细胞液呈酸性则偏红，细胞液呈碱性则偏蓝。花青素(anthocyanidin)是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一。花青素为植物二级代谢产物，在生理上扮演重要的角色。花瓣和果实的颜色可吸引动物进行授粉和种子传播 (Stintzing and Carle, 2004)。常见于花、果实的组织中及茎叶的表皮细胞与下表皮层。部分果实以颜色深浅决定果实市场价格。

⑸ 在大孔吸附树脂法分离纯化果蔬花青素的生物化学实验中，为何加入0.5%柠檬酸提取剂和0.1%柠檬酸水洗剂

花青素分子有5个羟基的类黄酮类，加酸可以让花青素游离出来，以达更好的分离效果。

⑹ 双水相萃取的原理

双水相萃取的原理：分子间存在相互作用力，这种分子间作用力随相对分子质量增大而回增大。当两种高分子聚合答物之间存在相互排斥作用时，由于相对分子质量较大的分子间的排斥作用与混合熵相比占主导地位，即一种聚合物分子的周围将聚集同种分子而排斥异种分子，当达到平衡时，即形成分别富含不同聚合物的两相。

(6)双水相法分离纯化花青素扩展阅读：

可形成双水相的双聚合物体系有：聚乙二醇（PEG）/葡聚糖（Dx）,聚丙二醇/聚乙二醇，甲基纤维素/葡聚糖。

双水相萃取中采用的双聚合物系统是PEG/Dx，该双水相的上相富含PEG，下相富含Dx。另外，聚合物与无机盐的混合溶液也可以形成双水相，例如，PEG/磷酸钾（KPi）、PEG/磷酸铵、PEG/硫酸钠等常用于双水相萃取。

双水相萃取的应用：蛋白质、酶的纯化、多肽的分离纯化、核酸的分离纯化等。

⑺ 是否有人成功用双水相萃取技术提纯茶多酚相比其它茶多酚提取方法优势何处成本如何应用前景如何

萃取工艺一般采用多级萃取 操作，溶剂回收需要进行多级蒸馏，工艺操作复杂，能耗大。双内水相提取成本较高容，试验复杂。需要比较PET200，400，800，1000，1500，2000，4000，5000考虑材料，一般不采用。但可以尝试但经费高，做实验时间长。光乙醇就要用一箱。研究此法主要是看提取最优，条件，需大量分析。应用前景不大。现在企业一般用超临界，这是趋势。

⑻ 葡萄中花青素提取方法花青素对人体的作用有哪些

一：葡萄中花青素的提取方法步骤如下：

(1)取葡萄原料，加入提取剂，静置；其中，所述的提取剂由乙醇和呋喃混合而成，按照体积比乙醇：呋喃＝1～2:0.5～1.5；
(2)将步骤(1)中静置后所得物质放入-8～-1℃放置，取出，升温至40℃后，再升温至65～85℃，保持该温度提取1～3小时，即得。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤(1)中所述的葡萄原料为葡萄皮。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤(1)中葡萄原料与提取剂成质量比1:3～5。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤(1)中静置10～20分钟。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤(2)中静置后所得物质放入-8～-1℃放置1～2小时。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤(2)中保持升温速率为1～3℃/10分钟升温至40℃后，再保持升温速率为5～10℃/10分钟升温至65～85℃。
二：花青素对人体的作用：
1、花青素是一种强有力的抗氧化剂，它能够保护人体免受自由基的损伤。
2、花青素还能够增强血管弹性，改善循环系统和增进皮肤的光滑度，抑制炎症和过敏，改善关节的柔韧性。
3、花青素有助于预防多种与自由基有关的疾病，包括癌症、心脏病、过早衰老和关节炎；
4、花青素可通过防止应激反应和血小板凝集来减少心脏病和中风的发生;
5、花青素还可以帮助降低感冒的次数并缩短持续时间。
原花青素葡萄枸杞糖果，由葡萄、枸杞、桂圆肉、大枣、酸枣仁、茯苓等成分组成，休闲时来两颗。

⑼ 双水相萃取蛋白质的方案

液- 液萃取技术是化学工业中普遍采用的分离技术之一,在生物化工中也有广泛的应用。然而,大部分生物物质是有生物活性的,需要在低温或室温条件下进行分离纯化,而采用传统萃取技术无法完成。双水相萃取就是考虑到这种现状,基于液- 液萃取理论并考虑保持生物活性所开发的一种新型液- 液萃取分离技术。

与传统的液- 液分离方法相比,双水相萃取技术分离纯化蛋白质具有以下优势:体系含水量高,可达80 %以上;蛋白质在其中不易变性;界面张力远远低于水- 有机溶剂两相体系的界面张力,有助于强化相际间的质量传递;分相时间短,一般只需5～15 min ;易于放大和进行连续性操作;萃取环境温和,生物相容性高;聚合物对蛋白质的结构有稳定和保护作用等。正是由于双水相萃取技术的诸多优势,现已被广泛用于蛋白质、核酸、氨基酸、多肽、细胞器等产品的分离和纯化。

1 双水相萃取原理
双水相体系是指某些高聚物之间或高聚物与无机盐之间,在水中以适当的浓度溶解后形成的互不相溶的两相或多相水相体系。高聚物- 高聚物- 水体系主要依靠高聚物之间的不容性,即高聚物分子的空间阻碍作用,促使其分相;高聚物- 盐- 水体系一般认为是盐析作用的结果。

双水相萃取与水- 有机相萃取的原理相似,都是依据物质在两相间的选择性分配,不同之处在于萃取体系的性质差异。当生物物质进入双水相体系后,由于表面性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等) 的存在和环境的影响,使其在上、下相中的浓度不同。分配系数K 等于两相中生物物质的浓度比,由于蛋白质的K 值不相同(大致在011～10 之间) ,因而双水相体系对各类蛋白质的分配具有较好的选择性。[/size]