Ⅰ 用二氯和甲醇过柱子，发现柱子下面有结晶析出，什么原因
我们在灯检时偶尔遇到烟雾状微粒柱的现象，数量很少，但现象恐怖，想查清楚来源，彻底解决这一问题，但不知道是什么东西，无法分析，无从下手，那位大侠有这样的经验，请不吝赐教。嗯 药典可见异物检查的标准里有这么一条 “并在旋转时不得检出烟雾状微粒柱”。什么品种，说的不清楚生化制剂容易出此现象，可能是多肽类的聚集，要从工艺上改进，比如说加吐温，超滤等。这个现象我们也遇到过，多摇两下就看不到了！
这种情况一般是由于溶液中存在不溶性微粒，也就是溶解不好。但过滤是过不掉的，还是要从处方工艺中改进，比如调PH、加热、加一些其它溶剂等！有些易氧化的药物沉淀出来，也会形成那样的东西我们也遇到过类似问题,特别是生产完利巴韦林,林可霉素后转其它品种时的第一二批出现以上问题,由于利巴韦林,林可霉素容易析出,所以每次清场搞卫生时很难清洁彻底,本人怀疑这与"烟雾"的发生有一定的关系.
请各位战友分析分析.我们也遇到这种类似的现象，采用超滤都没有除去还是在工艺上去解决掉了是什么口服液呀，通常染菌之后再经灭菌就会有这样的情况了，系细菌的尸体。不知道你那种情况是不是这种原因，仅供参考烟雾状微粒是溶液中的沉积物，有可能溶液被污染导致的．如果在灯检的时候发现，就必须挑出来，属于不合格品．首先可以确定烟雾状微粒是溶液中的沉积物，属于不合格品．原因很多：1 生化药残留的蛋白或肽经灭菌后，蛋白变性产生烟雾，一晃就没，放置一段时间又出来了。
2 有可能溶液被污染导致的．细菌的尸体凝聚。
3 还有一些不溶性微粒，过滤除不掉，加热凝聚后过滤可以除去。或加增溶剂。
希望能帮助你。这个现象我们也遇到过，可能是由于近来天气比较冷，温度比较低的原因。
先加热摇摇看，如果还是没有澄清的话，那就一定是工艺的原因了，加增溶剂，调节PH值，应该没有问题。这个现象我们也遇到过，可能是由于近来天气比较冷，温度比较低的原因。
先加热摇摇看，如果还是没有澄清的话，那就一定是工艺的原因了，加增溶剂，调节PH值，应该没有问题。玻瓶在硅化时,如果硅化不够好,可能会出现"烟雾状微粒柱的现象".生产的产品是灭菌注射用水灯检时也有上述情况，会是什么原因？？盼答。被污染，找找污染源。inhitec wrote:生化制剂容易出此现象，可能是多肽类的聚集，要从工艺上改进，比如说加吐温，超滤等。
同意此推测，在生化水针中极常见。我们抽检时俗称：“冒烟”。有时在灌封过程中滤液瓶内的药液在几分钟内发生浑浊，应与此现象属同一类型。但超滤后还可能复发，因此我们一般会弃去当批药液，毕竟有客户投诉的话可不是闹着玩的。
另有一类灯检疑难同行们讨论一下，
兰色或紫色透明薄片，小米大小。不宜发现，很难目视跟踪。
偶有一支的话看看是不是洗瓶的原因。去好几家厂里看过，灯检废品里有的确实只能用瓶子不干净来解释。但没人把自己的设备验证为有N万分之一的概率洗不净的。liwenhui66 wrote:这个现象我们也遇到过，可能是由于近来天气比较冷，温度比较低的原因。
先加热摇摇看，如果还是没有澄清的话，那就一定是工艺的原因了，加增溶剂，调节PH值，应该没有问题。
这个问题在我们刚搬入新厂房、使用新设备时也被困扰过。当时我们做了大量的验证工作，来确认烟雾产生的原因，将洗瓶、隧道烘箱、灌装等分步进行确认，最后发现一部分来自于隧道烘箱清洁不彻底，另一部分来自于灌装针头的清洗不彻底。解决方法是将隧道烘箱重新拆卸、彻底清理、再安装，在灌装前空喷50次药液，此问题得以解决。我做过小水针，也发现过这种情况，这种药我建议必须检出，肯定属于不合格药品。如果是灌装后用火拉丝封口，我怀疑是在拉丝过程中产生的黑色絮状物。也可能与燃料燃烧不充分有关。我们也发现过这种问题，种种现象与温度有一定的关系。但通过调节PH值、加助溶剂的方法可以起到一定的效果。但不知你是不是和我的一样，要针对不同品种进行分析，尽量找到原因，采取不同的措施解决！这种就是可见异物不合格，就是有不容洁的成分，只有加助溶剂，如果是中药，一定是前处理处理问题，可以看一下中药注射剂的操作流程。高温先灭菌谢谢大家的发言！不溶性微粒，作油性溶剂多见高分子药液也常出现这种情况.偶也遇到过，通过调整PH解决查原料,查工艺吧我们也是经常会有这种情况.我们称之为'蒙针",特别是在灌封时换注射器就很多时候都会有,最近做安痛定也出现这种情况,只是很轻微,称其"微蒙针",头痛中生产的产品是灭菌注射用水灯检时也有上述情况，会是什么原因？这就难说了，我们是不是考虑从安瓿、药液、管道、洗瓶、烘干、冷却、终端过滤、针头等以外如燃气或其他方面的问题？海一诺 wrote:生产的产品是灭菌注射用水灯检时也有上述情况，会是什么原因？？盼答。饮用水————纯化水————注射用水那个可能是结晶,与天气寒冷有关.
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Ⅱ 检测氨基酸纳米银如何去除干扰物质
、名称解释
1、前体 指某些化合物加入发酵培养基能直接彼微物物合程合产物物其自身结构并没变化产物产量却加入前体较提高
2、发酵 广义讲凡微物缺少微量机物质氨基酸、嘌呤、嘧啶、维素等均称
3、菌浓度测定 衡量产菌整培养程菌体量变化般前期菌浓增快期菌浓基本恒定补料引起菌浓波衡量补料量适合与否参数
4、搅拌热 ：机械搅拌通气发酵罐由于机械搅拌带发酵液作机械运造液体间液体与搅拌器等设备间摩擦产观热量搅拌热与搅拌轴功率关
5、批培养 ：简单程培养基接入菌种没物料加入取除空气通入排气整程菌浓度、营养浓度产物浓度等参数都随间变化
6、接种量 ： 移入种体积
接种量＝ —————————
接种培养液体积
7、比耗氧速度或呼吸强度 单位间内单位体积重量细胞所消耗氧气mmol O2?g菌-1?h-1
8、级代谢产物 指微物定期初级代谢产物前体物质合些微物命明确功能物质程程产物即级代谢产物
9、实罐灭菌 实罐灭菌（即批灭菌）配制培养基放入发酵罐或其装置通入蒸汽培养基所用设备加热至灭菌温度维持定间冷却接种温度工艺程称实罐灭菌叫间歇灭菌
10、种扩培养 ：指保存砂土管、冷冻干燥管处休眠状态产菌种接入试管斜面化再经扁瓶或摇瓶及种罐逐级扩培养,终获定数量质量纯种程些纯种培养物称种
11、初级代谢产物 指微物外界吸收各种营养物质通解代谢合代谢维持命所需要物质能量程程产物即初级代谢产物
12、倒种 ：部种源于种罐部源于发酵罐
P 147
13、维持消耗（m） 指维持细胞低性所需消耗能量般讲单位重量细胞单位间内用于维持消耗所需基质量数
14、产物促进剂 指些非细胞所必须营养物非前体加入却能提高产量添加剂
15、补料批培养 ：批培养程补入新鲜料液克服营养足导致发酵早结束缺点
程料液加入没料液取所发酵结束发酵液体积比发酵始所增加工厂实际产采用种
16、发酵热 ：所谓发酵热发酵程释放净热量叫净热量呢发酵程产菌解基质产热量机械搅拌产热量罐壁散热、水蒸发、空气排气带走热量各种产热量各种散失热量代数叫做净热量发酵热引起发酵液温度升发酵热温度升快发酵热温度升慢
17、染菌率 总染菌率指发酵染菌批（）数与总投料批（）数比百率染菌批数应包括染菌培养基经重新灭菌再染菌批数内
18、连续培养 ： 发酵程边补入新鲜料液边放等量发酵液使发酵罐内体积维持恒定
达稳态整程菌浓度产物浓度限制性基质浓度都恒定
19、临界溶氧浓度 指影响呼吸所允许低溶氧浓度
20、复突变 由突变型野型基突变
21、种 见种扩培养
22、培养基 广义讲培养基指切供微物细胞 繁殖所需组营养物质原料同培养基微物培养提供除营养外其所必须条件
23、发酵工程：利用微物特定性状功能通现代化工程技术产用物质或直接应用于工业化产技术体系传统发酵于现代DNA重组、细胞融合、修饰改造等新技术集合并发展起发酵技术
二、填空题
1、 微物发酵培养（程）主要 批 培养、补料批 培养、连续 培养、半连续 培养四种
2、 微物般：调整期、数期、稳定期衰亡期
3、 发酵程工艺控制要化参数 溶解氧、PH、核酸量等.
4、 发酵程控制目比产率率
5、 菌种离般程 采、富集、离、目菌筛选
6、 富集培养目让 目菌 种群占优势使筛选变能
7、 根据工业微物氧气需求同培养 氧培养 厌氧培养 两种
8、 微物培养基根据产用途要 孢 培养基、种 培养基发酵培养基
9、 用灭菌：化灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌
10、 用工业微物： 细菌、 酵母菌、 霉菌、 放线菌四类
11、 发酵程工艺控制代谢参数物理参数 温度、压力、搅拌转速、功率输入、流加数率质量 等
12、 环境菌检测：显微镜检查、肉汤培养、平板培养、发酵程异观察等
13、 染菌原： 发酵工艺流程各环节漏洞发酵程管理善两面
14、 实验室进行发酵菌液体发酵式主要四种：试管液体培养、浅层液体培养、摇瓶培养、台式发酵罐
15、 发酵高产菌种选育包括 （自选育）、（杂交育种）、（诱变育种）、（基工程育种）、（原质体融合）
16、 发酵产物整离提取路线：预处理、固液离、初步纯化、精细纯化品加工加工等五主要程
17、 发酵程主要析项目 ：pH、排气氧、排气CO2呼吸熵、糖含量、氨基氮氨氮、磷含量、菌浓度菌形态
18、 微物调节其代谢采用 酶性、酶合量、细胞膜透性
19、 工业微物菌种自 自离自微物 菌种保藏机构 单位获取
20、 发酵工业用糖类主要 葡萄糖、糖蜜
21、 工业发酵式根据所用菌种单或种 单纯种 发酵 混合 发酵
22、 种及发酵液进行菌状况控制用 显微镜检测、酚红肉汤培养基、平板画线培养、发酵程异观察
23、 菌种离筛选般 采、富集、离、目菌筛选步骤
24、 菌种离筛选般＿＿＿＿＿＿＿＿
25、 用灭菌：化灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌
三、问答题
1、发酵工程概念发酵工程基本两部包括哪些内容?
答：发酵工程利用微物特定性状功能通现代化工程技术产用物质或其直接应用于工业化产技术体系传统发酵与现代DNA重组、细胞融合、修饰改造等新技术结合并发展起发酵技术说渗透工程微物发酵技术工程化发展由于主要利用微物发酵程产产品称微物工程
? .发酵部: 1.菌种特征选育
? 2.培养基特性选择及其灭菌理论
? 3．发酵液特性
? 4.发酵机理
? 5.发酵程力
? 6.空气悬浮细菌微粒滤机理
? 7.氧传递溶解吸收理论
? 8.连续培养连续发酵控制
? 二.提纯部
? 1.细胞破碎离
? 2.液输送滤. 除杂
? 3.离交换渗析逆渗透超滤
? 4.凝胶滤沉淀离
? 5溶媒萃取蒸发蒸馏结晶干燥包装等程单元操作
2、现代发酵工程所用发酵罐应具备些特征
答：（1）、发酵罐应适宜径高比罐身较氧利用率较高；
（2）、发酵罐应能承受定压力发酵罐灭菌工作要承受定压力（气压液压）温度；
（3）、发酵罐搅拌通风装置能使气液充混合实现传质传热作用保证微物发酵程所需溶解氧；
（4）、发酵罐内应尽量减少死角避免藏污纳垢保证灭菌彻底防止染菌；
（5）、发酵罐应具足够冷却面积；
（6）、搅拌器轴封要严密减少泄露
3、微物发酵种应具备几面条件
答:（1）、菌种细胞力强移种至发酵罐能迅速迟缓期短
（2）、理性状稳定
（3）、菌体总量及浓度能满足量发酵罐要
（4）、杂菌污染
（5）、保持稳定产能力
4、发酵工业用氮源些起何作用
答：氮源主要用于构菌体细胞物质（氨基酸蛋白质、核酸等）含氮代谢物用氮源两类：机氮源机氮源
1、机氮源
种类：氨盐、硝酸盐氨水
特点：微物吸收快所称谓迅速利用氮源机氮源迅速利用引起pH变化：
(NH4)2SO4 → 2NH3 + 2H2SO4
NaNO3 + 4H2 → NH3 + 2H2O + NaOH
机氮源菌体作氮源利用培养液留酸性或碱性物质种经微物理作用（代谢）能形酸性物质机氮源叫理酸性物质硫酸胺若菌体代谢能产碱性物质则种机氮源称理碱性物质硝酸钠确使用理酸碱性物质稳定调节发酵程pH积极作用
所选择合适机氮源两层意义：
满足菌体
稳定调节发酵程pH
2、机氮源
源：工业用机氮源都些廉价原料花饼粉、黄豆饼粉、棉饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉、尿素、废菌丝体酒糟
复杂：除提供氮源外些机氮源提供量机盐及
机氮源复杂面发酵程进行影响另面机氮源源具稳定性所机氮源选取使用程必须考虑原料波发酵影响
5、发酵产品产特点种扩培养其任务
答： （2）、种扩培养指保存砂土管、冷冻干燥管处休眠状态产菌种接入试管斜面化再经扁瓶或摇瓶及种罐逐级扩培养,终获定数量质量纯种程些纯种培养物称种
（3）、种扩培养任务： 现代发酵工业产规模越越每发酵罐容积几十立米甚至几百立米?要使微物几十较短间内完巨发酵转化任务必须具备数量巨微物细胞才行
（1）发酵其化工业区别于物体所进行化反应其主要特点：
1发酵程般说都温压进行物化反应反应安全要求条件比较简单
2发酵所用原料通淀粉、糖蜜或其农副产品主要加入少量机机氮源进行反应微物同类别选择利用所需要营养基于—特性利用废水废物等作发酵原料进行物资源改造更新
3发酵程通物体自调节式完反应专性强较单—代谢产物
4由于物体本身所具反应机制能够专性高度选择性某些较复杂化合物进行特定部位氧化、原等化转化反应产比较复杂高化合物
5发酵程杂菌污染防治至关重要除必须设备进行严格消毒处理空气滤外反应必须菌条件进行污染杂菌产要遭巨经济损失要染噬菌体发酵造更危害维持菌条件发酵败关键
6微物菌种进行发酵根本素通变异菌种筛选获高产优良菌株并使产设备充利用获按规难产产品
7工业发酵与其工业相比投资少见效快取显著经济效益
基于特点工业发酵益引起重视传统发酵工艺相比现代发酵工程除述发酵特征外更其优越性除使用微物外用植物细胞酶用工构建工程菌’进行反应；反应设备规发酵罐各种各物反应器代自化连续化程度高使发酵水平原基础所提高创新
发酵产品产特点：
①般操作条件比较温；
②淀粉、糖蜜等主辅少量机、机氮源原料；
③程反应命体自调节式进行；
④能合复杂化合物酶、光性体等；
⑤能进行些特殊反应官能团导入；
⑥产产品物体本身产物含种物质；
⑦产程需要防止杂菌污染；
⑧菌种性能改变获新反应性能或提高产率
6、培养用量确定规律
答： （1）、参照微物细胞内元素比例确定培养基配比虽千差万别都用培养某种微物同类型微物细胞比例其实定规律些规律程度知道培养基基本配比选择
同种类微物内某种含量其实比较稳定培养基终微物吸收利用其比例参考该种微物比例至少作重要依据另外尽管同种类微物比例定差异定共性所培养基集营养管由具体物质提供其用量基本符合种关系
（2）参照碳氮比确定培养基碳源利产物合同碳源少或氮源少发酵影响利同种微物碳氮比差异既同种微物其同理期碳氮比要求同所适碳氮比要通试验确定般100：（1—20）间
（3）、其素培养基些用量极少物质般要严格控制能量例维素、微量元素、某些、前体等具体用量要通试验确定培养基些比例影响培养基某些理化性质要引起重视
7、叙述防止发酵菌种退化具体条件措施些
答：（1）控制传代数：尽量避免必要移种传代并必要传代降低低限度减少细胞裂程所产自发突变几率
（2）创造良培养条件：赤霉素产菌G.fujikuroi培养基加入糖蜜、冬酰胺、谷氨酰胺、5‘-核苷酸或甘露醇等丰富营养物防止衰退效
（3）利用易衰退细胞传代：于放线菌霉菌菌丝细胞含几细胞核用菌丝接种易现衰退孢般单核用于接种避免种现象
（4）采用效菌种保藏
（5）合理育种：选育菌种所处理细胞应使用单核避免使用核细胞;合理选择诱变剂种类或增加突变位点减少离复突变；诱变处理及离提纯化保证保藏菌种纯度
（6）、选用合适培养基 培养基添加某种化物质防止菌种退化或者选取营养相贫乏培养基菌种保藏培养基限制菌株代谢减少变异反发防止菌种退化
8、何选择适发酵温度
答：1、根据菌种及阶段选择
微物种类同所具酶系及其性质同所要求温度范围同发酵前期由于菌量少发酵目要尽快达量菌体取稍高温度促使菌呼吸与代谢使菌迅速；期菌量已达合产物适量发酵需要延期提高产量期温度要稍低些推迟衰发酵期产物合能力降低延发酵周期没必要提高温度刺激产物合放罐
2、根据培养条件选择
温度选择要根据培养条件综合考虑灵选择
通气条件差适降低温度使菌呼吸速率降低些溶氧浓度髙些
培养基稀薄温度该低些温度高营养利用快使菌早自溶
3、根据菌情况
菌快维持较高温度间要短些；菌慢维持较高温度间些培养条件适宜营养丰富通气能满足前期温度髙些利于菌总说温度选择根据菌种阶段及培养条件综合考虑要通反复实践定适温度
9、同间染菌发酵影响染菌何控制
答：（1）种培养期染菌：由于接种量较产菌始占优势且培养液几乎没抗素（产物）或少抗素（产物）防御杂菌能力低容易污染杂菌阶段染菌应培养液全部废弃
（2）发酵前期染菌：发酵前期易染菌且危害
原 发酵前期菌量与杂菌没竞争优势；且未合产物（抗素）或产少抵御杂菌能力弱
期要特别警惕制止染菌发
染菌措施 用降低培养温度调整补料量用酸碱调pH值缩短培养周期等措施予补救前期染菌且培养基养料消耗重新灭菌补加些营养重新接种再用
（3）发酵期染菌 ：发酵期染菌严重干扰产菌代谢杂菌量产酸培养液pH降；糖、氮消耗快发酵液发粘菌丝自溶产物泌减少或停止甚至使已产产物解使发酵液发臭产量泡沫
措施 降温培养减少补料密切注意代谢变化情况发酵单位达定水平提前放罐或者抗素产高单位发酵液输送部染菌罐抑制杂菌
（4） 发酵期染菌：发酵期发酵液内已积累量产物特别抗素杂菌定抑制或杀灭能力染菌产影响染菌严重破坏性较提前放罐
发酵染菌措施：
染菌培养基必须灭菌才放水道灭菌：通蒸汽灭菌加入氧乙酸等化灭菌剂搅拌半才放水道否则由于各罐管道相通造其罐染菌且直接放水道造空气污染导致其罐批染菌
? 凡染菌罐要找染菌原症药该罐要彻底清洗进行空罐消毒才进罐
? 染菌厉害车间环境要用石灰消毒空气用甲醛熏蒸特别若染噬菌体空气必须用甲醛蒸汽消毒
10、发酵级数确定依据
答：
般由菌丝体培养始计算发酵级数工厂第级种罐始计算发酵级数
谷氨酸：三级发酵
级种（摇瓶）→二级种 （罐）→发酵
青霉素：三级发酵
级种 （罐）→二级种（罐）→发酵
1、发酵级数确定依据：级数受发酵规模、菌体特性、接种量影响
2、级数难控制、易染菌、易变异管理困难
般2-4级
3、 发酵产品放反应级数确定非重要
面
11、发挥菌种产潜力主要考虑几点
12、半连续培养说明其优缺点
答：补料批培养基础间歇放掉部发酵液（带放）称半连续培养某些品种采取种式四环素发酵
优点 放掉部发酵液再补入部料液使代谢害物稀释利于产物合提高总产量
缺点 代谢产前体物稀释提取总体积增
13、发酵工程主题微物特点
答：发酵工程所利用微物主要细菌、放线菌酵母菌霉菌
特点：(1)周围环境温度、压强、渗透压、酸碱度等条件极适应能力
(2)极强消化能力
(3)极强繁殖能力
14、叫染菌发酵影响提炼危害
答：染菌：发酵程除产菌外其菌繁殖
染菌影响：发酵程污染杂菌严重影响产发酵工业致命伤
? 造量原材料浪费经济造巨损失
? 扰乱产秩序破坏产计划
? 遇连续染菌特别找染菌原往往影响情绪产积极性
? 影响产品外观及内质量
发酵染菌提炼影响：染菌发酵液含比发酵液更水溶性蛋白其杂质
采用机溶剂萃取提炼工艺则极易发乳化难使水相溶剂相离影响进步提纯
采用直接用离交换树脂提取工艺链霉素、庆霉素染菌量杂菌黏附离交换树脂表面或离交换树脂吸附降低离交换树脂交换容量且杂菌难用水冲洗干净洗脱与产物起进入洗脱液影响进步提纯
15、结合所《微物发酵工程》课程论述某工业发酵产品产工艺流程（画图说明）越详细越
答：①培养基制备
②、菌空气制备
③、菌种与种扩培养
④、发酵培养
⑤、通化工程技术离、提取、精制
欢迎追问
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Ⅲ 现有枯草芽孢杆菌斜面菌种及未知效价的相应抗血清,你能否测定出其血清效价+x
实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。三、试剂与器材1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂四、实验内容1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制。2.调pH不要过头。3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放物、取物。4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。六、思考题1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么?3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么?4.培养基的配制原则是什么?实验二土壤中微生物分离纯化培养一、实验目的掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。二、实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法稀释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。三、试剂与器材1.器材盛9m1无菌水的试管、盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。2.试剂牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基，查氏培养基四、实验内容1.土壤稀释液的制备2.微生物分离纯化：稀释涂平板法，平皿划线分离法，微生物培养技术五、关键步骤及注意事项1.掌握含菌培养基的配制，严格控制温度。2.平板划线应防止染菌，同时应注意划线深度及密度。六、思考题1.如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养?请写出实验的主要步骤。2.如果要分离得到极端嗜盐细菌，在什么地方取样品为宜?并说明理由。实验三菌种保藏一、实验目的1.学习并掌握菌种保藏的基本原理。2.掌握常用的几种不同的菌种保藏方法。二、实验原理微生物个体微小、代谢旺盛、生长繁殖快，如果保存不妥容易发生变异和杂菌污染，甚至导致细胞死亡等现象。因此，保存好菌种是非常必要和重要的。常用的菌种保藏方法包括传代培养法、载体法、悬液法、冷冻法和真空干燥法三、试剂与器材1.材料大肠杆菌、青霉菌、放线菌2.试剂液体石蜡、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％盐酸、无水氯化钙、食盐、干冰3.器材无菌吸管、无菌滴管、无菌培养皿；安额管、冻干管、40目与100目筛子、油纸、滤纸条(0.5X1.2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空压力表、喷灯、L形五通管、冰箱、低温冰箱(—30℃)、超低温冰箱和液氮罐等。四、实验内容1.斜面保藏法2.液体石蜡法3.穿刺保藏法4.砂土管保藏法5.冷冻真空干燥保存法五、关键步骤及注意事项1.清楚各种保藏方法的优缺点，针对不同要求选择适宜的保藏方法。2.熔封安瓶时防止封闭不严。3.液氮冻存操作应防止冻伤。六、思考题根据你自己的实验。谈谈1--2种菌种保藏方法的利弊?实验四细菌形态观察及单染色一、实验目的1.了解简单染色法的原理，并掌握其操作方法。2.学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。3.巩固显微镜(油镜)的使用方法。4.初步认识细菌的形态特征。二、实验原理细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，与背景形成鲜明的对比，以便在显微镜下进行观察。根据实验目的不同，可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等。简单染色法是最基本的染色方法，是利用单一染料对细菌进行染色。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色。三、试剂与器材1.材料大肠杆菌，枯草芽孢杆菌2.试剂吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)、齐氏石炭酸复红染液。3.器材显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)等。四、实验内容简单染色法：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检五、关键步骤及注意事项1.涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应尽可能均匀，2.水洗步骤水流不宜过大，过急，以免涂片薄膜脱落。六、思考题1.你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环币?2.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?3.如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题?如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢?实验五放线菌及霉菌形态观察一、实验目的1.了解放线菌、霉菌形态观察的原理。2.学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操作方法。3.初步了解放线菌、霉菌的形态特征。二、实验原理放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝(简称“基丝”)，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝(简称“气丝”)，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征。本实验采用插片法。插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。三、试剂与器材1.材料黑曲霉、青霉和根霉，细黄链霉菌或青色链霉菌，灭菌的高氏I号琼脂和灭菌的查氏培养基。2.实验器材经灭菌的：平皿、玻璃纸、无菌吸管、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片、接种环、接种铲、镊子、显微镜等。四、实验内容倒平板→接种→插片→培养→镜检五、关键步骤及注意事项1.倒平板要厚一些，接种时划线要密。2.插片时要有一定角度并与划线垂直。3.观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，更换高倍镜观察。4.如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。六、思考题1.镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝?2.你认为霉菌和放线菌菌丝的主要区别是什么？实验六革兰氏染色及芽孢染色一、实验目的1.了解革兰氏染色法和芽孢染色法的原理，并掌握其操作方法。2.了解革兰氏染色法在细菌分类鉴定中的重要性。3.学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。4.学习显微镜(油镜)的使用方法。5.初步认识细菌的形态特征。二、实验原理革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌。革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征，为保证染色结果的正确性，采用规范的染色方法是十分必要的。芽孢染色法的基本原理，用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。三、试剂与器材1.材料：枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物，大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物2.试剂革兰氏染色液(结晶紫液、碘液、95％乙醇、番红液)。5％孔雀绿水溶液3.实验器材小试管、滴管、烧杯、试管架、滤纸、木夹子、载玻片、盖玻片、凹载玻片、无菌水、显微镜等、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)、擦镜纸、生理盐水等。四、实验内容1.革兰氏染色法制片→初染→媒染→脱色→复染→镜检。2.Schaefer-Fulton氏染色法制片→染色→水洗→复染→水洗→镜检。五、关键步骤及注意事项1.涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应尽可能均匀，2.乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，严格掌握脱色时间。六、思考题1.你认为要得到正确的改良的革兰氏染色结果必须注意哪些操作?关键在哪一步?为什么?2.现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。你怎样运用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色，以证明你的染色结果正确性。3.你的染色结果是否正确?如果不正确，请说明原因。4.若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因?5.说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观察到细菌的芽孢?实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。2.学习鉴别死活细胞的实验方法。二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。三、试剂与器材1.材料酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomycescalsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。四、实验内容1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2.水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。六、思考题1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌?实验八微生物直接计数法及测微技术一、实验目的1.了解血球计数板计数原理，并掌握计数方法。2.掌握用测微尺测定微生物大小的方法。二、实验原理显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。因为计数板是一块特别的载玻片。其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格(见图2—3—44)；另一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。计数时，通常只用5个中格内的菌体(孢子)数即可。然后求出每个中方格的平均值，再乘上25或16，得出一个大方格中的总茵数，再换算成lml菌液中的总菌数。若设5个中方格中总菌数为N，菌液稀释倍数为M，如果是25个中方格计数板，则计算方法为：lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数×25×104×M=50000N?M(个)微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长0．01mm(即10pm)。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。三、试剂与器材1.材料酿酒酵母、藤黄微球菌和大肠杆菌的染色标本片、酿酒酵母24h马铃薯斜面培养物。2.实验器材细胞计数板、显微镜、盖玻片、无菌毛细滴管、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、显微镜等。四、实验内容1.微生物直接计数法菌悬液制备→镜检计数室→加样品→显微镜计数→清洗血细胞计数板2.微生物测微技术装目镜测微尺→校正→菌体大小测定五、关键步骤及注意事项1.防止加样空气泡产生。2.调节显微镜光线的强弱适当。六、思考题1.根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误差、力求准确?2.某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1～2种可行的检测方法。3.为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正?实验九大肠杆菌生长曲线的测定一、实验目的1.了解大肠杆菌的生长曲线特征和繁殖规律，并学会绘制生长曲线。2.复习光电比浊法测量细菌数量的方法。二、实验原理将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。三、试剂与器材1.材料与试剂大肠杆菌、LB液体培养基70ml、分装2支大试管(5ml／支)、剩余60ml装入250ml的三角瓶。2.器材722型分光光度计、恒温振荡摇床、无菌试管、无菌吸管等。四、实验内容编号→接种→培养→比浊测定五、关键步骤及注意事项1.测定OD值时，要求从低浓度到高浓度测定2.严格控制培养时间六、思考题1.根据实验数据画出生长曲线，并说明大肠杆菌生长特征。2.如果用活菌计数法制作生长曲线，你认为会有什么不同?两者各有什么缺点7．3.次生礼谢产物的大量积累在哪个时期?根据细菌生长繁殖的规律，采用哪些措施可使次生代谢产物积累?实验十水中细菌总数的测定一、实验目的1.学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。2.了解水源水的平板菌落计数的原理。二、实验原理本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。三、试剂与器材1.试剂牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，灭菌水2.器材灭菌三角瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。四、实验内容1.水样的采取2.细菌总数测定3.菌落计数方法五、关键步骤及注意事项1.注意全过程防止染菌六、思考题从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？实验十一细菌细胞的生化反应实验一、实验目的了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法。二、实验原理各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。糖发酵是最常用的生化反应，存在于大多数细菌中。不同的细菌在糖的分解能力上存在很大的差异。有些细菌能分解某种糖并产生酸性物质(如乳酸、丙酸、醋酸等)和气体(如二氧化碳、氢、甲烷等)，而有些细菌只产生酸不产生气体。例如大肠杆菌分解乳糖和葡萄糖产酸并产气，普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，但不能分解乳糖。酸的产生可利用指示剂来判断。在培养基中加入溴甲酚紫(pH5．2为黄色，pH6．8为紫色)，当发酵产酸时，使培养基由紫色变为黄色。气体的产生可由发酵试管中倒置的德汉氏小管中有无气泡的出现来验证．三、试剂与器材1.材料大肠杆菌、普通变性杆菌、产气杆菌、糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基。2.试剂甲基红试剂、40％KOH、5％a一萘酚、乙醚、吲哚试剂。3.实验器材德汉氏小管、试管、接种环、恒温培养箱。四、实验内容培养基配制→编号→试管→接种→培养→观察结果五、关键步骤及注意事项1.要严格按照培养基配方配制培养基。2.观察结果时要注意滴加药量及反应时间。六、思考题1.哪些生理生化试验可用于区别大肠杆菌和产生肠杆菌?结果如何?2.做糖发酵试验时应注意哪些问题?3.甲基红试验和伏一普试验的最终产物如何?为什么会出现不同的最终产物?实验十二噬菌体的分离、纯化及效价测定一、实验目的1.学习分离、纯化噬菌体的原理和方法2.观察噬菌斑的形态和大小3.掌握噬菌体效价测定的基本方法二、实验原理噬菌体是细菌的专性寄生物，自然界中凡是有细菌存在的地方，均可以发现其特异性的噬菌体，噬菌体侵入细菌细胞后，利用宿主细胞的酶系统进行复制和增殖，最终导致细菌细胞裂解，噬菌体从细胞中释放出来，可以进一步侵染细菌细胞。在液体培养基中，噬菌体可以使浑浊的菌悬液变为澄清。在长有宿主细菌的固体培养基平板上，噬菌体可以裂解细菌形成透明的空斑，即噬菌斑，一个噬菌体产生一个噬菌斑，因此可以利用这个性质对噬菌体进行分离和效价的测定。噬菌体的效价是指噬菌体的浓度，即一毫升培养液中所含有的噬菌体数量。噬菌体效价的测定方法多采用双层琼脂平板法。先在培养皿中倒入底层固体培养基，凝固后再倒入含有宿主细菌和一定稀释度噬菌体的半固体培养基。培养一段时间后，计算噬菌斑的数量。三、试剂与器材1.材料大肠杆菌、牛肉膏蛋白胨固体培养基、牛肉膏蛋白胨半固体培养基(含有琼脂0．5％，试管分装，每管3～5m1)、三倍浓缩的牛肉膏蛋白胨液体培养基。2.器材培养皿、无菌吸管、三角瓶、抽滤瓶、蔡氏细菌滤器、真空泵、阴沟污水。四、实验内容噬菌体分离→噬菌体纯化→效价测定五、关键步骤及注意事项1.噬菌体时要注意细菌滤器的型号。2.纯化噬菌体时要注意形态、大小。3.效价测定时要注意双层琼脂平板法的使用技巧。六、思考题1.在固体培养基平板上为什么能形成噬茵斑?2.从固体培养基平板上得到的噬菌斑数目，如何计算噬菌体的效价？
Ⅳ 实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的操作步骤讲解
你划线的B选项是错误的···1、2、3步是后续徒步的准备工作，在倒平板（1）和试管斜面划线接种（2、3）过程中都要求无菌操作，所以要在酒精灯旁操作，避免染菌；在第3步划线时，一般采用三区划线，每一区画完之后都要对接种环进行灼烧以杀死接种针上的菌体，其目的是逐渐对画线区的菌体进行稀释，以期获得单菌落；划线完毕后平板应倒置培养，避免冷凝水进入平板，影响菌落生长···
Ⅳ 液体培养 染菌
您好, 照您所说的液体培养基灭菌后,不管你是做什么接种实验,一定要等冷却后再进行接种,所以接种后出现污染就与用水冷却无关!
液体培养比固体培养更容易污染!
首先请考虑[1.) 如果只是个别的接种后出现污染,而大部分都没出现污染,就说明是在接种个别培养基时失误造成的; 2.) 如果全部都出现污染,就有可能是液体培养基在灭菌过程中不彻底,在这里,我建议下次你做实验时做一个对照,就是不进行接种的液体培养基,如果对照也污染了,那就是灭菌和震荡培养箱清洁度的问题了;]
以下原因都会导致接种液体培养接种后出现污染:
1. 检查您的灭菌程序是否正确
2. 接种室的清洁程度(如果长期不进行消毒,空气中的杂菌会越来越多,特别是在真菌培养的实验室内!)
3. 接种时的操作是否规范,这里就不过多讲了,估计你也是经常操作的
4. 震荡培养箱要定期打扫, 因为放置液体培养基的震荡培养箱中必须有水,而水中有大量的微生物,液体培养瓶放在里面很容易被污染的
5. 灭菌前,在倒液体培养基时,要注意培养液不要倒在接近瓶口的地方,如果瓶口沾到培养液要立即用酒精擦干净
6. 培养液不要倒得过多,过多的培养液在液体振荡培养过程中也有可能使液体沾到棉塞上,从而导致污染
大概就是这些了,以前我也是做过真菌实验的,一些实验心得和你分享了
Ⅵ 无菌水是什么水
无菌水
无菌水则通常是通过高温蒸汽法,UHT热法,化学法,臭氧方法和物理过滤专法将水中微属生物杀死或过滤掉而得到的水,水中的无机盐等一般来说不会减少.
中文名
无菌水
处理方法
五种
特 点
将水中微生物杀死或过滤掉
优 势
水中的无机盐不会减少
目录
1 制备方法
2 区别于蒸馏水
制备方法
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其一是采用UHT热法制备，这种方法常用于无菌灌装的包材冲洗；
其二是采用化学法制备，如添加二氧化氯、次氯酸等，这种方法常用于热灌装的包材冲洗；
其三是采用臭氧方法制备，这种方法用于在瓶装水的冲洗。
饮用/医用无菌水：中空纤维超滤膜。
实验室无菌水：将100mL水加入200mL或250mL三角瓶中，加棉塞、包扎、高压灭菌。
区别于蒸馏水
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无菌水用冷水热开后冷却经过高温杀菌制作的,适合密封无菌保存。蒸馏水是热水烧开后的蒸气形成的水滴形式（也基本无菌，比无菌水容易制作且好取制，量少）。
Ⅶ 【请教】灯检时发现的烟雾状微粒柱是什么东西
我们在灯检时偶尔遇到烟雾状微粒柱的现象，数量很少，但现象恐怖，想查清楚来源，彻底解决这一问题，但不知道是什么东西，无法分析，无从下手，那位大侠有这样的经验，请不吝赐教。嗯 药典可见异物检查的标准里有这么一条 “并在旋转时不得检出烟雾状微粒柱”。什么品种，说的不清楚生化制剂容易出此现象，可能是多肽类的聚集，要从工艺上改进，比如说加吐温，超滤等。这个现象我们也遇到过，多摇两下就看不到了！ 这种情况一般是由于溶液中存在不溶性微粒，也就是溶解不好。但过滤是过不掉的，还是要从处方工艺中改进，比如调PH、加热、加一些其它溶剂等！有些易氧化的药物沉淀出来，也会形成那样的东西我们也遇到过类似问题,特别是生产完利巴韦林,林可霉素后转其它品种时的第一二批出现以上问题,由于利巴韦林,林可霉素容易析出,所以每次清场搞卫生时很难清洁彻底,本人怀疑这与"烟雾"的发生有一定的关系. 请各位战友分析分析.我们也遇到这种类似的现象，采用超滤都没有除去还是在工艺上去解决掉了是什么口服液呀，通常染菌之后再经灭菌就会有这样的情况了，系细菌的尸体。不知道你那种情况是不是这种原因，仅供参考烟雾状微粒是溶液中的沉积物，有可能溶液被污染导致的．如果在灯检的时候发现，就必须挑出来，属于不合格品．首先可以确定烟雾状微粒是溶液中的沉积物，属于不合格品．原因很多：1 生化药残留的蛋白或肽经灭菌后，蛋白变性产生烟雾，一晃就没，放置一段时间又出来了。 2 有可能溶液被污染导致的．细菌的尸体凝聚。 3 还有一些不溶性微粒，过滤除不掉，加热凝聚后过滤可以除去。或加增溶剂。 希望能帮助你。这个现象我们也遇到过，可能是由于近来天气比较冷，温度比较低的原因。 先加热摇摇看，如果还是没有澄清的话，那就一定是工艺的原因了，加增溶剂，调节PH值，应该没有问题。这个现象我们也遇到过，可能是由于近来天气比较冷，温度比较低的原因。 先加热摇摇看，如果还是没有澄清的话，那就一定是工艺的原因了，加增溶剂，调节PH值，应该没有问题。玻瓶在硅化时,如果硅化不够好,可能会出现"烟雾状微粒柱的现象".生产的产品是灭菌注射用水灯检时也有上述情况，会是什么原因？？盼答。被污染，找找污染源。inhitec wrote:生化制剂容易出此现象，可能是多肽类的聚集，要从工艺上改进，比如说加吐温，超滤等。 同意此推测，在生化水针中极常见。我们抽检时俗称：“冒烟”。有时在灌封过程中滤液瓶内的药液在几分钟内发生浑浊，应与此现象属同一类型。但超滤后还可能复发，因此我们一般会弃去当批药液，毕竟有客户投诉的话可不是闹着玩的。 另有一类灯检疑难同行们讨论一下， 兰色或紫色透明薄片，小米大小。不宜发现，很难目视跟踪。 偶有一支的话看看是不是洗瓶的原因。去好几家厂里看过，灯检废品里有的确实只能用瓶子不干净来解释。但没人把自己的设备验证为有N万分之一的概率洗不净的。liwenhui66 wrote:这个现象我们也遇到过，可能是由于近来天气比较冷，温度比较低的原因。 先加热摇摇看，如果还是没有澄清的话，那就一定是工艺的原因了，加增溶剂，调节PH值，应该没有问题。 这个问题在我们刚搬入新厂房、使用新设备时也被困扰过。当时我们做了大量的验证工作，来确认烟雾产生的原因，将洗瓶、隧道烘箱、灌装等分步进行确认，最后发现一部分来自于隧道烘箱清洁不彻底，另一部分来自于灌装针头的清洗不彻底。解决方法是将隧道烘箱重新拆卸、彻底清理、再安装，在灌装前空喷50次药液，此问题得以解决。我做过小水针，也发现过这种情况，这种药我建议必须检出，肯定属于不合格药品。如果是灌装后用火拉丝封口，我怀疑是在拉丝过程中产生的黑色絮状物。也可能与燃料燃烧不充分有关。我们也发现过这种问题，种种现象与温度有一定的关系。但通过调节PH值、加助溶剂的方法可以起到一定的效果。但不知你是不是和我的一样，要针对不同品种进行分析，尽量找到原因，采取不同的措施解决！这种就是可见异物不合格，就是有不容洁的成分，只有加助溶剂，如果是中药，一定是前处理处理问题，可以看一下中药注射剂的操作流程。高温先灭菌谢谢大家的发言！不溶性微粒，作油性溶剂多见高分子药液也常出现这种情况.偶也遇到过，通过调整PH解决查原料,查工艺吧我们也是经常会有这种情况.我们称之为'蒙针",特别是在灌封时换注射器就很多时候都会有,最近做安痛定也出现这种情况,只是很轻微,称其"微蒙针",头痛中生产的产品是灭菌注射用水灯检时也有上述情况，会是什么原因？这就难说了，我们是不是考虑从安瓿、药液、管道、洗瓶、烘干、冷却、终端过滤、针头等以外如燃气或其他方面的问题？海一诺 wrote:生产的产品是灭菌注射用水灯检时也有上述情况，会是什么原因？？盼答。饮用水————纯化水————注射用水那个可能是结晶,与天气寒冷有关.
Ⅷ 大肠杆菌的纯化分离中扩大培养的目的
你划线的来b选项是错误的·自··1、2、3步是后续徒步的准备工作，在倒平板（1）和试管斜面划线接种（2、3）过程中都要求无菌操作，所以要在酒精灯旁操作，避免染菌；在第3步划线时，一般采用三区划线，每一区画完之后都要对接种环进行灼烧以杀死接种针上的菌体，其目的是逐渐对画线区的菌体进行稀释，以期获得单菌落；划线完毕后平板应倒置培养，避免冷凝水进入平板，影响菌落生长···
Ⅸ 发酵氨基酸产率有所下降，采用什么方法恢复氨基酸产率
、名称解释
1、前体 指某些化合物加入发酵培养基能直接彼微物物合程合产物物其自身结构并没变化产物产量却加入前体较提高
2、发酵 广义讲凡微物缺少微量机物质氨基酸、嘌呤、嘧啶、维素等均称
3、菌浓度测定 衡量产菌整培养程菌体量变化般前期菌浓增快期菌浓基本恒定补料引起菌浓波衡量补料量适合与否参数
4、搅拌热 ：机械搅拌通气发酵罐由于机械搅拌带发酵液作机械运造液体间液体与搅拌器等设备间摩擦产观热量搅拌热与搅拌轴功率关
5、批培养 ：简单程培养基接入菌种没物料加入取除空气通入排气整程菌浓度、营养浓度产物浓度等参数都随间变化
6、接种量 ： 移入种体积
接种量＝ —————————
接种培养液体积
7、比耗氧速度或呼吸强度 单位间内单位体积重量细胞所消耗氧气mmol O2?g菌-1?h-1
8、级代谢产物 指微物定期初级代谢产物前体物质合些微物命明确功能物质程程产物即级代谢产物
9、实罐灭菌 实罐灭菌（即批灭菌）配制培养基放入发酵罐或其装置通入蒸汽培养基所用设备加热至灭菌温度维持定间冷却接种温度工艺程称实罐灭菌叫间歇灭菌
10、种扩培养 ：指保存砂土管、冷冻干燥管处休眠状态产菌种接入试管斜面化再经扁瓶或摇瓶及种罐逐级扩培养,终获定数量质量纯种程些纯种培养物称种
11、初级代谢产物 指微物外界吸收各种营养物质通解代谢合代谢维持命所需要物质能量程程产物即初级代谢产物
12、倒种 ：部种源于种罐部源于发酵罐
P 147
13、维持消耗（m） 指维持细胞低性所需消耗能量般讲单位重量细胞单位间内用于维持消耗所需基质量数
14、产物促进剂 指些非细胞所必须营养物非前体加入却能提高产量添加剂
15、补料批培养 ：批培养程补入新鲜料液克服营养足导致发酵早结束缺点
程料液加入没料液取所发酵结束发酵液体积比发酵始所增加工厂实际产采用种
16、发酵热 ：所谓发酵热发酵程释放净热量叫净热量呢发酵程产菌解基质产热量机械搅拌产热量罐壁散热、水蒸发、空气排气带走热量各种产热量各种散失热量代数叫做净热量发酵热引起发酵液温度升发酵热温度升快发酵热温度升慢
17、染菌率 总染菌率指发酵染菌批（）数与总投料批（）数比百率染菌批数应包括染菌培养基经重新灭菌再染菌批数内
18、连续培养 ： 发酵程边补入新鲜料液边放等量发酵液使发酵罐内体积维持恒定
达稳态整程菌浓度产物浓度限制性基质浓度都恒定
19、临界溶氧浓度 指影响呼吸所允许低溶氧浓度
20、复突变 由突变型野型基突变
21、种 见种扩培养
22、培养基 广义讲培养基指切供微物细胞 繁殖所需组营养物质原料同培养基微物培养提供除营养外其所必须条件
23、发酵工程：利用微物特定性状功能通现代化工程技术产用物质或直接应用于工业化产技术体系传统发酵于现代DNA重组、细胞融合、修饰改造等新技术集合并发展起发酵技术
二、填空题
1、 微物发酵培养（程）主要 批 培养、补料批 培养、连续 培养、半连续 培养四种
2、 微物般：调整期、数期、稳定期衰亡期
3、 发酵程工艺控制要化参数 溶解氧、PH、核酸量等.
4、 发酵程控制目比产率率
5、 菌种离般程 采、富集、离、目菌筛选
6、 富集培养目让 目菌 种群占优势使筛选变能
7、 根据工业微物氧气需求同培养 氧培养 厌氧培养 两种
8、 微物培养基根据产用途要 孢 培养基、种 培养基发酵培养基
9、 用灭菌：化灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌
10、 用工业微物： 细菌、 酵母菌、 霉菌、 放线菌四类
11、 发酵程工艺控制代谢参数物理参数 温度、压力、搅拌转速、功率输入、流加数率质量 等
12、 环境菌检测：显微镜检查、肉汤培养、平板培养、发酵程异观察等
13、 染菌原： 发酵工艺流程各环节漏洞发酵程管理善两面
14、 实验室进行发酵菌液体发酵式主要四种：试管液体培养、浅层液体培养、摇瓶培养、台式发酵罐
15、 发酵高产菌种选育包括 （自选育）、（杂交育种）、（诱变育种）、（基工程育种）、（原质体融合）
16、 发酵产物整离提取路线：预处理、固液离、初步纯化、精细纯化品加工加工等五主要程
17、 发酵程主要析项目 ：pH、排气氧、排气CO2呼吸熵、糖含量、氨基氮氨氮、磷含量、菌浓度菌形态
18、 微物调节其代谢采用 酶性、酶合量、细胞膜透性
19、 工业微物菌种自 自离自微物 菌种保藏机构 单位获取
20、 发酵工业用糖类主要 葡萄糖、糖蜜
21、 工业发酵式根据所用菌种单或种 单纯种 发酵 混合 发酵
22、 种及发酵液进行菌状况控制用 显微镜检测、酚红肉汤培养基、平板画线培养、发酵程异观察
23、 菌种离筛选般 采、富集、离、目菌筛选步骤
24、 菌种离筛选般＿＿＿＿＿＿＿＿
25、 用灭菌：化灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌
三、问答题
1、发酵工程概念发酵工程基本两部包括哪些内容?
答：发酵工程利用微物特定性状功能通现代化工程技术产用物质或其直接应用于工业化产技术体系传统发酵与现代DNA重组、细胞融合、修饰改造等新技术结合并发展起发酵技术说渗透工程微物发酵技术工程化发展由于主要利用微物发酵程产产品称微物工程
? .发酵部: 1.菌种特征选育
? 2.培养基特性选择及其灭菌理论
? 3．发酵液特性
? 4.发酵机理
? 5.发酵程力
? 6.空气悬浮细菌微粒滤机理
? 7.氧传递溶解吸收理论
? 8.连续培养连续发酵控制
? 二.提纯部
? 1.细胞破碎离
? 2.液输送滤. 除杂
? 3.离交换渗析逆渗透超滤
? 4.凝胶滤沉淀离
? 5溶媒萃取蒸发蒸馏结晶干燥包装等程单元操作
2、现代发酵工程所用发酵罐应具备些特征
答：（1）、发酵罐应适宜径高比罐身较氧利用率较高；
（2）、发酵罐应能承受定压力发酵罐灭菌工作要承受定压力（气压液压）温度；
（3）、发酵罐搅拌通风装置能使气液充混合实现传质传热作用保证微物发酵程所需溶解氧；
（4）、发酵罐内应尽量减少死角避免藏污纳垢保证灭菌彻底防止染菌；
（5）、发酵罐应具足够冷却面积；
（6）、搅拌器轴封要严密减少泄露
3、微物发酵种应具备几面条件
答:（1）、菌种细胞力强移种至发酵罐能迅速迟缓期短
（2）、理性状稳定
（3）、菌体总量及浓度能满足量发酵罐要
（4）、杂菌污染
（5）、保持稳定产能力
4、发酵工业用氮源些起何作用
答：氮源主要用于构菌体细胞物质（氨基酸蛋白质、核酸等）含氮代谢物用氮源两类：机氮源机氮源
1、机氮源
种类：氨盐、硝酸盐氨水
特点：微物吸收快所称谓迅速利用氮源机氮源迅速利用引起pH变化：
(NH4)2SO4 → 2NH3 + 2H2SO4
NaNO3 + 4H2 → NH3 + 2H2O + NaOH
机氮源菌体作氮源利用培养液留酸性或碱性物质种经微物理作用（代谢）能形酸性物质机氮源叫理酸性物质硫酸胺若菌体代谢能产碱性物质则种机氮源称理碱性物质硝酸钠确使用理酸碱性物质稳定调节发酵程pH积极作用
所选择合适机氮源两层意义：
满足菌体
稳定调节发酵程pH
2、机氮源
源：工业用机氮源都些廉价原料花饼粉、黄豆饼粉、棉饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉、尿素、废菌丝体酒糟
复杂：除提供氮源外些机氮源提供量机盐及
机氮源复杂面发酵程进行影响另面机氮源源具稳定性所机氮源选取使用程必须考虑原料波发酵影响
5、发酵产品产特点种扩培养其任务
答： （2）、种扩培养指保存砂土管、冷冻干燥管处休眠状态产菌种接入试管斜面化再经扁瓶或摇瓶及种罐逐级扩培养,终获定数量质量纯种程些纯种培养物称种
（3）、种扩培养任务： 现代发酵工业产规模越越每发酵罐容积几十立米甚至几百立米?要使微物几十较短间内完巨发酵转化任务必须具备数量巨微物细胞才行
（1）发酵其化工业区别于物体所进行化反应其主要特点：
1发酵程般说都温压进行物化反应反应安全要求条件比较简单
2发酵所用原料通淀粉、糖蜜或其农副产品主要加入少量机机氮源进行反应微物同类别选择利用所需要营养基于—特性利用废水废物等作发酵原料进行物资源改造更新
3发酵程通物体自调节式完反应专性强较单—代谢产物
4由于物体本身所具反应机制能够专性高度选择性某些较复杂化合物进行特定部位氧化、原等化转化反应产比较复杂高化合物
5发酵程杂菌污染防治至关重要除必须设备进行严格消毒处理空气滤外反应必须菌条件进行污染杂菌产要遭巨经济损失要染噬菌体发酵造更危害维持菌条件发酵败关键
6微物菌种进行发酵根本素通变异菌种筛选获高产优良菌株并使产设备充利用获按规难产产品
7工业发酵与其工业相比投资少见效快取显著经济效益
基于特点工业发酵益引起重视传统发酵工艺相比现代发酵工程除述发酵特征外更其优越性除使用微物外用植物细胞酶用工构建工程菌’进行反应；反应设备规发酵罐各种各物反应器代自化连续化程度高使发酵水平原基础所提高创新
发酵产品产特点：
①般操作条件比较温；
②淀粉、糖蜜等主辅少量机、机氮源原料；
③程反应命体自调节式进行；
④能合复杂化合物酶、光性体等；
⑤能进行些特殊反应官能团导入；
⑥产产品物体本身产物含种物质；
⑦产程需要防止杂菌污染；
⑧菌种性能改变获新反应性能或提高产率
6、培养用量确定规律
答： （1）、参照微物细胞内元素比例确定培养基配比虽千差万别都用培养某种微物同类型微物细胞比例其实定规律些规律程度知道培养基基本配比选择
同种类微物内某种含量其实比较稳定培养基终微物吸收利用其比例参考该种微物比例至少作重要依据另外尽管同种类微物比例定差异定共性所培养基集营养管由具体物质提供其用量基本符合种关系
（2）参照碳氮比确定培养基碳源利产物合同碳源少或氮源少发酵影响利同种微物碳氮比差异既同种微物其同理期碳氮比要求同所适碳氮比要通试验确定般100：（1—20）间
（3）、其素培养基些用量极少物质般要严格控制能量例维素、微量元素、某些、前体等具体用量要通试验确定培养基些比例影响培养基某些理化性质要引起重视
7、叙述防止发酵菌种退化具体条件措施些
答：（1）控制传代数：尽量避免必要移种传代并必要传代降低低限度减少细胞裂程所产自发突变几率
（2）创造良培养条件：赤霉素产菌G.fujikuroi培养基加入糖蜜、冬酰胺、谷氨酰胺、5‘-核苷酸或甘露醇等丰富营养物防止衰退效
（3）利用易衰退细胞传代：于放线菌霉菌菌丝细胞含几细胞核用菌丝接种易现衰退孢般单核用于接种避免种现象
（4）采用效菌种保藏
（5）合理育种：选育菌种所处理细胞应使用单核避免使用核细胞;合理选择诱变剂种类或增加突变位点减少离复突变；诱变处理及离提纯化保证保藏菌种纯度
（6）、选用合适培养基 培养基添加某种化物质防止菌种退化或者选取营养相贫乏培养基菌种保藏培养基限制菌株代谢减少变异反发防止菌种退化
8、何选择适发酵温度
答：1、根据菌种及阶段选择
微物种类同所具酶系及其性质同所要求温度范围同发酵前期由于菌量少发酵目要尽快达量菌体取稍高温度促使菌呼吸与代谢使菌迅速；期菌量已达合产物适量发酵需要延期提高产量期温度要稍低些推迟衰发酵期产物合能力降低延发酵周期没必要提高温度刺激产物合放罐
2、根据培养条件选择
温度选择要根据培养条件综合考虑灵选择
通气条件差适降低温度使菌呼吸速率降低些溶氧浓度髙些
培养基稀薄温度该低些温度高营养利用快使菌早自溶
3、根据菌情况
菌快维持较高温度间要短些；菌慢维持较高温度间些培养条件适宜营养丰富通气能满足前期温度髙些利于菌总说温度选择根据菌种阶段及培养条件综合考虑要通反复实践定适温度
9、同间染菌发酵影响染菌何控制
答：（1）种培养期染菌：由于接种量较产菌始占优势且培养液几乎没抗素（产物）或少抗素（产物）防御杂菌能力低容易污染杂菌阶段染菌应培养液全部废弃
（2）发酵前期染菌：发酵前期易染菌且危害
原 发酵前期菌量与杂菌没竞争优势；且未合产物（抗素）或产少抵御杂菌能力弱
期要特别警惕制止染菌发
染菌措施 用降低培养温度调整补料量用酸碱调pH值缩短培养周期等措施予补救前期染菌且培养基养料消耗重新灭菌补加些营养重新接种再用
（3）发酵期染菌 ：发酵期染菌严重干扰产菌代谢杂菌量产酸培养液pH降；糖、氮消耗快发酵液发粘菌丝自溶产物泌减少或停止甚至使已产产物解使发酵液发臭产量泡沫
措施 降温培养减少补料密切注意代谢变化情况发酵单位达定水平提前放罐或者抗素产高单位发酵液输送部染菌罐抑制杂菌
（4） 发酵期染菌：发酵期发酵液内已积累量产物特别抗素杂菌定抑制或杀灭能力染菌产影响染菌严重破坏性较提前放罐
发酵染菌措施：
染菌培养基必须灭菌才放水道灭菌：通蒸汽灭菌加入氧乙酸等化灭菌剂搅拌半才放水道否则由于各罐管道相通造其罐染菌且直接放水道造空气污染导致其罐批染菌
? 凡染菌罐要找染菌原症药该罐要彻底清洗进行空罐消毒才进罐
? 染菌厉害车间环境要用石灰消毒空气用甲醛熏蒸特别若染噬菌体空气必须用甲醛蒸汽消毒
10、发酵级数确定依据
答：
般由菌丝体培养始计算发酵级数工厂第级种罐始计算发酵级数
谷氨酸：三级发酵
级种（摇瓶）→二级种 （罐）→发酵
青霉素：三级发酵
级种 （罐）→二级种（罐）→发酵
1、发酵级数确定依据：级数受发酵规模、菌体特性、接种量影响
2、级数难控制、易染菌、易变异管理困难
般2-4级
3、 发酵产品放反应级数确定非重要
面
11、发挥菌种产潜力主要考虑几点
12、半连续培养说明其优缺点
答：补料批培养基础间歇放掉部发酵液（带放）称半连续培养某些品种采取种式四环素发酵
优点 放掉部发酵液再补入部料液使代谢害物稀释利于产物合提高总产量
缺点 代谢产前体物稀释提取总体积增
13、发酵工程主题微物特点
答：发酵工程所利用微物主要细菌、放线菌酵母菌霉菌
特点：(1)周围环境温度、压强、渗透压、酸碱度等条件极适应能力
(2)极强消化能力
(3)极强繁殖能力
14、叫染菌发酵影响提炼危害
答：染菌：发酵程除产菌外其菌繁殖
染菌影响：发酵程污染杂菌严重影响产发酵工业致命伤
? 造量原材料浪费经济造巨损失
? 扰乱产秩序破坏产计划
? 遇连续染菌特别找染菌原往往影响情绪产积极性
? 影响产品外观及内质量
发酵染菌提炼影响：染菌发酵液含比发酵液更水溶性蛋白其杂质
采用机溶剂萃取提炼工艺则极易发乳化难使水相溶剂相离影响进步提纯
采用直接用离交换树脂提取工艺链霉素、庆霉素染菌量杂菌黏附离交换树脂表面或离交换树脂吸附降低离交换树脂交换容量且杂菌难用水冲洗干净洗脱与产物起进入洗脱液影响进步提纯
15、结合所《微物发酵工程》课程论述某工业发酵产品产工艺流程（画图说明）越详细越
答：①培养基制备
②、菌空气制备
③、菌种与种扩培养
④、发酵培养
⑤、通化工程技术离、提取、精制
欢迎追问