Ⅰ 在光度分析中参比溶液的作用是什么
一、原理
可见光、紫外线照射某些物质，主要是由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收，而产生化合物的可见紫外吸收光谱。基于物质对光的选择性吸收的特性而建立分光光度法或称吸收光谱法的分析方法。它是以朗伯——比耳定律为基础。
1
朗伯—比耳定律 A = lg—- = ECL
T
式中 A为吸收度；
T为透光率；
E为吸收系数，采用的表示方法是（E1％1cm），其物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm时的吸收度数值；
C为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算），g；
L为液层厚度，cm。
二、使用范围
凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。
三、仪器
可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区。主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。
本仪器是根据相对测量的原理工作的，即先选定某一溶剂（或空气、试样）作为标准（空白或称参比）溶液，并认为它的透光率为100％（或吸收度为0），而被测的试样透光率（或吸收度）是相对于标准溶液而言，实际上就是由出射狭缝射出的单色光，分别通过被测试样和标准溶液，这两个光能量之比值，就是在一定波长下对于被测试样的透光率（或吸收度）。
本仪器可精密测定具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物、有色物质或在适当条件下能与某些试剂作用生成有色物的物质。
使用前应校正测定波长并按仪器说明书进行操作。
四、仪器的校正
1.波长的准确度试验
以仪器显示的波长数值与单色光的实际波长值之间误差表示，应在±1.0nm范围内。
可用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正。
2.吸收度的准确度试验
3.杂散光的试验
4.波长重现性试验
5.分辨率试验
五、测定方法
1.对照品比较法
（1）按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的100±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度后，按下式计算含量，即得。
（2）计算式
A样×G对/稀释倍数×100×1
含量（%）= ————————————-- ×100%
A对×G样/稀释倍数×100×1
2.吸收系数法
（1）按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。
（2）计算式
A样
含量（%）= ——————————————- ×100%
G样/稀释倍数×(E1％1cm)对×100×1
3.计算分光光度法
采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，波长的微小变化可能对测定结果造成显著影响，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品，如维生素A测定法，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。
六、注意事项
1.空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。
2.测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同瓶溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池。
3.在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收度最大的波长作为测定波长。
4.一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。
5.吸收池应选择配对，否则要引入测定误差。在规定波长下两个吸收池的透光率相差小于0.5％的吸收池作配对，在必要的情况时，须在最终测量扣除吸收池间的误差修正值。
6.由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。
7.仪器的接地必须良好，一切裸露的零件对地电位不得超过24伏（测电笔的氖管不得发亮）。
8.在使用过程中，如需开启试样室盖时或暂时停止测试时，必须及时推入光门钮杆（使光电管前光门关闭），保护光电管，以防止光电管受强光或长时间照射而损坏。
9.在测定时或改测其它检品时，应用待测溶液冲洗吸收池3～4次，用干净绸布或擦镜纸擦净吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨损）。
10.取吸收池时，应拿毛玻璃两面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完后及时用测定溶剂冲净，再用纯化水冲净，用干净绸布或擦镜纸擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防尘保存。
11.若吸收池内外壁沾污，两池差较大的处理。
（1）可用绸布缠在扁竹条外或用脱脂棉缠在细玻璃棒上蘸上乙醇，轻轻摩擦，再用纯化水冲净。
（2）如上述方法处理不好，必要时可用重铬酸钾-硫酸洗液泡洗1～2分钟，用自来水冲净，再用纯化水冲净。
（3）不得用毛刷刷洗或硬物拭擦，以防止表面光洁度受损影响正常使用。
12.请务必注意经常保持硅胶的干燥，目的是保护光学元件和光电放大器系统不致受潮损坏而影响仪器的正常工作，如发现有的硅胶由蓝色变为粉红色，应立即更换。该仪器干燥剂筒有两个：一个是装在放大器暗盒上，另一个装在单色光器暗盒上。
13.在更换硅胶干燥剂时，应关闭切断电源。
14.在停止工作期间，主机试样室内应放入袋装或筒装硅胶干燥剂。用防尘罩罩住整个仪器，并在防尘罩内放数袋防潮硅胶。
15.仪器在操作中，狭缝的宽度应从小逐渐开大。若狭缝过大，由于进入光电管的光能量强度过大，将会使放大器输出信号达到饱和，以至数字显示出溢出（即数字闪烁或示1不变）。这不是仪器有故障。
16.将波长旋转放在625nm，铗缝关闭在0.02nm附近，选择按键恢复在停止工作部位（即三个键均弹出）。
17.搬动仪器时应搬在主体端，不要搬在试样室和光电管盒端以及光源灯室部位，以防止仪器狭缝或光路部件受力而发生变形。并在搬动或运输时，应将可动部分固定，如各旋钮可用胶布贴住，狭缝位置开大些，然后固定，不要关小狭缝，以免运输时振动使狭缝刀口受损坏。
18.仪器的光栅、反射镜绝对不能擦拭，否则将损坏仪器光学表面，增加杂散光。
19.仪器经过搬动请及时检查并纠正波长精度，为保证测定的准确性请经常校准波长精度。如有异常，应立即报告质量保证部，但不得擅自调整，并及时做好记录。
七、结果计算
A
E1％1cm（供试品） = ——
CL
E1％1cm（供试品）
含量（%）= ——————————- ×100%
E1％1cm（标准值或对照品）
八、允许差
仪器分析方法的误差限度，除另有规定外，其相对偏差应在±(2.0～3.0)%。
( 来自网络博客)
Ⅱ 以高纯水为参比测定其吸光度是什么意思
“进行分光光度计调节时，将高纯水推入光路调节100%透光比”这是正确的做法
“水样显色反应后测得到的吸光度减去高纯水作为水样进行显色反映后测得的吸光度”这是正确的原理，lz说的对
Ⅲ 分光光度法测定高锰酸钾溶液的浓度中为什么要用纯化水作参比溶液
纯化水中的杂质等干扰最小。能准确确定高锰酸钾的量。配制高锰酸钾的标准品时也需要用纯化水。
Ⅳ 试剂空白就是以纯水做参比吗
不是这样的，试验中的“空白试验”,系指在不加供试品或以等量溶剂替代供试液的情况下,按同法操作所得的结果。如果是在做污水监测实验时，有空白试验的话，就可以用蒸馏水作为空白试剂了。
Ⅳ 样品吸光度值小于标线范围要怎么处理(用纯水作参比有没有影响)
“进行分光光度计调节时，将高纯水推入光路调节100%透光比”这是正确的做法 “水样显色反应后测得到的吸光度减去高纯水作为水样进行显色反映后测得的吸光度”这是正确的原理，lz说的对
Ⅵ 以纯水做参比 是否要加药品 还是只是纯水
就是用纯水，不加药品。否则就说用标准液做参比了。
Ⅶ 纯水作参比和试剂空白作参比
不同就来在于试剂空白不止含有源水,而还含有其他东西,比如无机盐,缓冲液等,而这些东西都有吸光值,该实验测定的是磷浓度,所以空白试剂必须把样品废水中除了磷以外的有吸光值的杂质因素扣除,而用水的话就没有考虑这些杂质,算出来的其实是磷加上其他有吸光值的杂质的总吸光值
Ⅷ 酚盐光度法
方法提要
氨在碱性溶液中与次氯酸盐生成一氯胺，在亚硝基铁氰化钠催化下与酚生成吲哚酚蓝染料，光度法测定。一氯胺和吲哚酚蓝的形成均与溶液pH值有关。次氯酸与氨在pH为7.5以上主要生成二氯胺;当pH降低至5～7和4.5以下，则分别生成二氯胺和三氯胺;pH在10.5～11.5之间，生成的一氯胺和吲哚酚蓝都较为稳定，且呈色最深。用光度法直接测定时，需加入柠檬酸防止水中钙、镁离子生成沉淀。
本法最低检测质量为0.25μg。若取10mL水样测定，检测下限为0.025mg/L。
单纯的悬浮物可通过0.45μm滤膜过滤，干扰物较多的水样需经蒸馏后再进行测定。
仪器和装置
分光光度计。
具塞比色管10mL。
试剂
本法所用试剂均需用不含氨的纯水配制。
酚-乙醇溶液称取62.5g精制的苯酚(无色)溶于45mL(95+5)乙醇中，保存于冰箱中。如发现空白值增高，应重配。
亚硝基铁氰化钠溶液(10g/L)称取1g亚硝基铁氰化钠(又名硝普钠)溶于少量纯水中，稀释至100mL，贮存于冰箱中。如发现空白值增高，应重配。
氢氧化钠溶液(240g/L)称取120g氢氧化钠溶于550mL纯水中，煮沸并蒸发至450mL，冷却后加纯水稀释至500mL。
柠檬酸钠溶液(400g/L)称取200g柠檬酸钠溶于600mL纯水中，煮沸蒸发至450mL，冷却后加纯水稀释至500mL。
酚盐-柠檬酸盐溶液将3.0mL亚硝基铁氰化钠溶液、5.0mL酚-乙醇溶液、6.5mL氢氧化钠溶液及50mL柠檬酸钠溶液混合均匀。在冰箱中保存，可使用2～3d。
含氯缓冲溶液称取12gNa2CO3和0.8gNaHCO3溶于100mL纯水中。加入34mL30g/LNaClO溶液(又称安替福明)，并加纯水至200mL，放置1h后即可使用。取本试剂1mL用纯水稀释至50mL，加入1gKI及3滴H2SO4，以淀粉溶液作指示剂，用0.02500mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定生成的碘，应消耗5.6mL左右。如低于4.5mL应补加NaClO溶液。两种试剂混合后pH值的校正:加1.0mL酚盐-柠檬酸盐溶液和0.4mL含氯缓冲溶液于10mL纯水中，其pH值应在11.4～11.8，否则应在酚盐-柠檬酸盐溶液中再加入适量NaOH溶液。
铵离子标准储备溶液见81.12.1。
铵离子标准溶液ρ(NH+4)=5.00μg/mL吸取5.00mL铵离子标准储备溶液于1000mL容量瓶中，加纯水稀释至刻度。临用时配制。
校准曲线
于8支10mL具塞比色管中吸取0mL、0.05mL、0.10mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL和4.00mL铵离子标准溶液，加纯水至10mL。各加入1.0mL酚盐-柠檬酸盐溶液，立即加入0.4mL含氯缓冲溶液，充分混匀，静置90min，于波长630nm下，用1cm比色皿，以纯水作参比，测量吸光度，绘制校准曲线:
分析步骤
于每升水样中，加入0.8mLH2SO4，并在4℃保存。如有可能，最好在采样时立即过滤，并加入试剂显色，使测定结果更为准确。
对于直接测定的水样，加H2SO4固定时必须注意酸的用量。一般水样，每升加0.8mLH2SO4已足够，碱度大的水样可适当增加。应注意勿使过量，以免使加显色剂后pH值不能控制在10.5～11.5。
取10.0mL澄清水样或水样蒸馏液，于10mL具塞比色管中，按校准曲线步骤操作测定吸光度，从校准曲线上查出样品管中铵离子的质量。
试剂空白值取10mL纯水，置于10mL具塞比色管中，加入0.4mL含氯缓冲溶液，混匀，静置0.5h，将存在于水中的微量氨氧化分解，然后加入1.0mL酚盐-柠檬酸盐溶液，静置90min，测量吸光度，即为不包括稀释水在内的试剂空白值。
水样中铵离子的质量浓度的计算参见公式(81.9)。
不同形式表示的分析结果，可依照表81.6进行换算。
Ⅸ 分光光度计参比溶液问题
空白溶液是指无色透明、吸光率接近于0的液体，以它作为参比。一般情况下水就完全符合要求 。因为水来源广泛，廉价无毒无腐蚀。所以都用水的。
Ⅹ 分光光度法分析中,为什么要使用参比溶液
一、原理
可见光、紫外线照射某些物质,主要是由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收,而产生化合物的可见紫外吸收光谱.基于物质对光的选择性吸收的特性而建立分光光度法或称吸收光谱法的分析方法.它是以朗伯——比耳定律为基础.
朗伯—比耳定律 A = lg—- = ECLT
式中 A为吸收度；
T为透光率；
E为吸收系数,采用的表示方法是（E1％1cm）,其物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml）,液层厚度为1cm时的吸收度数值；
C为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算）,g；
L为液层厚度,cm.
二、使用范围
凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物,根据在特定吸收波长处所测得的吸收度,可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定.
三、仪器
可见-紫外分光光度计.其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区.主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成.
本仪器是根据相对测量的原理工作的,即先选定某一溶剂（或空气、试样）作为标准（空白或称参比）溶液,并认为它的透光率为100％（或吸收度为0）,而被测的试样透光率（或吸收度）是相对于标准溶液而言,实际上就是由出射狭缝射出的单色光,分别通过被测试样和标准溶液,这两个光能量之比值,就是在一定波长下对于被测试样的透光率（或吸收度）.
本仪器可精密测定具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物、有色物质或在适当条件下能与某些试剂作用生成有色物的物质.
使用前应校正测定波长并按仪器说明书进行操作.
四、仪器的校正
1.波长的准确度试验
以仪器显示的波长数值与单色光的实际波长值之间误差表示,应在±1.0nm范围内.
可用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正.
2.吸收度的准确度试验
3.杂散光的试验
4.波长重现性试验
5.分辨率试验
五、测定方法
1.对照品比较法
（1）按各品种项下的方法,分别配制供试品溶液和对照品溶液,对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的100±10%,所用溶剂也应完全一致,在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度后,按下式计算含量,即得.
（2）计算式
A样×G对/稀释倍数×100×1
含量（%）= ————————————-- ×100%
A对×G样/稀释倍数×100×1
2.吸收系数法
（1）按各品种项下的方法配制供试品溶液,在规定的波长处测定其吸收度,再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量.用本法测定时,应注意仪器的校正和检定.
（2）计算式
A样
含量（%）= ——————————————- ×100%
G样/稀释倍数×(E1％1cm)对×100×1
3.计算分光光度法
采用计算分光光度法应慎重.本法有多种,使用时均应按各品种项下规定的方法进行.当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时,波长的微小变化可能对测定结果造成显著影响,故对照品和供试品测试条件应尽可能一致.若测定时不用对照品,如维生素A测定法,则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定.
六、注意事项
1.空白溶液与供试品溶液必须澄清,不得有浑浊.如有浑浊,应预先过滤,并弃去初滤液.
2.测定时,除另有规定外,应以配制供试品溶液的同瓶溶剂为空白对照,采用1cm的石英吸收池.
3.在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度,以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确,除另有规定外,吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度,并以吸收度最大的波长作为测定波长.
4.一般供试品溶液的吸收度读数,以在0.3～0.7之间的误差较小.
5.吸收池应选择配对,否则要引入测定误差.在规定波长下两个吸收池的透光率相差小于0.5％的吸收池作配对,在必要的情况时,须在最终测量扣除吸收池间的误差修正值.
6.由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收,因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数,再计算含量.
7.仪器的接地必须良好,一切裸露的零件对地电位不得超过24伏（测电笔的氖管不得发亮）.
8.在使用过程中,如需开启试样室盖时或暂时停止测试时,必须及时推入光门钮杆（使光电管前光门关闭）,保护光电管,以防止光电管受强光或长时间照射而损坏.
9.在测定时或改测其它检品时,应用待测溶液冲洗吸收池3～4次,用干净绸布或擦镜纸擦净吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨损）.
10.取吸收池时,应拿毛玻璃两面,切忌用手拿捏透光面,以免粘上油污.使用完后及时用测定溶剂冲净,再用纯化水冲净,用干净绸布或擦镜纸擦干,晾干后,放入吸收池盒中,防尘保存.
11.若吸收池内外壁沾污,两池差较大的处理.
（1）可用绸布缠在扁竹条外或用脱脂棉缠在细玻璃棒上蘸上乙醇,轻轻摩擦,再用纯化水冲净.
（2）如上述方法处理不好,必要时可用重铬酸钾-硫酸洗液泡洗1～2分钟,用自来水冲净,再用纯化水冲净.
（3）不得用毛刷刷洗或硬物拭擦,以防止表面光洁度受损影响正常使用.
12.请务必注意经常保持硅胶的干燥,目的是保护光学元件和光电放大器系统不致受潮损坏而影响仪器的正常工作,如发现有的硅胶由蓝色变为粉红色,应立即更换.该仪器干燥剂筒有两个：一个是装在放大器暗盒上,另一个装在单色光器暗盒上.
13.在更换硅胶干燥剂时,应关闭切断电源.
14.在停止工作期间,主机试样室内应放入袋装或筒装硅胶干燥剂.用防尘罩罩住整个仪器,并在防尘罩内放数袋防潮硅胶.
15.仪器在操作中,狭缝的宽度应从小逐渐开大.若狭缝过大,由于进入光电管的光能量强度过大,将会使放大器输出信号达到饱和,以至数字显示出溢出（即数字闪烁或示1不变）.这不是仪器有故障.
16.将波长旋转放在625nm,铗缝关闭在0.02nm附近,选择按键恢复在停止工作部位（即三个键均弹出）.
17.搬动仪器时应搬在主体端,不要搬在试样室和光电管盒端以及光源灯室部位,以防止仪器狭缝或光路部件受力而发生变形.并在搬动或运输时,应将可动部分固定,如各旋钮可用胶布贴住,狭缝位置开大些,然后固定,不要关小狭缝,以免运输时振动使狭缝刀口受损坏.
18.仪器的光栅、反射镜绝对不能擦拭,否则将损坏仪器光学表面,增加杂散光.
19.仪器经过搬动请及时检查并纠正波长精度,为保证测定的准确性请经常校准波长精度.如有异常,应立即报告质量保证部,但不得擅自调整,并及时做好记录.
七、结果计算
A
E1％1cm（供试品） = ——
CL
E1％1cm（供试品）
含量（%）= ——————————- ×100%
E1％1cm（标准值或对照品）
八、允许差
仪器分析方法的误差限度,除另有规定外,其相对偏差应在±(2.0～3.0)%.