A. 测蛋白用的考马斯亮蓝怎么配的
测蛋白用的考马斯亮蓝配方
称取考马氏亮蓝G250（注意不是R250）50mg，
加95%乙醇25ml溶解，
加85%磷酸50ml，
H2O定容到500ml，
过滤去除少量未溶解物。
4度保存备用。
B. Western中考马斯亮蓝的作用是什么
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2％影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95％乙醇，加入100ml浓磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug／100ul之间绘制标准曲线。
3．将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30rain。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。
C. 请问一下过虑是在配置好后还是稀释完准备用的时候一般过滤的方法是什么配置考马斯亮蓝的一般方法是什么
可以用稀释的臭氧水洗脸吗？ 尽量不要用有化学成分的东西来洗脸 可以选用一些无添加的产品 或用天然的瓜果来进行脸部的修整 再配以适当的按摩 效果会
D. 考马斯亮蓝G-250配制时先加水後加磷酸有无影响
肯定有影响呀，而抄且你这个配方有问题，我们操作的是，100mg的考马斯亮蓝G250溶于50mL95%的乙醇，最好边搅拌边加入85%的磷酸100ML，继续搅拌，溶液变为红棕色，因为考马斯亮蓝的磷酸盐溶液是棕红色的。如果你们先加水再加磷酸，生成考马斯亮蓝的磷酸盐的量会因为溶度被稀释而大大减少，降上述操作得到的母液稀释到1升，稀释后的溶液一定要用双层滤纸过滤，滤液呈棕色，且无悬浮物。一定要过滤，因为稀释后会产生蓝色的悬浮物，另外，你们工作液的浓度很重要，吸光度在0.2～0.8之间为宜，因为太高或太低都不符合BEER定律，我们可以做出0.999的标准曲线，祝你们好运
E. 考马斯亮蓝法测蛋白浓度，具体步骤有哪些，需要什么试剂
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2％影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95％乙醇，加入100ml浓磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug／100ul之间绘制标准曲线。
3．将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30rain。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。
注意：
考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍
三、 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作
（一）、试剂：
1、 考马斯亮蓝试剂：
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
2、 标准蛋白质溶液：
纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。
（二）、器材：
1、722S型分光光度计使用及原理（）。
2、移液管使用（）。
（三）、标准曲线制作：
试管编号 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml标准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考马斯亮蓝试剂 （ml） 5 5 5 5 5 5 5
摇匀，1h内以1号管为空白对照,在595nm处比色
A595nm
1、
2、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
1）、利用标准曲线查出回归方程。
2）、用公式计算回归方程。
3）、或用origin作图 ，测出回归线性方程。即A595nm=a×X( )+6
一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。
4）、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。
（四）、蛋白质含量的测定：
样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。
一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间，所以上述样品如果A595nm值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。
（五）、注意事项：
1、 玻璃仪器要洗涤干净。
2、 取量要准确。
3、 玻璃仪器要干燥，避免温度变化。
4、 对照：用被测物质以外的物质作空白对照。
F. 考马斯亮蓝法以bsa为标准
用标准加入法,必过原点.
酸和水混合后,最好多静置一会,要不测出来的数值会不稳定.
G. 考马斯亮蓝法注意事项！
我刚做过了，刚开始做也是这样的，后来发现我用的考马斯亮蓝是R250，做标准曲线要用G250的，换过之后一次就测出来了，而且R有两个9。
H. 考马斯亮蓝g250为什么要过滤 配制考马思量蓝溶液时要用滤纸过滤,为什么是不是和它的溶解度有关
不过滤会有凝块,其浓度比溶液大,这样给蛋白染色的时候会出现染色不均的现象
I. 关于考马斯亮蓝法的问题
可以都稀释，形成的络合物浓度降低就行，我认为正规操作是稀释原液(或者同时稀释染液，总之是分别稀释，而不是加在一起后再稀释)
J. 考马斯亮蓝g250为什么要过滤
不过滤会有凝块，其浓度比溶液大，这样给蛋白染色的时候会出现染色不均的现象