蛋白超滤离心管与fplc的区别

Ⅰ 超滤离心管浓缩蛋白会损失吗

会有少量损失。取决于缓冲液，滤网的网眼大小和蛋白质的分子量

Ⅱ 有1000分子量的超滤离心管吗

超滤离心管可以用来分离蛋白和聚乙二醇的
聚乙二醇（PEG）是一种分子量很小的试剂，回而超滤管的截留分子量答一般是在3000道尔顿~10000道尔顿之间。绝大多数蛋白可以被截留在超滤管上层，而聚乙二醇可以穿透滤膜到达超滤管下层
所以超滤离心管可以用来分离蛋白和聚乙二醇的离心管就是一个简单的可以承受高转速压力的管子，比如离一些样品，分离出上清沉淀。 离心超滤管会有一个类似于内管和外管的两个部分，内管中是带有一定分子量的膜，当高速离心时，分子量比它小的就漏到下面的管子（即外管）中了

Ⅲ 超滤离心管用材要求

摘要 （1）选择合适的超滤离心管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的产品。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。

Ⅳ 比较FPLC与HPLC

FPLC全称为快速蛋白液相色谱（Fast
protein
liquid
chromatography），其原理与高效液相色谱理论类似，是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论，并且对相体进行了改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。

Ⅳ RNAfree枪头和离心管与普通的有什么区别

应该是RNase free，就是无RNA酶的，提RNA，反转录等实验用的，如果没有用RNase free的管和枪头可能造成RNA被降解，也可以用DEPC水泡普通的枪头和管。

生物离心管介绍

同步骤下离心的目的不一样。开始时DNA溶解在缓冲液里,这时离心后取上清,弃杂质沉淀。后来加盐和冰乙醇后,DNA还有部分RNA将沉淀,这时离心后要弃上清而收集核酸沉淀.足够多的离心有助于提高纯度,但会损失一些DNA。

搅拌和离心的目的是为了将噬菌体蛋白质外壳同侵入大肠杆菌的噬菌体DNA分开，以便对放射性元素跟踪测试。离心会使质量较轻的噬菌体颗粒进入上清液，而被感染的细菌则形成沉淀，但这必须保证是在菌体裂解之前进行。

噬菌体侵染细菌的速度很快，在37度的条件下大约40分钟就可以产生100到300个子代噬菌体。从感染到释放前的这段时间叫潜伏期，大约经历20到30分钟。短时间的保温可获得足够数量的子代噬菌体，但又必须避免超出潜伏期，所以离心要在“短时间”保温后及时进行。

噬菌体侵染大肠杆菌实验中，搅拌、离心的目的是把噬菌体和细菌分离开。用同位素示踪法可验证光合作用产生的氧来自水。蔗糖为非还原性糖，不能和斐林试剂发生反应。酵母菌有氧呼吸和无氧呼吸均产生二氧化碳，故不能根据是否产生CO2。

Ⅵ 超滤离心管怎么使用

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mg/ml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取，否则难度太大，有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中，没过超滤膜，防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管，重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液，将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时，不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗，内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯，加至接近满的MilliQ水，50ml管也加满MilliQ水，将管芯慢慢放入50ml
离心管，排出部分水，然后盖上盖子，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照上述步骤和注意事项，每根管用三四年不会坏。

Ⅶ plc与hplc的窗有什么区别

hplc是高效液相色谱，plc是超高效液相色谱。
hPLC全称为快速蛋白液相色谱，其原理与GX液相色谱理论类似，是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论，并且对相体进行了改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。
近些年以来，在HPLC基础上发展出了新型色谱技术，包括低压液相色谱(LPLC)、中压液相色谱(MPLC)以及快速蛋白液相色谱(FPLC)，在这些新型色谱技术当中，快速蛋白液相色谱(FPLC)可以非常迅速地分离复杂混合物，能够在短时间内对大量样品加以纯化。其特性表现为较大的容量、较高的回收效率以及不易失活的生物大分子等。能够越来越广泛地使用于生命科学研究及药物生产上。由耐高压的塑料管组成FPLC的管道系统，由柱塞式泵驱动流动相，中低压，使用内径较大的色谱柱，分析精度较高，0～100mL/min(Z大流速可达1000mL/min)为流速范围，分析精度低于HPLC，仅使用常规无机盐溶液，对于大规模纯化样品非常适用。

Ⅷ 超滤离心管能分离蛋白和聚乙二醇吗

超滤离心管可以用来分离蛋白和聚乙二醇的
聚乙二醇（PEG）是一种分子量内很小的试剂，而超滤管的容截留分子量一般是在3000道尔顿~10000道尔顿之间。绝大多数蛋白可以被截留在超滤管上层，而聚乙二醇可以穿透滤膜到达超滤管下层
所以超滤离心管可以用来分离蛋白和聚乙二醇的

Ⅸ 如何判断蛋白质是单体还是二聚体

可以通过非变性电泳来判断蛋白质是单体还是二聚体，非变性电泳就是Native-PAGE，区别于正常的SDS-PAGE就是不加入SDS 和疏基乙醇等变性剂的条件下，对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。根据Native-PAGE跑出的蛋白分子量与理论分子量对比可以判断是否为单体还是二聚体。
一般是分别测定天然蛋白的分子量和亚基分子量，除一下就知道了。测定亚基分子量就用SDS-PAGE。这时蛋白质是变性的，亚基分开。测定寡聚蛋白分子量可以用分子筛层析，有专门的层析用的marker，根据洗脱体积计算分子量。如果收集各个组分去跑SDS电泳的话，得到的是亚基分子量。
要用非变性电泳测分子量也可以，但比较麻烦。因为非变性条件下，电泳速度与分子形状、电荷和分子量都有关系，分子形状好办，电荷难办。所以需要在不同凝胶浓度下，确定出蛋白的Rf值，绘制曲线来计算分子量，所以不推荐。

Ⅹ 求助：第一次使用超滤离心管应该怎么处理

可能不同厂家的产品保存运输条件不一样。
如果有甘油等保护剂，那就一定要洗干净再加样品。版权
干的超滤管也要先润湿再用，否则可能不能完全利用膜面积。
最好，用样品buffer润洗下再加样，最大程度保证蛋白活性。尤其是用过后保存在NaOH或乙醇中后。
一般还是离心机甩一下好，使膜充分浸润。

降低吸附的办法有：
1，蛋白浓度不要过低
2，尽量选用纤维素的低吸附超滤管
3，用前可以用Tween 80等去垢剂润洗（不影响蛋白活性的前提下）
4，加入保护蛋白，如BSA(不影响蛋白后续使用的前提下)

用完保存在20% EtOH中，4C保存，防止长菌，依不同样品可以重复使用不同的次数。