质粒提取为什么用纯水

1. 为什么能在细菌破碎后的细菌提取液中分离到质粒DNA

首先要知道，质粒是 共价，闭合，环状的DNA（cccDNA）。以常用的碱裂解法为例：
当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒的cccDNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，而其他形式存在的DNA则会依然以絮状形式存在；离心时质粒DNA留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。

2. 质粒提取加的是什么水

到了这一步基本没太大影响了，跑完电泳看下条带，DNA又不是RNA那么脆弱，只要条带对应该就没问题，按步骤切胶回收就可以了

3. 用TE稀释质粒与用超纯水稀释有什么不一样的

正如楼上所说，来TE溶液有利于源保证核酸物质的稳定性，但我猜测你想知道其中的道理。我做补充如下：1）T（tris）是弱碱性，不容易导致核酸水解（DNA在酸性下更易自行水解）；2）E（EDTA）可螯合DNA 水解酶的辅酶镁离子，抑制DNase活性，阻止DNA被酶解。但由于TE（主要是E）对一些 精密实验 比如酶切 甚至PCR 有负面影响（也作为酶的抑制剂），多使用很稀的TE 如0.1X 的TE作为buffer。
我们实验室做法：若很短时间就用掉的DNA溶液 就用纯水溶解直接做实验， 此时DNA没时间降解；若是长时间要保存的 就用10倍稀释的TE保存成浓的DNA溶液，用前稀释一下降低EDTA的影响。 供参考，祝顺利！

4. 用TE稀释质粒与用超纯水稀释有什么不一样的

和ddH2O相比，TE溶液有利于保证核酸物质的稳定性，便于长时间的保存。个人经验：TE配置不合格的话会影响下游的一些操作，一般都是直接用ddH2O。

5. 细菌提质粒最后一步为什么要加入无rna酶得水.

只要是纯水就可以了，在无金属离子辅助下，DNA酶一般不起作用。
要没RNA酶，可能是为了之后的实验考虑吧。。。

6. 什么情况下需对提取的质粒进行纯化

在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高纯度、高浓度的质粒DNA，为此需要大量提取质粒DNA。大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化，常用柱层析法和氯化绝梯度离心法。
另外，碱法提取的质粒DNA即使用RNA酶处理，仍会含有少量RNA。当有些试验需无RNA污染的DNA制品时，则需进行进一步纯化。一般常用Sepharose2B或Sepharose4B进行纯化。

7. 质粒提取的基本原理

质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
实验原理
提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。详细内容请参考《分子克隆实验指南》。[1] 另外，复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章，提供了质粒提取机理的详细解说。
碱裂解法
人们使用碱与SDS裂解法从E. coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。
尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。当用K+取代Na+时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。
在SDS存在的条件下，碱水解是一项非常灵活的技术，它对E. coli的所有菌株都适用，并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL以上。
煮沸法
煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到100℃使其裂解。加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA变性。但是。闭环质粒DNA链彼此不会分离，这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。当温度下降后，闭环DNA的碱基又各就各位，形成超螺旋分子，离心除去变性的染色体DNA和蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。煮沸裂解法对于小于15kb的小质粒很有效，可用于提取少至lmL（小量制备），多至250mL（大量制备）菌液的质粒，并且对大多数的大肠杆菌菌株都适用。但对于那些经变性剂、溶菌酶及加热处理后能释放大量碳水化合物的大肠杆菌菌株，则不推荐使用该法。这是因为碳水化合物很难除去，会抑制限制酶和聚合酶活性。若碳水化合物的量很大，在CsCl-溴化乙锭梯度离心中会使超螺旋质粒DNA带变得模糊不清。大肠杆菌菌株HBl01及其衍生菌株（其中包括TGl）能产生大量的碳水化合物，不适于用煮沸法裂解。
质粒小提试剂盒
用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取，它结合了优化的碱裂解法，以及方便快捷的硅膜离心技术，具有高效，快捷的特点，能在30min内完成全部操作。利用试剂盒能从1-5mL过夜培养的大肠杆菌菌液中纯化得到10-40μg高质量的质粒DNA（OD260/OD280=1.7-1.9），此质粒DNA可直接用于DNA序列分析，各种酶促反应，PCR以及部分细胞系的转染等。

8. 提取质粒的实验中，为什么加入溶液二溶液变得粘稠了

原因：当改变的DNA和蛋白质加入溶液II，细菌溶解，蛋白质和DNA变性和溶解。这使得整个溶液非常粘稠，拉出了丝。

将溶液添加到基础处理中。NaOH主要用于裂解细胞和释放DNA，因为在强碱性条件下，膜由双层膜结构转变为微胶囊结构。SDS与NaOH配合使用，增强NaOH的强碱性，SDS作为阴离子表面活性剂，破坏脂质双层膜。

这一步的注意事项：

首先，不要太久，因为基因组DNA片段在这样的碱性条件下会慢慢分解。

第二，加入溶液2后，操作一定要轻柔，剧烈混合会导致基因组DNA污染。

(8)质粒提取为什么用纯水扩展阅读：

注意事项：

1、 洗脱缓冲液在60℃洗脱时，洗脱缓冲液或去离子水效果更好。

2、 细菌应该完全悬浮。如果菌体没有完全悬浮，加入溶液II后，剩余菌体将成为难以完全分解的菌体。加入溶液III后，仍有一部分蛋白质残留在溶液中，成为蛋白质残渣的最大来源。

3、测量DNA溶液体积，按lg/ mL准确加入固体CsCl，加热至30℃溶解。轻轻地混合溶液直到盐溶解。

9. 质粒抽提实验中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各有什么作用

溶液Ⅱ主要成分为氢氧化钠(NaOH)和SDS。DNA在pH5～9的溶液中是稳定的，但当pH＞12或pH＜3时，就会引起DNA双链之间氢键的解离而变性。溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L，加入溶液Ⅱ后，该系统的pH为12.0～12.6，因而促使染色体DNA与质粒的变性解离成单链。SDS是一种阴离子去垢剂，它的主要作用有：①溶解细胞膜上的脂肪与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜；②解聚细胞中的核蛋白，使蛋白质与DNA分开；③SDS能与蛋白质结合成为SDS-蛋白质复合物，使蛋白质变性而沉淀；④SDS能抑制核酸酶的作用，防止对DNA的降解。
(3)溶液Ⅲ的主要成分为KAc(pH4.2)。用pH4.2的KAc溶液是为了调整溶液pH至中性，使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。而高盐的3mol/L醋酸钾(KAc)有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白质复合物凝聚而沉淀。

10. DNA可不可以溶于水啊

DNA可溶于水。我们提取质粒很多时候是直接用纯水溶解的。

楼上不要乱说。