反相色谱柱为什么不能用纯水

A. 色谱柱为什么不能用水洗

你说的太笼统，到底是气相色谱柱，还是液相色谱柱？是其中的哪一类型的？
有的色谱柱是可以用水洗的，这要看固定相的类型。

B. 何为正相色谱及反相色谱在应用上有何特点

正相色谱基本上可以看作液固吸附色谱。其柱填料为吸附剂，表面有活性吸附点。溶剂和溶质分子可以吸附在活性中心。反相色谱是流动相极性大于固定相极性的色谱。

反相色谱的应用特点：反相介质性能稳定。分离效率高，它能分离蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾体、脂类、脂肪酸、碳水化合物、生物碱等含有非极性基团的物质。

正相色谱法的应用特点：全多孔型的微球型或无定型硅胶，然而，球形硅胶更适合于有效分离。用球形硅胶填充的正相柱具有较好的渗透性、较低的操作压力和较好的稳定性。

(2)反相色谱柱为什么不能用纯水扩展阅读：

反相色谱中最常用的有机溶剂有甲醇和乙腈。此外，乙醇、四氢呋喃、异丙醇和二氧六环等常用作改性剂。有机溶剂的梯度也会影响分辨率。梯度越小，分辨率越大。

正相色谱的保留机理类似于吸附过程。极性样品分子和溶剂分子吸附在柱填料表面的极性基团（吸附剂）上。对于常用于正相的氰基、氨基或二醇基固定相柱，吸附中心通常为键合配体或硅烷。在使用硅胶时，吸附位点为硅烷醇(一SiOH)。

C. 苯基键合硅胶色谱柱柱为什么不能用纯水冲洗

这个问题比较难回答。因为注意的东西比较多，比如：
首先是色谱柱的方向问题。大多数色谱柱会标明方向。这个傻子都知道，安装的时候要顺着方向安装。不过也有一些色谱柱没有方向，这些是双相填料的色谱柱。第一次使用时的方向就是它的方向。不过所有的色谱柱都是，一旦开始使用，就不要转换方向。这样会损毁色谱柱。
第二个是柱压问题。一般的色谱柱压力最好不要超过20MPa，压力过高会加速损毁色谱柱。
第三，柱温。色谱柱温度最好不要超过45℃。也是会加速损毁色谱柱。
还有pH值。色谱柱的pH值范围是不同的。大多数色谱柱的pH值范围是4-7左右。有些偏向酸性，有些偏向碱性的，还有一些pH值广泛的。这些按照说明书操作即可。
除此之外，色谱柱还有别的一些需要注意的事情。
首先，键合硅胶色谱柱分成几种。比如C18、C8、苯基柱这些的使用方法都差不多。是反相色谱柱。它们的流动相中还有大量的水，还有无机盐。这个时候需要注意，无机盐是不能够长时间留在色谱柱里面的。色谱柱最好保存在纯甲醇或者纯乙腈里面。但是无机盐不能溶于纯甲醇或者纯乙腈。所以中间要过渡甲醇水或者乙腈水。
而有些色谱柱比较特殊，比如氨基柱、氰基柱。他们是可以用于正相，也可以用于反相。所以使用的时候注意区分。配置流动相的时候也避免使用大量的水相。
其他的暂时想不到。或者说你想问的问题可以提出来，大家讨论讨论。

D. 纯水是否能通过高效液相色谱柱

看是什么柱子，有一些做糖的柱子就是要求纯水做流动相的。但一般的C8或C18柱子不行，要求最少5%有机相，以防对色谱柱伤害

E. 为什么普通C18色谱柱不能用纯水冲洗

容易引起疏水坍塌，把强保留物质冲出来，会毁了柱子的，所以水相不能超过95%，最开始的梯度淋洗也是高
有机相
到高水相，但是不是纯水相。

F. 如何反向冲洗液相色谱柱

转载”《分析测试网络网》实用资料！色谱柱冲洗一点意见！！

主要针对的反向色谱柱而讲！

1.色谱柱简介

最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性添充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等)也有使用,正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子交换色谱;凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱;手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。

填充剂的性能(如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等)以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。孔径在15nm(1nm=10埃)以下的填料适合于分析分子量小于 2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用PH2~8的流动相。当PH大于8时，可使载体硅胶溶解;当PH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用PH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包裹聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等;当需使用PH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。

2.色谱柱的冲洗体积确定

一般情况都是冲洗色谱柱10-20倍柱体积，具体可以这样计算，根据柱内径和柱长算出色谱柱内体积。短柱一般时间就是30分钟、长柱一般冲洗60分钟就可以了。举例：内经为4.6mm、长250mm，其柱内体积=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分钟，折中取15被柱内体积，则冲洗时间就出来了。

3.色谱柱冲洗

冲洗色谱柱最好在分析结束后，用流动相冲洗到基线平稳，然后用10%左右的有机溶剂冲洗色谱柱，主要是冲洗干净流动相中的缓冲盐。然后用100有机溶剂冲洗。最好是梯度变化冲洗。分析物可能为一些能溶解在水中，有些需要用纯溶剂才能完全去除。如果分析时间紧迫一定要把盐分冲洗干净，一般情况不要用纯水冲洗色谱柱，特别是反向柱的填料的键合集团容易折断，对色谱柱造成损伤。色谱柱被使用在某种程度上就是开始被污染了，所以色谱柱的寿命和我们使用的情况有很大的关系。虽然被污染但是对我们分析目标物没有造成影响我们也就是认为还能用。

4.色谱柱维护冲洗

常见故障筛板阻塞，解决办法是：a、过滤流动相;b、过滤样品;c、运用在线过滤或保护柱。

柱头塌陷解决方法是：：a、避免使用PH>8的流动相(针对大部分硅胶的柱子);b、使用保护柱 ;c、使用预柱(饱和色谱柱)。

前面谈到的不管用什么溶剂一定要加入一定比例的用机溶剂，主要是考虑到一些疏水基团在有机溶剂里面容易伸展利于冲洗其包藏的杂质等。当我们的色谱柱在压力和柱效下降时，我可以拆开泵近端柱头的螺丝取出筛板，清洗筛板以及观察里面的填料，如填料污染严重，就要进行挖取一部分被污染的填料然后用其他废弃的柱子相同填料来填补，用新的筛板或清洗好的筛板拧好螺丝。然后冲洗观察柱压变化和测试柱效等。

5.特殊冲洗
强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰形变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多样品特别是复杂样品而言，很难判断其是否含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈清洗色谱柱。

清洗方法：

1.未使用缓冲盐：每天分析完成后，用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。

2. 使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱 60min。

3.补救方法：

水——乙腈——氯仿(或异丙醇)——乙腈——水

每一步以 1.0ml/min 流速反向冲洗色谱柱 60min。

希望大家提出更好的建议和办法。

朋友可以到行业内专业的网站进行交流学习！
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G. 在冲洗高效液相C18反相柱的时候，为什么不能用纯水

相C18色谱柱（即憎水柱子）如果用纯水冲洗后，如果立即停泵则由于其憎水（疏水专）的缘故使得柱子内属的水因而流失掉，长时间停泵使得柱子干掉（变干），会造成柱子内固定相填料表面键合的硅烷基结构塌陷（也说成是失去支撑倒下），柱子就这样报废了。那么一旦冲洗柱子用了纯水相怎么办呢？诶！不要惊慌，只要你不停泵，上述情况不会立即发生，我们只要保证最后用有机相冲洗柱子，停泵后使柱子内留存的是有机相，就无大碍，

H. 离子色谱柱能用纯水冲洗吗，这样是否会影响柱子的性能。

按看说明书或咨询色谱柱厂商，防止损害色谱柱，离子柱都不便宜，小心为上。
用纯水短时间内冲洗色谱柱，通常不会对色谱柱造成较大的损伤，但如果长时间用水冲洗色谱柱则
可能引起固定相流失和相塌陷现象，所以若非必要请尽量避免用纯水冲洗色谱柱，建议在水中加入一定
量的甲醇或乙腈进行冲洗，通常水的含量<90%不会对色谱柱造成任何影响。
原因分析：
首先，由于目前所用的色谱柱大多以硅胶为基质，硅胶的溶解特点是在纯水中的溶解度比在含有一
定浓度有机溶剂的流动相中要大得多，所以长时间的用纯水冲洗会导致固定相的流失，引起柱效下降。
其次，对于常规的 C18 柱而言，由于C18 长链与水是不互溶的，C18 长链之间的相互作用力大于
C18 与水分子的作用力，长时间的用水冲洗，使得C18 长链之间相互靠近，水流的冲刷，导致相互联结
的C18 长链倒伏在硅胶基质的表面，对疏水性物质的保留能力下降，即相塌陷。针对用纯水冲洗容易出
现相塌陷的现象，有些厂家推出了纯水柱（如我公司的UltimateTM AQ-C18 柱），这种纯水柱可以用纯
水作流动相而不会产生相塌陷，这对只溶于纯水的样品的分析提供了一个很好的选择。
第三，如使用过含缓冲盐的流动相的色谱柱，用纯水冲洗，并一定能将缓冲盐完全洗去。因为，由
于缓冲盐难溶于有机溶剂，C18 反相柱中用的填料是在硅胶表面上接上许许多多的C18 长链，相当于一
个疏水的有机相，而硅胶基体被有机物质包裹着，所以用纯缓冲盐水溶液做流动相时也许缓冲盐不容易
到达硅胶基质，不至损害基体。但所用的流动相通常会含一部分有机溶剂，而且这些有机溶剂与C18
长链是互溶的，因此有机溶剂的加入增强了流动相渗入硅胶基质的能力，能使部分缓冲盐达到硅胶基质。
同样的道理，用纯水冲洗只能洗掉表面的缓冲盐，而渗入深处的缓冲盐则仍然残留在那里。所以最好在
水中加入部分有机溶剂进行冲洗，一般的C18 柱通常用含水20％～90％都可以，含水的比例要视分析
时使用的流动相来定，原则上，用于冲洗的流动相中水的比例应该等于或高于（缓冲盐用后清洗的情况，
推荐使用“等于”）分析时所用流动相中水的比例。

I. 反相与正相色谱法有何区别

反相还是正相，是根据流动相相对于固定相的极性而言的。 流动相极性强于固定相的，称作反相色谱；流动相极性弱于固定相的，称作正相色谱。

反相色谱流动相的极性强，容易带着极性分子走，而留下非极性分子。这主要用于非极性样品的分离。常用的高压液相色谱都是这种，也有人喜欢说反相液相色谱，其实是一个意思，就是显得博学一点。
正相色谱固定相极性强，容易把极性分子留下，故主要用于极性样品的分离。如离子色谱。

实际应用好像没有太注意正相还是反相，倒是都很注意柱子能承受什么样极性的物质。反相液相色谱柱不可以用强极性的纯水，都是要加入至少5%的有机溶剂来弱化水的极性。 正相的离子色谱柱则坚决不可以进入有机物质。但是气相色谱实际也是一种正相色谱，却往往要求不可以有水进入。

J. 液相色谱里面能只用水做流动相吗

这个得看你的色谱柱。
一般的反相色谱柱不耐纯水。如果用的话会特别费。专
我当初做过属一个实验，流动相是0.025mol/L的KH2PO4，色谱柱是C18柱，大概半个月换一根吧。
特殊的色谱柱可以耐受纯水，但是可能分离效果不好，峰型也不一定好。

另外，纯水很 容 易 长微生物。一般纯净水开瓶之后在25℃放置1天，过滤的速度就会缓慢，放三天就浑浊了。如果你的流动相是纯水，那么系统、色谱柱很容易堵塞。所以不建议使用。